垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层 p-ERK及c-Fos表达的影响.pdf
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1、1 论著 垂体腺苷酸环化酶激活肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血皮层 P E R K 及c F o s 表达的影响 白宏英 段智慧娄季宇李平 郑州大学第二附属医院神经内科郑州4 5 0 0 1 4 【摘要】目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后活化的胞外信号调节激酶和c - F o s 的表达变化及垂体腺苷酸环化酶激活 肽( P A C A P ) 对其表达的影响。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,7 2 只大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注对照组、 缺血再灌注P A C A P 治疗组,大脑中动脉阻塞2 h 分别再灌注2 、1 2 、2 4 、4 8 h 。再灌注后各时问点进行神经功能学评分后
2、处死大鼠, 免疫组织化学法分别检测3 组大鼠p - E R K 及c - F o s 表达水平。结果缺血再灌注不同时间点P A C A P 组大鼠神经功能学评分较 缺血再灌注对照组减低。脑缺血诱导J N K 活化,缺血再灌注对照组缺血侧皮层p - E R K2 h 达高峰后渐下降;c - F o s 分别在2 、2 4 h 表 达高峰。与之相比,P A C A P 组各时间点I y E R K 表达升高,2 4 、4 8 hc - F o s 表达下降。结论P A C A p 对局灶性脑缺血再灌注损伤有 保护作用,部分依赖于其上调了磷酸化E P K 的表达,并下调了延迟表达的e - F o s
3、 基因。 【关键词】垂体腺苷酸环化酶激活肽;脑缺血再灌注损伤;磷酸化胞外信号调节激酶;c - F o s 【中图分类号】R 一3 3 2【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 3 5 1 1 0 ( 2 0 0 8 ) 0 7 - 0 0 0 1 - 0 3 E f f e c t so fP A C A Po nt h ee x p r e s s i o no fp - E R Ka n dc - F o si nc o r t e xo fr a t sa f t e ri s c h e m i a - r e p e r f u s i o nB a iH o n g y i n g
4、 ,D u a nZ h i h u i ,L o uJ i y u ,e ta 1 D e p a r t m e n to fN e u r o l o g y ,t h eS e c o n dAl t l i a t e dH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uU n i v e r s i t y , Z h e n g z h o u4 5 0 0 1 4 ,C h i n a A b s t r a c t O b j e c t i v eT oo b s e r v et h ee x p r e s s i o no fa c t i v a
5、 t e de x t r a c e l l u l a rs i g n a l - r e g u l a t e dk i n a s e ( E R K ) a n de - F o sa f t e rf o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n ju r yi nr a t sa n dt h ee f f e c t so fP A C A P M e t h o d sT h em o d e lo ff o c a lc e r e b r a li s c h e m i a - r
6、e p e r f u s i o n i n j u r yw a sm a d eb yo c c l u d i n gm i d d l ec e r e b r a la r t e r y ( M C A ) f o r2 ha n dr e p e r f u s i n gf o r2 。1 2 。2 4a n d4 8h o u r s 7 2r a t sw e r er a n d o m l y d i v i d e di n t o3g r o u p s 。s h a m - o p e r a t e dg r o u p 。i s c h e m i a r
7、e p e r f u s i o nc o n t r o lg r o u pa n dP A C A Pt r e a t m e n tg r o u p N e u r o l o g i c a ls c o r i n g w a sd o n ea td i f f e r e n tt i m e sa f t e rr e p e r f u s i o n T h er a t sw e r ek i l l e da n di m m u n o h i s t o c h e m i c a lt e c h n i q u ew a su s e dt Oe x a
8、 m i n et h ee x - p r e s s i o n so fp - E R Ka n dc - F o si nt h r e eg r o u p sr e s p e c t i v e l y R e s u l t sN e u r o l o g i c a ld e f i c i t ss c o r es h o w e dt h a tt h es c o r ei nP A C A P g r o u pw a sl o w e rt h a nt h a ti nc o n t r o lg r o u pa td i f f e r e n tt i
9、m ep o i n t sa f t e rr e p e r f u s i o n T h ee x p r e s s i o no fp - E R Kr e a c h e dt h ep e a ka t2 ha f t e rr e p e r f u s i o ni ni s c h e m i cc o r t e x w h i l et h eh i g h e re x p r e s s i o no fc F o sa p p e a r e da t2 h o u r sa n d2 4h o u r s A sc o m p a r e dw i t hi
10、s c h e m i ac o n t r a lg r o u p 。t h ee x p r e s s i o no fp - E R Kw a ss i g n i f i c a n t l yd i s c r e a s e da ta l lt i m e si nP A C A Pg r o u p ,w h i l et h el e v e lo fC - F o s w a sm e r e l yd i s c r e a s e da t2 4h o u r sa n d4 8h o u r s C o n c l u s i o nP A C A Pp l a
11、y sap r o t e c t i v er o l eo nf o e a lc e r e b r a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o n i n j u r yi nr a t s T h em e c h a n i s mp a r t i a l l ym e d i a t e db yu p - r e g u l a t i n gp - E R Ka n dd o w n r e g u l a t i n gt h ed e l a y e de x p r e s s i o no fc - F o s K e yw o
12、 r d s P A C P ;C e r e b r a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r y ;P h o s p h o - E R K ;C - F o s 1 9 8 9 年从绵羊的下丘脑中分离并提取出一种具 有激活腺苷酸环化酶活性的神经多肽一垂体腺苷酸环 化酶激活肽 1 ( P A C A P ) 。研究发现它起着神经递质、 神经调质、神经保护作用 2 。本实验采用大鼠M C A O 再灌注模型,观察P A C A P 对大鼠脑缺血再灌注损伤 后缺血侧皮层p - E R K 、e - F o s 表达的影响,探讨P
13、A C - A P 发挥脑保护作用的机制,为脑保护药物的开发提 供实验依据。 1 材料与方法 1 1 材料( 1 ) 实验动物:健康雄性S D 大鼠7 2 只, 清洁级,体质量( 3 0 0 2 0 ) g ,河南省实验动物中心提 供。( 2 ) 主要试剂与药品:P A C A P 3 8 肽,抗P E R K l 2 鼠单克隆抗体,抗c - F o s 兔多克隆抗体,S P 免疫组化 试剂盒,D A B 显色试剂盒等。 1 2 方法 1 2 1 动物分组及给药方法:7 2 只大鼠随机分成假 手术组( A 组) 、缺血再灌注对照组( B 组) 、缺血再灌注 P A C A P 治疗组( C 组
14、) ,每组又分为再灌注后2 、1 2 、 2 4 、4 8 h 四个时间点( I 、1 V ) ,每个时间点6 只, 将大鼠制成脑缺血再灌注模型,C 组于缺血同时经尾 静脉注射P A C A P 3 82 5 弘g ( 溶于l m l 生理盐水) ,A 组、B 组注射生理盐水l m l 。 1 2 2 模型建立:参照L o n g a 3 3 线栓法建立大鼠局灶 性脑缺血再灌注损伤模型。假手术组除栓线仅插入8 r n r r l ,其余步骤相同。麻醉清醒后出现右上肢为重的 偏瘫和左侧H o r n e r 征为模型成功的标志。将蛛网膜 下隙出血及提前死亡、无症状大鼠弃去,再随机补充。 1 2
15、3 标本制备:过量麻醉大鼠,开胸暴露心脏经左 心室主动脉插管,先后灌注3 7 生理盐水、4 多聚甲 万方数据 醛( p H7 4 ) ,充分固定后取脑,冠状切开选取额、顶叶 脑组织制作4 , u m 石蜡切片备检。 1 2 4 检测指标及检测步骤 1 2 4 1 脑缺血再灌注不同时间点神经功能评分:评 分参照文献 4 3 标准。满分为1 0 分,分数越高,说明中 枢神经系统受损越重。 1 2 4 2 P E R K 免疫组织化学染色:应用S P 法检测 p - E R K 阳性细胞,稀释度为i :3 0 0 。细胞胞核或胞浆 被染成棕黄色的为阳性细胞。每个大鼠随机取两张切 片,每张切片在显微镜
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