反应停对小鼠体内肿瘤及瘤内微血管密度的影响.pdf
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1、 5 5 医学研究 反应停对小鼠体内肿瘤及瘤内 微血管密度的影响 任 亮, 王 萍, 常陆林 漂河医学高等专科学校漂河市 4 6 2 0 0 2 摘要目的 观察反应停对小鼠 体内 不同 肿瘤及瘤内 微血管密度的影响。方法建立小鼠实体型与腹 水型肿瘤的 模型, 观察反应停琦小鼠S , , 及H 22 肿瘤生长的影响, 同时采用免疫组化检脸的方法, 检测反应停对 实体型肿瘤组织中 微血管密度的影响。结果 反应停对实体型种瘤呈现别量依箱性生长抑制, 随剂量增加, 对 照组抑制率为4 1 . 3 7 %, 反应停组分别为2 8 . 2 7 %, 1 4 . 8 8 %。对腹水型肿瘤无生命延长作用。对实
2、 体瘤微血管的 密度, 反应停呈现出剂量依赖性降低的作用。结论反应停对实体型肿瘤生长有抑制作用, 此作用与反应停抑 制肿瘤组织的微血管生成有关。 关键词反应 停; S , 及H , ; 微血管密 度 中图分类号: R - 3 3 2文献标识码: A文章编号: 1 6 7 2 - 3 4 2 2 ( 2 0 0 7 ) 0 4 - 0 0 5 5 - 0 2 反应停( T h a l i d o m i d e ) 又称酞胺呱陡, 起初是 治疗晨起呕吐的一种镇静止吐药物, 但很快因严 重的 致畸作用被市场淘汰川。 近年来的研究表 明, 反应停具有抗肿瘤作用, 尤其对多发性骨髓瘤 具有 较 好的临
3、床治疗效果幻 , 本实验主要是观察 反应停对小鼠体内不同肿瘤生长的影响, 以及使 用反应停后实体瘤瘤内组织微血管密度的变化情 况, 探索反应停的抗肿瘤作用与抗微血管生成作 用的关系。 1 材料与方法 1 . 1 实验材料昆明小鼠( S P F 级) , 6 , 2 0 - 2 3 g ( 河南省医学实验动物中心提供, 动物合格证号: 医 动字第4 1 0 1 1 5号) 。小鼠肉瘤S is o , 小鼠 肝癌 H n 由 河南大学药学院细胞室提供。 反应停片剂, 江苏常州制药厂生产, 批号2 0 0 3 0 3 0 2 0 胰酶, 抗V m 因 子多克隆抗体, 羊抗兔I g G一 H R P
4、, 华美生物技 术公司 产品。 其余为分析纯。电子天平, E S 一 C 系列, 长沙湘仪天平仪器厂。 1 . 2 肿瘤模型的建立与给药 S , e o 和H 22 分别接 种于昆明小鼠体内, 取接种8 一 1 0 d 生长良 好的小 鼠 腹水, 稀释为5 x 1 0 6 / m l 。实体型模型以0 . 2 m V 只接种于小鼠右侧腋窝皮下, 腹水型模型以 0 . 2 m l/ 只 接种于 小鼠 腹腔 3 1 。 对接种肿瘤的 实体 型模型的昆明小鼠按体重分为4 组, 小鼠每组 1 6 只。 正常对照组: 灌胃 生理盐水; 反应停高剂 量组: 灌胃反应停4 0 0 m g / ( k g “
5、 d ) ; 反应停中剂 量组: 灌胃 反应停2 0 0 m 酬( k g “ d ) ; 反应停低剂 量组: 灌胃反应停 1 0 0 m g / ( k g “ d ) 。各组小鼠接 种肿瘤后次日 开始给药, 灌胃 容积为0 . 2 m V 1 0 g , 每日1 次, 连续8 一 1 0 d 。 全程给药结束后次日, 处 死动物, 称取鼠重、 瘤重, 按以下公式计算抑瘤 率: 抑瘤率二 ( 正常 对照组瘤重均值一 用药组瘤 重均值) / 正常对照组瘤重均值 x 1 0 0 %。当抑瘤 率 4 0 %, P 7 5 %, P 0 . 0 5 时为生命延长有意义。 1 . 3 反应停对瘤内微血
6、管密度的影响 取部分肿 瘤组织, 1 0 %中 性甲 醛溶液固 定, 常规制作石蜡切 片。切片常规脱蜡, 0 . 0 7 5 %的胰酶消化, P B S 洗3 次, 3 %双氧水甲醇溶液室温作用3 0 m i n 。纯化水 洗3 次, 0 . O l m构椽酸盐缓冲液中抗原热修复。 T B S ( p H = 7 . 5 ) 洗3 次, 含5 %脱脂奶粉的T B S 室 温封闭 I h , 加抗v ia因子多克隆抗体室温孵育 1 . 5 h o T B S 洗3 次, 加羊抗兔I 解 一 H R P 室温孵育 1 . 5 h o T B S 洗3 次, D A B 显色液室温下显色5 m i
7、n , 按文献 标准判断微血管数6 : 先用低倍镜( x 4 0 ) 选取3 个血管密度高的区域, 再转到高倍镜( x 2 0 0 ) 下计数每个区域4 个视野的平均微血管数 ( 凡是染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇 均作为一个血管计数) 。 2. 1 结果 反应停对小鼠S , so , H 22 实体型及腹水型肿瘤 5 6 表1 反应停对小鼠 实体型肿瘤生长的 影响( n二1 6 ) z t s 一 一 组别 剂量 ( m g / k g ) 鼠重( 9 )瘤重( B )抑瘤率( %)鼠重( 9 )瘤重( 9 )抑瘤率( %) 对照组 4 0 0 反应停组2 0 0 1 0 0 3 1
8、. 811 . 8 6 3 1 . 1土1 . 7 7* 3 1 . 1 11 . 7 1 3 1 . 5士1 . 9 7 2 . 7士 0 . 3 4 1 . 6土 0 . 2 2, , 2 . 0士0 . 3 3. 2 . 3士0 . 2 9 4 0 . 1 2 2 6 . 5 4 1 6 . 0 5 3 3 . 1士1 . 6 7 3 2 . 6士1 . 6 3 3 2 . 711 . 6 2 3 2 . 6士1 . 以】 2 . 8 1 0 . 3 6 1 . 61 0 . 2 7, 4 1 . 3 7 2 . 0 1 0 . 3 6.2 8 . 2 7 2 . 4 1 0 . 3 5
9、 1 4 . 8 8 注: 与对照组比 较, P 0 . 0 5 , P 0 . 0 1 表 2 组别 剂量 ( - g / k g ) 反应停对小鼠腹水型肿瘤生命延长率的 影响( n=1 6 ) z 土 , S t s o H n 生存时间( d )生命延长 率( %)生存时间( d )生命延长率( %) 对照组 礴 阅 反应停组2 0 0 1 0 0 1 3 . 2士1 . 1 1 巧. 2 12 . 7 6 1 4 . 0土1 . 7 1 1 3 . 811 . 5 3 1 4 . 00 6 . 0 6 4 . 8 0 1 3 . 4 t 1 . 2 4 1 5 . 9 12 . 6 4
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- 反应 小鼠 体内 肿瘤 微血管 密度 影响
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