咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其增殖细胞核抗原表达的影响.pdf

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1、书书书 4 8 4 第 二 军 医 大 学 学 报 A c a dJS e c M i l M e d U n i v 2 0 0 6M a y ;2 7(5) 论 著 咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其增殖细胞核抗原表达的影响 王国栋, 姜晓钟*, 何玉林 ( 第二军医大学长征医院口腔科, 上海2 0 0 0 0 3) 摘要 目的：观察咬合力改变对大鼠牙周膜成纤维细胞凋亡及其增殖细胞核抗原(P C NA) 表达的影响, 探讨牙周膜改建的可 能机制。方法：拔除健康雄性S D大鼠右上颌第一、 二、 三磨牙, 建立左下颌磨牙咬合力改变动物模型, 分别于拔牙后6、1 2h及1、 2、3、5、7、1

2、 4、2 8d处死大鼠(n=6) , 取牙槽骨组织, 进行H - E染色观察;TUN E L法观测牙周膜成纤维细胞的凋亡情况, 免疫组织 化学染色检测其P C NA表达。另设正常咬合力大鼠作为对照组(n=6) 。TUN E L法及免疫组织化学染色结果采用二级计分法, 根据染色强度及阳性细胞的数目进行计分取平均值。结果：成功建立咬合力改变雄性S D大鼠模型。H - E染色结果显示与拔牙 大鼠相比, 正常对照组大鼠牙周膜结构较致密, 纤维排列有序, 牙槽骨骨壁较平。TUN E L法观察显示拔牙后1 2h牙周膜成纤维 细胞凋亡达峰值(2 5 2. 6 76. 6 2) , 明显高于正常对照组(7.

3、1 72. 3 2,P0. 0 1) , 其后开始下降, 至2 8d基本恢复正常(8. 5 0 1. 8 7) 。 免疫组化染色表明P C NA的表达也呈类似趋势, 拔牙后3d表达最高(2 4 6. 0 07. 2 1) , 此后开始下降至正常(5. 6 72. 1 6, P0. 0 1) 。结论：咬合力改变可能通过加速牙周膜成纤维细胞的凋亡, 促进细胞增殖, 从而共同完成牙周膜的改建。 关键词 咬合力; 牙周膜;成纤维细胞; 细胞凋亡; 增殖细胞核抗原 中图分类号 R7 8 0. 2 文献标识码 A 文章编号 0 2 5 8 - 8 7 9 X(2 0 0 6)0 5 - 0 4 8 4 -

4、 0 5 I n f l u e n c eo fo c c l u s a l f o r c ec h a n g eo na p o p t o s i so fp e r i o d o n t a l l i g a m e n tf i b r o b l a s ta n de x p r e s s i o no fp r o l i f e r a - t i n gn u c l e a ra n t i g e n WANGG u o - d o n g,J I ANGX i a o - z h o n g *,HEY u - l i n(D e p a r t m e

5、n t o fS t o m a t o l o g y,C h a n g z h e n gH o s p i t a l,S e c o n dM i l i t a r yM e d i - c a lU n i v e r s i t y,S h a n g h a i 2 0 0 0 0 3,C h i n a) A B S T R A C T O bje c t i v e:T os t u d yt h ei n f l u e n c eo fo c c l u s a lf o r c ec h a n g eo na p o p t o s i so fp e r i o

6、 d o n t a ll i g a m e n tf i b r o b l a s t (P D L F)a n de x p r e s s i o no fp r o l i f e r a t i n gn u c l e a ra n t i g e n(P CNA)i nt h e f i b r o b l a s t s,s oa st oe x p l o r et h ep o s s i b l em e c h a n i s mf o r r e m o d e l i n go fp e r i o d o n t a ll i g a m e n t .M e

7、 t h o d s:A n i m a lm o d e lo fo c c l u s a lf o r c ec h a n g ew a se s t a b l i s h e db ye x t r a c t i n gt h er i g h t f i r s t,s e c o n da n dt h i r dm a x i l l a r ym o l a r s i nm a l eS Dr a t s . T h er a t sw e r es a c r i f i c e da t 6,1 2h o u r sa n dd a y1,2,3,5,7,1 4,a

8、 n d 2 8da f t e re x t r a c t i n gt h et e e t h(n=6) ,a n dt h e i ra l v e o l a rb o n et i s s u e sw e r eh a r v e s t e d.H - Es t a i n i n gw a su s e dt oo b s e r v et h e m o r p h o l o g i cc h a n g e so f t h ea l v e o l a rb o n e t i s s u e s . TUNE Lm e t h o da n d i mm u n

9、o h i s t o c h e m i s t r yw e r eu s e dt od e t e c t a p o p t o s i sa n d P CNAe x p r e s s i o ni nP D L F. T h e r a t sw i t hn o r m a l o c c l u s a l f o r c e sw e r eu s e da sc o n t r o l(n=6). T h e r e s u l t sw e r ea s s i g n e dam e a n s c o r eb a s e do nt h ep e r c e n

10、 t a g ea n dt h e i n t e n s i t yo fc e l l sp o s i t i v e l ys t a i n e df o rTUNE La n dP CNA. R e s u l t s:A n i m a lm o d e lo fo c - c l u s a l f o r c ec h a n g ew a ss u c c e s s f u l l ye s t a b l i s h e d.H - Es t a i n i n gs h o w e dt h a t t h ec o n t r o l g r o u ph a d

11、m o r ep y c n o t i cp e r i o d o n t a l l i g a - m e n t,o r d e r l yf i b r e s,a n df l a t t e ra l v e o l a rb o n et h a nt h em o d e lg r o u p.TUNE Lr e s u l ts h o w e dt h a t t h ec e l l a p o p t o s i sr e a c h e di t s p e a ka t 1 2ha f t e re x t r a c t i n gt h e t e e t

12、h(2 5 2. 6 76. 6 2) ,s i g n i f i c a n t l yh i g h e r t h a nt h a to f c o n t r o l g r o u p(7. 1 72. 3 2,P0. 0 1) , t h e ng r a d u a l l yd e c r e a s e dt on o r m a l l e v e lo nd a y2 8a f t e re x t r a c t i o n(8. 5 01. 8 7). I mm u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n gs h o

13、 w e dt h a t t h ee x p r e s s i o no fP CNAh a das i m i l a r t e n d e n c yo f a p o p t o s i s:P CNAe x p r e s s i o np e a k e do nd a y3a f t e re x t r a c t i o n(2 4 6. 0 07. 2 1) a n dt h e ng r a d u a l l yd e c r e a s e dt on o r m a l l e v e l(5. 6 72. 1 6,P0. 0 1).C o n c l u s

14、 i o n:C h a n g e so fo c c l u s a lf o r c ec a nf a c i l i t a t et h e P D L Fa p o p t o s i sa n dp r o m o t eP D L Fp r o l i f e r a t i o n,c o n t r i b u t i n gt ot h er e m o d e l i n go fp e r i o d o n t a l l i g a m e n t . K E YWO R D S b i t ef o r c e;p e r i o d o n t a l l

15、i g a m e n t;f i b r o b l a s t s;a p o p t o s i s;p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n A c a dJS e cM i lM e dU n i v,2 0 0 6,2 7(5) :4 8 4 - 4 8 8 作者简介 王国栋, 硕士. E - m a i l:w g dr e n1 6 3. c o m *C o r r e s p o n d i n ga u t h o r . E - m a i l:J e a n j i a n g2 6 3. n

16、 e t 细胞凋亡(a p o p t o s i s) 是基因调控下细胞主动而 有序的死亡过程, 又称程序性细胞死亡, 它在个体发 育和维持机体内环境稳定方面具有重要的生物学意 义1。增殖细胞核抗原(p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a r a n t i g e n,P CNA) 是一种高效的细胞蛋白质, 可与细 胞增殖过程相整合来调节DNA的复制和修复2。 已有研究1发现, 细胞凋亡和细胞增殖与人体许多 部位的组织改建有密切关系。 牙周膜组织在体内外环境理化因素的作用下, 需要不断进行改建, 以适应环境和功能的变化3,4。 目前关于牙周膜

17、组织的研究侧重于通过细胞牵张装 置对培养的细胞施加周期性牵张力来观察力对细胞 生长的影响, 但关于咬合力改变下牙周膜成纤维细 第5期.王国栋, 等.咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其增殖细胞核抗原表达的影响4 8 5 胞( p e r i o d o n t a ll i g a m e n tf i b r o b l a s t,P D L F) 凋亡和 增殖情况的研究较少。本实验通过建立咬合力改变 大鼠模型, 探讨P D L F凋亡及增殖在牙周膜改建中 的作用。 1 材料和方法 1. 1 咬合力改变动物模型的建立及动物分组 6 0 只成年雄性S D大鼠( 购自海军医学研究所实验动 物中

18、心) , 体质量( 2 1 02 0)g, 定时、 定量摄食, 自由 饮水, 喂养1周后开始实验。大鼠随机分为正常对 照组( 正常咬合力组, n=6) 和模型组( 咬合力改变模 型组, n=5 4) 。模型组大鼠组用3%戊巴比 妥 钠 0. 3 8m l腹腔麻醉, 充分麻醉后拔除右上颌第一、 二、 三磨牙, 建立左下颌磨牙咬合力改变的S D大鼠模 型。于拔牙后6、 1 2h及1、2、3、5、7、1 4、2 8d共9个 时相点处死动物( n=6) 。 1. 2 取材 动物处死前1 2h禁食, 严格无菌条件 下, 用3%戊巴比妥钠0. 5m l经腹腔麻醉后放血处 死, 迅速取出左侧下颌骨, 仅保留

19、磨牙区相应骨段, 0. 9%生理盐水冲洗后, 置于4%多聚甲醛缓冲液固 定2 4h, 后将标本移至1 0%E D TA中脱钙34周, 梯度乙醇脱水, 二甲苯置换至石蜡包埋。常规石蜡 切片, 厚5m。行 常 规H - E染 色 观 察;TUN E L ( t e r m i n a ld UT P - Xn i c ke n dl a b e l i n g) 法观测P D L F 细胞凋亡情况, 免疫组织化学检测细胞P C NA表达 程度。 1. 3 TUN E L法测定细胞凋亡程度 按 照 美 国 R o c h e公司细胞凋亡试剂盒的步骤操作:5m切片 脱蜡至水, 3%H2O2室温2 0m

20、 i n; 滴加蛋白酶K(2 0 g /m l,3 72 0 m i n) ,P B S洗3 m i n3次; 加 TUN E L混合液(3 0l/每片,3 7 1h) ,P B S洗3 m i n3次; 滴加1:2 0 0S t r e p t a v i d i n - HR P( 北京中 山生物技术有限公司; 3 73 0m i n) ,P B S洗3m i n 3次;0. 0 4% D A B(S i g m a)+0. 0 3%H2O2显色1 0 m i n, 水洗; 苏木精衬染1m i n, 水洗蓝化; 吹干后常 规树脂封片。阳性乳腺癌标本作为阳性对照;P B S 代替TUN E

21、L混合液作为阴性对照。 1. 4 免疫组织化学染色观察P C NA 表达 按照丹 麦D AKO公司S P免疫组化试剂盒的步骤操作: 切 片经二甲苯脱蜡后梯度乙醇水化, 3%H2O2室温2 0 m i n,P B S洗3 m i n3次; 微波法抗原修复(0. 0 1 m o l/Lp H 6. 0柠 檬 酸 盐 缓 冲 液, 微 波 炉 加 热 至 9 8并持续1 5m i n) , 自然冷却后P B S洗3次; 体积 分数1 0%的正常山羊血清封闭( 3 72 0m i n) , 滴加 1:1 0 0的P C NA(D AKO,c l o n e P C 1 0,M 0 8 7 9) ;4

22、过夜后复温1h,P B S洗3 m i n3次; 然后滴加 1:2 0 0的生物素化猪抗兔I g G( 北京中山生物技术 有限公司; 3 73 0m i n) ,P B S洗3m i n3次; 然后 滴加1:2 0 0S t r e p t a v i d i n - HR P( 3 73 0m i n) ,P B S 洗3m i n3次; 0. 0 5%D A B(S i g m a)+0. 0 3%H2O2 显色, 81 2m i n后终止反应; 苏木精复染, 脱水, 透 明, 树脂封片。阴性对照: 用P B S代替一抗工作液。 1. 5 结果判断 TUN E L法和P C NA 阳性染色

23、为 淡黄色、 棕黄色或棕褐色, 均定位于细胞核。所有结 果由两位不知情的病理专家进行判断, 采用二级计 分法统计结果, 并取平均值。判断标准: 根据染色强 度, 将结果分为3级, 分别表示为+,$,%; 根据阳 性细胞数, 计算每1 0 0个细胞中阳性细胞数, 然后二 者相乘, 即为最后评分。理论上结果的范围为0 3 0 0分 5。 1. 6 统计学处理 采用S P S S1 1. 0软件包, 将所 有实验结果进行方差齐性检验, 对TUN E L法采用 单因素方差分析, 组间比较行L S D检验; 对P C NA 免疫组化采用完全随机秩和检验, 并对原始数据进 行排秩, 用转化后的秩号进行单因

24、素方差分析, 组间 比较行L S D检验, 以P0. 0 5为差异显著。 2 结 果 2. 1 动物模型的建立 5 4只大鼠均成功拔除右上 颌磨牙, 无牙根残留。术中、 术后无明显出血, 术后 正常进食、 进水, 拔牙创面愈合良好, 无明显感染。 成功建立左下颌磨牙咬合力改变的S D大鼠模型。 2. 2 H - E染色结果 正常对照组大鼠牙周膜结构 致密, 纤维排列有序, 成纤维细胞核的方向与之一 致; 牙槽骨骨壁较平, 表面衬以连续排列的扁平成骨 细胞( 图1 A) 。拔牙3d后, 模型组牙周膜腔增宽, 结构疏松, 纤维、 细胞排列杂乱无序, 尤以近牙槽骨 侧为重; 牙槽骨骨壁凹凸不平, 有

25、活跃的骨吸收陷窝 ( 图1 B) ; 1 4d时, 模型组牙周膜宽度明显增加, 近牙 根侧结构致密, 但牙槽骨侧结构疏松, 纤维及细胞排 列较前规则; 牙槽骨骨壁凹凸不平, 其内可见破骨细 胞( 图1 C) ; 2 8d时, 模型组大鼠牙周膜宽度有所减 小但仍高于对照组, 结构较前致密, 细胞、 纤维的排 列有序; 牙槽骨骨壁仍凹凸不平, 破骨细胞数量减少 ( 图1 D) 。 2. 3 TUN E L法凋亡检测及P C NA的表达结果 正常对照组大鼠牙周膜组织中凋亡细胞及增殖细胞 核抗原染色均呈淡黄色, 散在分布, 数量较少; 模型 组呈片状和( 或) 弥漫分布, 且染色强度均高于对照 组(

26、图2) 。 4 8 6 第二军医大学学报 2 0 0 6年5月, 第2 7卷 图1 各组大鼠牙周膜H - E染色结果 F i g1 H - Es t a i n i n go f r a tp e r i o d o n t a l l i g a m e n t i ne a c hg r o u p(I2 J J) A:C o n t r o l;B - D:3,1 4,2 8da f t e re x t r a c t i n gt h e t e e t h;R:R o o t;P L:P e r i o d o n t a l l i g a m e n t;A B:A l v e

27、 o l a rb o n e 图2 拔牙后不同时间点大鼠牙周膜成纤维细胞T K L E M法及免疫组化染色结果 F i g2 I mm u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n ga n dT K L E Mr e s u l t s i nr a tN D M Fa f t e re x t r a c t i n g t e e t h(IO J J) P L:P e r i o d o n t a l l i g a m e n t .A - D:P D L Fc e l l a p o p t o s i sm e a s u r e

28、 db yTUN E Lm e t h o d;E - H:P C NAe x p r e s s i o nm e a s u r e db y i mm u n o h i s t o c h e m i s - t r y;A,E:c o n t r o l ;B,F:1 2ha f t e re x t r a c t i n g;C,G:3da f t e re x t r a c t i n g;D,H:2 8da f t e re x t r a c t i n g 第5期.王国栋, 等.咬合力改变对牙周膜成纤维细胞凋亡及其增殖细胞核抗原表达的影响4 8 7 统计结果表明, 拔牙

29、后各时相点凋亡情况( 除 2 8d外) 及P C NA的表达均高于对照组(P0. 0 1) 。 拔牙后6h细胞凋亡逐渐增多, 1 2h达峰值,3d后 开始下降, 5d时与6h细胞凋亡情况类似,2 8d后 逐渐恢复, 与正常对照组无显著差异。P C NA的表 达也呈现类似表现, 拔牙后3d表达最高, 此后开始 逐渐下降至正常, 其中2d时P C NA的表达与5d 时无明显差异。具体数据详见表1。 表1 拔牙后不同时间点大鼠牙周膜成纤维 细胞凋亡情况和N C L A表达的比较 T a b1 C o m p a r i s o no fa p o p t o s i sa n dN C L Ae x

30、 p r e s s i o n i nr a tN D M Fa td i f f e r e n t t i m ep o i n t sa f t e re x t r a c t i n g t e e t h (n=6, (P0. 0 1v s6h;P0. 0 1v s2d P 讨 论 牙周膜是一层富含细胞、 纤维的致密结缔组织, 位于牙根和牙槽骨之间, 起着支持牙齿, 承担和分散 咬合力的作用。P D L F作为牙周膜中的主体细胞, 能将机械负荷转化为分子信号, 调节细胞的功能, 从 而发生组织的改建 6。牙齿位于牙槽窝中始终承担 着咬合力的作用, 关于咬合力对牙周组织影响的研 究

31、,国外学者一般采用以下几种方法来模拟不同的 咬合力状态: ( 1) 加高咬合 7, 通过自凝树脂在咬合 面形成高嵌体而使咬合力增大; ( 2) 调 8, 通过磨 除一定的牙体组织, 使其脱离咬合平面从而导致咬 合力改变; ( 3) 拔牙 9, 通过拔除一个区的部分牙而 达到咬合力改变的目的。本实验也采用拔牙法建立 动物模型, 不同在于拔除了一个区的所有磨牙, 使咬 合力能均匀地分散于各个牙齿, 且组织学研究发现, 拔牙后牙周膜组织表现为间隙的增宽及纤维、 细胞 排列紊乱所致的结构疏松, 同时破骨细胞的增多使 得牙槽骨骨壁凹凸不平, 并出现了活跃的骨吸收陷 窝, 说明牙周膜改建的同时牙槽骨也在进

32、行适应性 变化; 而随着实验周期的延长, 疏松、 排列无序的纤 维、 细胞逐渐变得紧密、 规则有序, 提示牙周膜成纤 维细胞吞噬降解能力增强; 同时破骨细胞的减少也 使牙槽骨的改建趋于完成。因此本实验所建立的动 物模型能较好地反映牙周膜组织在咬合力改变下发 生的组织和结构的变化。 细胞凋亡是细胞的正常死亡过程,和细胞的生 长、 分化、 增殖一样, 在保持细胞再生和细胞死亡之 间的平衡, 维持机体内环境稳定等方面发挥着重要 作用 1 0,1 1。既往研究发现, 细胞凋亡与组织的重建 有密切关系, 尤其与力的参与密切相关, 因此认为力 学因素的影响可促进组织的改建 1 2。H a t a i等1

33、3 利用TUN E L法在大鼠牙齿移动的实验中发现, 牙 周膜中凋亡细胞于施力后1 2h明显增多, 并于2 4h 达高峰后开始下降, 4 8h后凋亡细胞已基本消失。 而本实验发现在咬合力改变后, 牙周膜中细胞凋亡 的表达于拔牙后1 2h达峰值并明显高于正常组织 中的表达(P0. 0 1) , 说明细胞凋亡在牙周膜改建 的早期发挥主要作用; 而3d后开始下降, 至2 8d时 仍能检测到凋亡细胞, 这可能与力的作用强度和 ( 或) 力的作用方式不同有关。这些结果提示由于咬 合力的改变加速了细胞凋亡, 从而促进了牙周膜的 重建。 P C NA是细胞增殖的特异性标志之一, 它在肿 瘤细胞研究中的生物学

34、意义已被广大学者所认可。 而在牙周膜细胞的研究领域, 尽管国外学者对其进 行了部分研究, 但由于所采用的模型、 力的施加方式 等均 存 在 差 异, 使 实 验 结 果 不 尽 相 同。M a b u c h i 等 1 4将橡皮块置入大鼠上颌磨牙之间而产生类似 于正畸力的作用, 观察发现该力能明显促进P D L F 的增殖, 且P C NA的作用呈现时间依赖性, 尤以作 用后3d最为明显。而K a w a r i z a d e h等 7对大鼠的 牙齿施加0. 1N的力持续作用8h后, 发现在实验 周期内P C NA的表达并没有明显变化。本研究发 现, P D L F的增殖出现于咬合力改变后

35、1 2h, 且在3 d达最大值, 此后逐渐降低至正常, 这与M a b u c h i 等 1 4的研究结果一致, 表明咬合力的改变对 P D L F 的增殖活性起到了正性调节的作用, 从而促进了牙 周膜的改建。 如同组织的发生是一个多因素参与的过程一 样, 组织的改建也是多因素相互作用的结果。正常 的组织在行使功能时始终伴随着细胞的新老更替, 也就必然存在着凋亡和增殖的平衡 1 5。本研究结 果表明, 在咬合力改变初期, 牙周膜的改建呈现以凋 亡为主的变化, 而后随着P D L F增殖活性的增强, 又 4 8 8 第二军医大学学报 2 0 0 6年5月, 第2 7卷 表现为以增殖为主的变化,

36、 进而达到凋亡与增殖相 对平衡的状态, 直至牙周膜改建的完成。因此, 可以 认为在牙周膜的改建中细胞凋亡与细胞增殖可能共 同发挥作用, 但具体的调节改建机制还有待进一步 探讨。 参 考 文 献 1 N o b l eB S,S t e v e n sH,L o v e r i d g eN,e t a l . I d e n t i f i c a t i o no f a p o p - t o t i cc h a n g e si no s t e o c y t e si nn o r m a la n dp a t h o l o g i c a lh u m a n b o n e

37、J. B o n e,1 9 9 7,2 0:2 7 3 - 2 8 2. 2 H a r a c s k aL,T o r r e s - R a m o sC A,J o h n s o nR E,e ta l . O p p o s i n g e f f e c t so fu b i q u i t i nc o n j u g a t i o na n dS UMOm o d i f i c a t i o no fP C - NAo nr e p l i c a t i o n a lb y p a s so fD NAl e s i o n si nS a c c h a r

38、o m y c e s c e r e v i s i a eJ. M o lC e l lB i o l,2 0 0 4,2 4:4 2 6 7 - 4 2 7 4. 3 H a r r e lS K,N u n n ME. T h ee f f e c to fo c c l u s a ld i s c r e p a n c i e so n p e r i o d o n t i t i s . . R e l a t i o n s h i po fo c c l u s a l t r e a t m e n t t ot h ep r o - g r e s s i o no

39、fp e r i o d o n t a l d i s e a s eJ. JP e r i o d o n t o l,2 0 0 1,7 2:4 9 5 - 5 0 5. 4 M i y a t aT,K o b a y a s h iY,A r a k iH,e ta l . T h ei n f l u e n c eo fc o n - t r o l l e do c c l u s a l o v e r l o a do np e r i - i m p l a n tt i s s u e . P a r t3:Ah i s - t o l o g i cs t u d y

40、i nm o n k e y sJ. I n tJO r a lM a x i l l o f a cI m p l a n t s, 2 0 0 0,1 5:4 2 5 - 4 3 1. 5 L o m b a r d iD P,G e r a d t sJ,F o l e yJ F,e ta l . L o s so fKA I 1e x p r e s - s i o ni nt h ep r o g r e s s i o no fc o l o r e c t a lc a n c e rJ. C a n c e rR e s, 1 9 9 9,5 9:5 7 2 4 - 5 7 3

41、 1. 6 P a v l i nD,G l u h a k - H e i n r i c hJ . E f f e c to fm e c h a n i c a l l o a d i n go n p e r i o d o n t a l c e l l sJ. C r i tR e vO r a lB i o l M e d,2 0 0 1,1 2:4 1 4 - 4 2 4. 7 K a w a r i z a d e hA,B o u r a u e lC,G t zW,e ta l . E a r l yr e s p o n s e so f p e r i o d o n

42、 t a l l i g a m e n t c e l l s t om e c h a n i c a ls t i m u l u si nv i v oJ. J D e n tR e s,2 0 0 5,8 4:9 0 2 - 9 0 6. 8 S t e i g m a nS,M i c h a e l iY,Y i t z h a k iM,e ta l . At h r e e - d i m e n s i o n a l e v a l u a t i o no ft h ee f f e c t so ff u n c t i o n a lo c c l u s a lf

43、 o r c e so nt h e m o r p h o l o g yo fd e n t a l a n dp e r i o d o n t a l t i s s u e so f t h er a t i n c i s o r J. JD e n tR e s,1 9 8 9,6 8:1 2 6 9 - 1 2 7 4. 9 K a n e k oS,O h a s h iK,S o m aK,e t a l . O c c l u s a l h y p o f u n c t i o nc a u - s e sc h a n g e so fp r o t e o g l

44、 y c a nc o n t e n t i nt h er a tp e r i o d o n t a l l i g a - m e n tJ. JP e r i o d o n t a lR e s,2 0 0 1,3 6:9 - 1 7. 1 0T o e s c uE C. A p o p t o s i sa n dc e l ld e a t hi nn e u r o n a lc e l l s:w h e r e d o e sC a 2+f i t i n J ？C e l lC a l c i u m,1 9 9 8,2 4:3 8 7 - 4 0 3. 1 1D

45、a n i a lNN,K o r s m e y e rS J . C e l ld e a t h:c r i t i c a lc o n t r o lp o i n t s J. C e l l,2 0 0 4,1 1 6:2 0 5 - 2 1 9. 1 2L iG,Wh i t eG,C o n n o l l yC,e t a l . C e l l p r o l i f e r a t i o na n da p o p t o - s i sd u r i n g f r a c t u r eh e a l i n gJ. JB o n eM i n e rR e s,

46、2 0 0 2,1 7:7 9 1 - 7 9 9. 1 3H a t a iT,Y o k o z e k iM,F u n a t oN,e ta l . A p o p t o s i so fp e r i o d o n - t a l l i g a m e n tc e l l si n d u c e db y m e c h a n i c a ls t r e s sd u r i n gt o o t h m o v e m e n tJ. O r a lD i s,2 0 0 1,7:2 8 7 - 2 9 0. 1 4M a b u c h iR,M a t s u

47、z a k aK,S h i m o n o M. C e l lp r o l i f e r a t i o na n d c e l ld e a t hi np e r i o d o n t a ll i g a m e n t sd u r i n go r t h o d o n t i ct o o t h m o v e m e n tJ. JP e r i o d o n tR e s,2 0 0 2,3 7:1 1 8 - 1 2 4. 1 5R a f fM. C e l l s u i c i d ef o rb e g i n n e r sJ. N a t u r

48、 e,1 9 9 8,3 9 6:1 1 9 - 1 2 2. 收稿日期 2 0 0 5 - 1 2 - 1 6 修回日期 2 0 0 6 - 0 2 - 2 0 本文编辑 贾泽军, ) 邓晓群 Am e t a - a n a l Q s i so f c a s e - c o n t r o l s t u d i e so nt h ec o m b i n e de f f e c to fh e p a t i t i sBa n dCv i r u s i n f e c t i o n s i nc a u s i n g h e p a t o c e l l u l a r

49、c a r c i n o m a i nC h i n a S h i J,Z h uL,L i uS,X i eWF(D e p a r t m e n to fG a s t r o e n t e r o l o g y,C h a n g z h e n gH o s p i t a l,S e c o n d M i l i t a r y M e d i c a lU n i v e r s i t y, S h a n g h a i 2 0 0 0 0 3,C h i n a) A B S T R A C T W e i n v e s t i g a t e dw h e t h e rc o n c u r r e n t i n f e c t i o nb yh e p a t i t i