地塞米松对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及FAS、BCL 2 MRNA表达的影响.pdf

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1、5 7 7 【 文章编号 1 0 0 ( 一 4 7 1 8 ( 2 0 0 6 ) 0 3 一 0 5 7 7 一 0 4 地塞米松对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡及f a s , b c l 一 2 mR N A表达的影响 李志奎， ， 刘刚 “ ， 王长征2 ， 钱桂生 2 ( 第四军医大学西京医院呼吸内科， 陕西西安7 1 0 0 3 2 ; 2 第三军医大学新桥医院呼吸病研究所， 重庆0 0 3 7 ) ) 摘 到目 的: 观察地塞米松( D M ) 对哮喘 豚鼠 体 外不同 密度嗜 酸性粒细 胞( E o s ) 凋亡 及f a s , b c l 一 2 m R N A 表 达的影响，

2、 探讨 D M促进哮喘E o s 凋亡的机制。 方法: 卵蛋白激发哮喘豚鼠动物模型4 8 h 后行支气管肺泡灌洗， 分 离低密度及正常密度E o s ( H E o s ， N EOs ) . N E o s ) o H E o s 及N E o s 分别与地塞米松( D M ) ( 1 0 - 1。 一 1 0 - 5 m o l/ L ) 共培养2 4 h ， 以原位 杂交方法检测不同E o s 的f -及b c l 一 2 m R N A 表达， 3 末端脱氧核昔转移酶介导的 脱氧三磷酸尿昔( d - U T P ) 缺口 末 端 标记( T U N E L ) 法检 测细 胞 凋 亡。

3、 结 果: D M 干 预2 4 h 后， 可见E o s 细 胞凋 亡 增加的同 时， 不同 密 度E o s 的f a s m R N A 表达也增加， b c l 一 2 m R N A 表达降低， 并与D M 浓度呈剂量依赖性。 加 表达与E o s 凋亡呈正相关( P 0 . 0 5 ) 。见图2 0 *护 -4日E o s - - - W- NE o s - a p o p t o s i s a p o p t o s i s *令.* 706050403020 ，。 0 ; , UI 0 - 岁50国Jo釜。1祠01兮dV I 扩1 0 -8 * 1 0 -1 1 0 -6 D

4、 M c o n c e n t r a t i o n ( m o l 几) F i g 1 E ff e c t o f D M o n a p o p t o s i s o f d i ff e re n t d e n s e e o s i n o p h i l s . . P0 . 0 5 , * * P 0 . 0 1 v s c o n t r o l . .x 士s .n =5 . 图1 D M对不同密度E o s 凋亡的影响 一 ( ) 一H E o s f a s - F- N E o s f a s - H E o s - b a l - 2 _A- N e o s

5、 - b a l - 2 * 。/搜 求。芭。净一1节己 0 1 W0 1 0 - 1 0 -“ 1 0 一 1 0 -6 1 0 6055约454035302520 D M c o n c e n t r a t i o n ( m o l / L ) E ff e c ts o f D M o n e x p r e s s i o n o f f a s ， b e l 一 2 m R N A i n d i ff e r - e n t d e n s e e o s i n o p h i l s . * P 0 . 0 5 , ”尸 0 . 0 1 v s c o n t r o

6、l . 无士s . n=5 . D M对不同密度E o s ,佃、 b c l 一 2 m R N A表达的影响 22 Fis图 3 E o s b c l 一 2及f a s m R N A表达与细胞凋亡的相关 性 D M体外干预E o s 2 4 h 后， H E o s 及N E o s 表达f as n iR N A 与细胞凋亡呈正相关( r = 0 . 5 7 , 0 . 4 4 ; P 0 . 0 1 ,P 0 . 0 5 ) ， H E o s 及 N E o s 表达 b c l 一 2 m R N A与 细 胞凋亡呈明显负相关( r =一 0 . 4 1 ，一 0 . 3 6

7、 ; P 0 . 0 5 ) o H E o s 及N E o ， 表达 b c l 一 2 m R N A与加 m R - N A 呈负相关( r =一 0 . 6 9 ，一 0 . 5 9 ; P 0 . 0 1 ) . 讨论 糖皮质激素治疗哮喘气道炎症主要通过抑制 I L 一 3 , I L 一 5 及G M一 C S F 等细胞因子活动及清除气 道E o s 细胞。糖皮质激素在体内、 体外可引起 E o s , C D 4 , C D 8 细胞凋亡， 凋亡细胞易被巨噬细胞吞噬， 使 组 织炎 症得到清除 5 ,6 0 糖皮质激素在体外不但能 引起 E o s 凋亡， 并能阻滞次大剂量

8、I L 一 5 的抑制凋亡 作用 7 ) 。 本研究应用D M在体外干预不同密度的 E o s 后， 可见细胞凋亡呈剂量依赖性增加， 以H E o s 增 加显著， H E o s 被认为是活动性E o s ， 其凋亡增加有利 于炎症消退。表明D M可以促进哮喘时不同密度的 E o s 凋亡， 加速哮喘肺内E o s 清除。检测皮质激素治 疗的哮喘患者痰液表明， E o s 凋亡增加的同时， 巨噬 细胞对凋亡细胞的清除也促进了哮喘气道炎症的消 退。 D M促进E o ， 凋亡的 机制仍不清楚 8 l 。 本实验 在体外用 D M干预不同密度的哮喘豚鼠E o s 2 4 h 后， E o s 表

9、达加 随D M浓度增加而增加， 而E o s 表达b c l 一 2 随D M 浓度增加而减少， 表明f as及b c l 一 2 参与 了E o s 细胞凋亡的调节， D M可通过f as及b c l 一 2 调 节E o s 凋亡。细胞凋亡主要有两条信号转导途径， 其 一为线粒体途径( r r i t o c h o n d r ia l p a th w a y ) ， 由 线粒体释 放细胞色素 C 参与， 其二为死亡受体途径( d e a t h 。 - c e p t o r p a t h w a y ) ， 由细胞表面死亡受体与配体或抗体 启 动。 有 研究 表明:加 单 抗 可

10、 引 起 小鼠 血 浆D N A 反 应、 肝脏c a s p a s e 3 及T U N E L 染色均明显增加， 而用 D M预处理后， 其致凋亡作用明显下降 9 o D M可在 体外对哮喘组及正常对照组的T 细胞产生明显的细 胞凋亡， 并有剂量依赖性; D M对体外哮喘组T 细胞 作用较对照组明显; 哮喘组T 细胞经D M干预后表达 加 明显增加， 而哮喘患者T 淋巴细胞表达b c l 一 2 较 低， D M干预后对T 细胞表达b c l 一 2影响较小 1 o 0 而用雷公藤甲素研究发现， 雷公藤甲素可使外周血T 淋巴细胞凋亡增加， b c l 一 2过表达能抑制这种细胞 凋亡 川

11、 。 茶碱可以 通过 影响b c l 一 2 及细 胞内C A M P 水平促进E o ， 凋亡 il l 。 在严重哮喘患者痰中的E o s 有明显的b c l 一 2表达， 其表达与嗜酸性粒细胞阳离 子蛋白及 I L 一 5 水平正相关， 与F E V I / F V C 呈负相 关， 表明哮喘时 b c l 一2可以延长气道中 E o s 存 活 13 0 加及b c l 一 2 是否是D M 诱导E o s 凋亡的 途 径， 仍未见报道。E o s 上存在始动及作用因子 c as - p a s e 8 及c as p as e 3 ， 表明其存在c a s p as e 级联。I L

12、 一 5 明 显抑制激素引 起的E o s 细胞凋亡， 阻滞c as p as e 8 及 c as p as e 3 在细胞上的作用。抑凋亡作用主要通过阻 滞c as p as e 8 及c as p as e 3 。阻滞c as p as e 8 及c as p as e 3 可能与f a s 的调节有关。I L 一 5 可明显阻滞糖皮质激 素引起的 半胧氨酸天冬氨酸蛋白 酶活化， 而对f a s 引 起的半胧氨酸天冬氨酸蛋白酶改变影响要小而 慢 la d o f a s 介 导的 细 胞 死 亡 不 能 被 外 加I L 一 5 , I L 一 3 或G M一 C S F 救活， 在炎症

13、的清除中具有更加重要的 意义。虽然 D M诱导 H E o s 凋亡较 N E o s 明显， 但对 f a s 及b c l 一 2表达的影响， H E o s 与N E o s 比较无明显 5 8 0 差别， 表明加 及b c l 一 2 参与了激素的促凋亡作用， 但这种调节作用可能还有其它途径参与， 尚有待进 一步研究。 参考文献 1 M a a S H , W a n g C H , L iu C Y , e t a l . E n d o g e n o u s n it r i c o x i d e d o w n r e 酗a t e s the 拟 一2 n u t o g

14、e n 一a c t i v a t e d p ro t e i n x p r e s s i o n o f e o s n o p h i ls t h r o u g h n a s e i n b ro n c h i a l a s t h m a J . J A ll e r g y C l i n I m m u n o l , 2 0 0 3 ,1 1 2 ( 4 ) : 7 6 1 一 7 6 7 . 2 3 4 D ru il h e A , C a i Z , H a i l e S , e t a l . 加 一 m e d i a t e d a p o p t

15、o s i s i n c u l t u r e d h u m a n e o s i n o p h il s J . B l o o d , 1 9 9 6 , 8 7 ( 7 ) : 2 8 2 2 一2 8 3 0. 李志奎， 王长征， 钱桂生. 哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细 胞加 表达及药物的影响 J . 第三军医大学学报， 1 9 9 9 , 2 1 ( 5 ) : 3 2 1 一 3 2 4 . 李志奎， 王长征， 钱桂生， 等. 氮茶碱对哮喘豚鼠嗜酸细 胞凋亡及 b c l 一 2 m R N A表达的影响 J . 免疫学杂志， 2 0 0 1 ， 1 7 ( 4 ) : 2

16、6 5 一 2 6 7 . 7 B l o o m J W, C h a c k o J , L o h m a n I C , e t a l . D iff e re n t ia l c o n t ro l o f e o s in o p h il s u r v iv a l 场g l u c o c o r tic o i d s J . A p o p t o s i s , 2 0 0 4 , 9 ( 1 ) : 9 7 一1 0 4 . 8 、吴迪， 张萃， 梁仁. 地塞米松或茶碱对血小板活 化因子诱导的嗜酸性粒细胞活化的影响【 J . 中国病理 生理杂志， 2 0 0 4

17、 , 2 0 ( 8 ) : 1 4 8 1 一 1 4 8 4 . 9 J ia n g N , P is e t s k y D S . T h e e ff e c t o f d e x a m e th a s o n e o n th e g e n e r a t i o n o f p l a s m a D N A fr o m d e a d a n d d y in g c e ll s J . A m J P a t h o l , 2 0 0 4 , 1 6 4 ( 5 ) : 1 7 5 1 一1 7 5 9 . 1 0 H o C Y , W o n g C K

18、, K o F W , e t a l . A p o p t o s i s a n d B 一 c e ll l y m p h o m a 一2 o f p e r i p h e r a l b l o o d T l y m p h o c y t e s a n d s o l u b l e f a s in p a t ie n ts w i th a ll e r g ic a s t h m a J . C h e s t , 2 0 0 2 , 1 2 2 ( 5 ) : 1 7 5 1 一1 7 5 8 . 1 1 Y a n g Y , L iu Z , T o l

19、o s a E , e t a l . T r ip t o l id e in d u c e s a p o p t o t ic d e a t h o f T ly m p h o c y t e J . I m m u n o p h a r m a c o lo g y , 1 9 9 8 , 4 0 ( 2 ) : 1 3 9 一1 4 9 . 1 2 C h u n g I Y , N a m 一 K u n g E K , L e e N M , e t a l . T h e d o w n r e g u - l a t i o n o f b c l 一 2 e x p

20、 r e s s i o n i s n e c e s s a ry f o r t h e o p h y ll i n e 一i n - d u c e d a p o p t o s is o f e o s i n o p h il J ( 2 ) : 9 5 一1 0 2 . 1 3 J a n g A S , C h o i I S , L e e S , e t a l . e o s i n o p h i l s i n p a t i e n t s w it h a c u t e .C e ll I m m u n o l , 2 0 0 0 , 2 0 3 5 D

21、r u il h e A , L e t u v e S , P r e to l a n i M . G lu c o c o r t ic o id 一 i n d u c e d a p o p t o s i s i n h u m a n e o s i n o p h i l s : m e c h a n i s m s o f a c t i o n J . A p o p t o s i s , 2 0 0 3 , 8 ( 5 ) : 4 8 1 一 4 9 5 . B e l 一2 a s t h ma e x p r e s s i o n m s p u t u m J

22、 . T h o r a x , 2 0 0 0 , 6 L e i c k 一M a l d o n a d o E A , c o r t i c o i d a n d c y s t e i n y l K a y F U , e t a l . C o m p a r i s o n o f g l u c o - l e u k o t r i e n e r e c e p t o r a n t a g o n i s t t re a t - 5 5 ( 5 ) : 3 7 0 一 3 7 4 1 4 Z a n g r ill i J , m e n t s m a n m

23、 o d e l o f c h r o n i c a i r w a y i n f l a m m a t i o n g l u c o c o r t i c o i d , a n d 加 N , S h e t ty A , e t a l . li g a t i o n o n拟 一 2 i n g u i n e a 一 p i g s J l . C l i n E x p A ll e r g y , 2 0 0 4 , 3 4 ( 1 ) : 1 4 5 - 1 5 2. Son L J . a n d c a s p a s e a c t i v a t i o n i n c i r c u l a t i n g E f f e c t o f I L一5 , h o m o l o g u e e x p re s - h u m a n e o s i n o p h i l s C l i n E x p I m m u n o l ， 2 0 0 0 , 1 2 0 ( 1 ) : 1 2 一 2 1 .