动脉粥样硬化兔血管内皮功能与黏附分子VCAM-1表达关系的研究.pdf
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1、第1 7 卷第3 期 2 0 0 7 年2 月 中国现代医学杂志 C h i n a J o u rna l o f M o d e rn M e d i c i n e V o l . 1 7 N o . 3 F e b . 2 0 0 7 文章编号: 1 0 0 5 - 8 9 8 2 ( 2 0 0 7 ) 0 3 - 0 3 0 9 - 0 3 论著 动脉粥 样硬化兔血管内 皮功能与 iZE . 附分子 V C A M - 1 表达关系的研究 杨 ( 中国医科大学附属第 欣, 任卫东, 马 一医院 心功能科 娜 , 辽宁 沈阳 1 1 0 0 0 1 ) 摘要: 目 的 探讨高分辫超声
2、检测动脉粥样硬化( A S ) 兔内 皮功能与私附分子V C A M - 1 表达的关系。方 法日 本大 耳白 兔2 7 只, 对照组( A组) 6 只, 动脉粥样硬化模型组( B 组) 2 1 只, 各随机分为3 个亚组, 分别 喂养4 , 8 和1 2 周。超声检测兔血管内皮依赖性舒张功能( E D D) 和血管内 皮非依赖性舒张功能( N E D D ) , 并 同时应用免疫组化方法检测了V C A M- 1 表达。结果 B 1 组脂纹期E D D减低, V C A M- 1 表达量最多, 主要表 达于内 皮细 胞表面 。 在B Z 组进展期病变中, E D D进一步减 低, 整个组织内
3、 均有V C A M- 1 表达。 在B 。 组粥样斑 块时, E D D更进一步减低,同时N E D D也出 现损伤, V C A M- 1 主要以平滑肌细胞表达为主, V C A M- 1 在正常 状态下呈 低表达。 结论 E D D损伤与内 皮细 胞V C A M - 1 的表达有关, 而N E D D损伤与平滑肌细胞V C A M- 1 表达有关。 关键词: 动脉粥样硬化; 内 皮功能; V C A M- 1 ; 兔 中图分类号: R - 3 3 2文献标识码: A S t u d y o f v a s c u l a r e n d o t h e l i a l f u n c
4、t i o n a n d VC AM- 1 i n a t h e r o s c l e r o t i c r a b b i t s Y A N G X i n , R E N We i - d o n g , M A N a ( D e p a r t m e n t o f H e a r t F u n c t i o n , t h e F i r s t A f fi l i a t e d H o s p i t a l , C h i n a M e d i c a l U n i v e r s i t y , S h e n y a n g , L i a o n i
5、 n g 1 1 0 0 0 1 , P . R . C h i n a ) A b s t r a c t : O b j e c ti v e T o s t u d y t h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n t h e v a s c u l a r e n d o t h e li u m f u n c t i o n a n d V C A M - 1 i n a t h e ro s c l e ro t i c r a b b i t s d u r i n g d if f e re n t f e e d in g t i
6、m e . ( Me t h o d s T w e n t y s e v e n J a p a n e s e w h i t e b i g r a b b i t s w e r e f e d w i t h n o r m a l f e e d ( c o n t r o l g r o u p ) o r f e d w i t h c h o l e s t e ro l d i e t f o r 4 , 8 a n d 1 2 w e e k s . E D D ( e n d o t h e li a l d e p e n d e n t d i l a - t i
7、 o n ) a n d N E D D (n o n - e n d o t h e l i a l d e p e n d e n t d i l a t i o n ) w e re m e a s u r e d w i t h h i g h r e s o l u t i o n u l t r a s o u n d . T h e e x p re s s io n o f V C A M - 1 i n E I A w e r e c h e c k e d w i t h i m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n
8、 g t e c h n i q u e . R e s u l t s I n B , g r o u p a n d V C A M - 1 e x p r e s s e d m a i l y o n t h e s u r f a c e o f e n d o t h e li a l c e ll s . I n B , g r o u p E D D d e c re a s e d p r o g re s s iv e l y a n d V C A M - 1 e x - p re s s e d i n t h e w h o l e t i s s u e . I n
9、 B 3 g r o u p E D D a n d N E D D a ll d e c r e a s e d a n d V C A M - 1 e x p r e s s e d i n s m o o th m u s c l e c e ll s . C o n c l u s i o n E D D d a m a g e i s r e l a t e d t o t h e e x p r e s s i o n o f V C A M - 1 o n t h e e n d o t h e li a l c e l l s . N E D D d a m a g e is
10、r e l a t e d t o t h e e x p r e s s i o n o f V C A M - 1 i n th e s m o o th m u s c l e c e ll s . K e y w o r d s : a t h e r o s c l e r o s i s ; e n d o t h e li a l f u n c t i o n ; V C A M - 1 ; r a b b i ts 本研究运用高分辨超声及免疫组化方法同步观 察动脉粥样硬化( A S ) 兔的左骼外动脉( L E I A) 内 皮功能及V C A M - 1 的表达, 旨 在探
11、讨两者的 关系。 1 材料与方法 1 . 1 动物模型的制备 日 本大耳白 兔2 7 只 【 中国医科大学实验动物 部提供, 许可证号: S Y X K ( 辽) 2 0 0 3 - 0 0 1 3 , 雌雄不 限, 随机分为对照组( A组) 6 只, 动脉粥样硬化模 型组( B 组) 2 1 只, 各随机分为3 个亚组( 对照组每 收稿日 期: 2 0 0 6 - 0 9 - 2 1 随讯作 者 I : 任 卫东, E - m a il : re n w d u m n e t 3 0 9 中国 现代医学杂志第 1 7 卷 个亚组2 只, 模型组每个亚组7 只) , 分别喂养4 周 ( A
12、, B , ) , 8 周( A I B 2 ) , 1 2 周( A , B 3 ) 。A组喂普通颗 粒饲 料。 B 组, 每日 喂2 g 胆固 醇。 1 .2 骼外动脉内皮功能的测量 应用H p 5 5 0 0 彩 超 仪, 探头 频 率3 - 1 0 M H z , 检 查条件“ 下肢动脉” 设置。分别于4 , 8 和1 2 周对两 组动物进行如下检查。 兔麻醉后, 仰卧位固 定, 连接 心电图。于兔左腹股沟靠腹侧纵行检查L E I A , 于骼 总动脉分叉后至少获得长轴1 .5 c m血管显像后, 于 T波末测定其内径 ( D ) a先测量基础状态内径 ( D , ) , 然后使用止血
13、带扎住兔左下肢中下段, 加压 至2 8 0 m m H g , 持续5 分钟后迅速放气, 放气后3 0 - 6 0 s 内记录L E I A内径为D ; 。 动物休息1 5 m i n 后, 舌 下滴 服硝酸甘 油0 . 1 2 5 m g / k g , 2 , 3 m in 内 记录L E I A 内径为D Z ,血管内皮依赖性舒张功能( E D D) = ( D ,- D o ) / D o x 1 0 0 % 。血管内 皮非依赖性舒张功能 ( N E D D ) =( D 2 - D , ) / D o x 1 0 0 %, 1 . 3 血脂测定及病理学检查 处死前采静脉血, 测血清总
14、胆固醇( T C ) 、 高密 度脂蛋白胆固醇( H D L - C ) 、 低密度脂蛋白胆固醇 ( L D L - C ) 。 处死后取出 骼外动脉H E 染色光镜下观 察。 1 .4 免疫组织化学 动脉组织石蜡切片一 2 0 丙酮固定5 m in , 然后 按照免疫组织化学A B C 法进行组织染色, 一抗采用 抗兔V C A M - 1 多克隆抗体( 武汉博士德生物工程有 限公司提供, 1 : 2 0 0 稀释) 。 用 D A B 显色, 苏木精衬- 染, 封片后在显微镜下观察。 另设P B S 阴性对照组。 胞膜或胞浆处有棕黄色或棕褐色颗粒状物质, 呈网 格状或环状沉淀者为阳性细胞。
15、在高倍显微镜下 ( 1 0 x 4 0 ) 任选5 个视野进行阳 性细胞百分数计数, 求平均值。 , .5 统计学分析处理 所有 测 值用标 1 S ) 表 示, 组间 两两比 较 应用4 检 验。 升高。 附 表 各组兔骼 外动 脉E D D 及N E D D ( % , x 1 s ) 组别 A 组 B , 组 B Z 组 B , 组 例数N E DD 1 5 . 5 8 :t 2 . 6 4 8 . 1 7 t 1 . 0 2 1 2 . 9 2 t 0 . 8 1 1 0 . 8 9 t 0 . 2 7 1 1 1 . 5 5士2 . 2 0 1 1 . 7 0 t 1 . 4 6 1
16、 0 . 9 2士1 . 3 1 8 . 1 8 t 0 . 4 4 1 2 结果 实验中 对照组各亚组间骼外动脉内皮功能及血 脂结果无明显变化( P 0 .0 5 ) , 因而将其归为A组。 2 . 1 各组兔骼外动脉E D D及N E D D 见附表 2 .2 血脂及病理学检查 随着胆固 醇的喂养, 血清T G逐渐升高, 于8 周 达到顶峰, 1 2 周下降。 L D L - C 及H D L - C 则一直逐渐 注: t 对照 组比 较, P 0 .0 1 光 镜下B ; 组 兔L E I A内 皮细 胞 部分脱 落 , 泡沫 细胞堆积, 此为A S 早期( 脂纹期) ; B : 组内皮
17、细胞 形态不规整, 连续中断, 可见斑块突向管腔; B 3 组内 弹力膜中断, 平滑肌细胞向内膜增生, 有的斑块内存 在棒状胆固醇结晶,管腔变窄, B 2 B 3 期为A S 中晚 期。A组无上述改变。 2 .3 免疫组织化学检测 A组动脉内 皮有少量V C A M - 1 表达, 阳 性细胞 面积的百分比 为 ( 2 .7 7 1 0 .5 3 ) %, B : 组内膜内皮细 胞即有明显棕黄色颗粒, 阳性细胞面积的百分比为 ( 3 0 . 1 2 1 9 .9 5 ) % , B , 组可 见到 病灶表面及内 部均有 染色( 2 1 .9 3 士 6 .6 9 ) %, B , 组斑块及平滑
18、肌均可见染 色( 1 9 .4 6 1 8 ,5 5 ) %, 主要在平滑肌细胞表达。 B , 组、 B Z 组及B 3 组与A 组相比 差异均有显著性( P 0 .0 1 ) 。 3 讨论 内皮功能障碍是A S 病理过程的 一个早期改变R I 高浓度的胆固 醇, L D L - C , T G 和低水平的H D L - C都 可直接或间接损伤动脉内 皮细胞, 导致内皮功能紊 乱吼 以往认为高胆固醇饮食引 起的A S 早期病变主要 是造成内 皮细胞功能异常而不是解剖学上的 异常r31 0 目 前认为动脉粥样硬化主要是在血管内 皮细胞 损伤的 基础上发生的一系列炎症反应4 -6 7。血管内皮 损
19、伤时内 皮细胞分泌的内 皮素、一氧化氮等 血管活 性物质平衡失调, 促进平滑肌细胞增殖, 细胞钻附分 子表达。 研究认为V C A M - 1 在动脉粥样硬化病变早 期主要促使单核细胞向内皮薪附, 而单核细胞、 T淋 巴 细胞与血管内皮细胞发生豁附代表着动脉粥样硬 化形成早期炎症的开始I o V C A M - 1 早期表达促进 对血管内皮的损伤181 。在进展期主要促进单核细胞 迁移入内皮下层, 转化为巨噬细胞, 摄取脂质转化为 泡沫细胞, 并向淋巴 细胞提供抗原, 触发局部免疫反 应; 同时释放多种细胞因子, 促进平滑肌细胞表型转 化和增殖, 形成纤维斑块(9 ,10 0 本研究应用高分辨
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- 关 键 词:
- 动脉粥样硬化 血管 内皮 功能 黏附 分子 VCAM 表达 关系 研究
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