复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴细胞体外增殖活化影响的研究.pdf
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1、中 华 中 医 药 1 4 8 8 学 刊 第2 6 卷第7 期 2 O O8 年7 月 中华中医药学刊 C H I N E S EA R C H I V E SO FT R A D l T l O N A LC H I N E S EM E D l C l N E V 0 1 2 6N o 7 J u l 2O08 复方昆明山海棠颗粒对小鼠淋巴 细胞体外增殖活化影响的研究 徐艳1 ,何黎1 ,郑永唐2 ,万屏1 ,农祥1 ( 1 昆明医学院第一附属医院皮肤科,云南昆明6 5 0 0 3 2 ;2 中国科学院昆明动物研究所,云南昆明6 5 0 2 2 3 ) 摘 要:目的:研究复方昆明山海棠颗
2、粒( c o m p o s i t et r i p t e r y 舀u mh y p 时a u c 岫h u t c h ,C T H H ) 对小鼠脾淋巴细胞 增殖、活化标志C D 和C D 2 5 及细胞因子I L 一4 及Y I F N 的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。 方法:无菌分离小鼠脾淋巴细胞,加入不同浓度的复方昆明山海棠颗粒溶液,M 1 - I 法检测C o n A 刺激的小鼠脾淋 巴细胞增殖;流式细胞仪检测活化标志C D 曲及C D :,;酶联免疫法检测细胞因子I L 一4 及1 一I F N 。结果:C T H H 对 脾淋巴细胞增殖活化及分泌均有抑制作
3、用。 关键词:复方昆明山海棠颗粒;淋巴细胞增殖;淋巴细胞活化;免疫抑制;细胞因子 中图分类号:R 一3 3 文献标识码:A 文章编号:1 6 7 3 7 7 1 7 ( 2 0 0 8 ) a r 7 一1 4 8 8 一0 5 S t u d y0 fC o m p o s i t eT r l p t e g i u mH y p o g I a u c u mH u t c hO n t h eM o u s e s p I e n i cL y m p h o c y t y eA c t i V a t l o ni nV i t r o x uY 明1 ,H EL i l ,z H
4、 E N GY g t a n 9 2 ,w A NP i n g i ,N o N Gx i a n 9 1 ( 1 D 印8 n r n e n t0 fD e m a t o l o g y ,1 1 l eF i r B tA 佑l i a t e dH 衄p i t a l0 fK u m 咄M e d i c a lC o l l 呼,K u m i n 9 6 5 0 0 3 2 ,Y u n n 肌,C h i 眦; 2 K u n I I l i n gI n s t i t I l t e0 fz l o 舒,C h i n e A c a d e m yo fS c i
5、e n 嘲,K u n m i n g6 5 0 2 2 3 Y u n n 肌,C h i n a ) A b s ”a c t :0 蜘以协e :T bs t u d yt h ed f e c t so fc o m p i t et r i p t e r y 西岫h y p o g l a u c 啪h u t c ho nt h em o u s e ss p l e I l i cl y m - p h o c y t ep r ;o l i f b r “o ,a c t i V “m r kB u c h 鹪c D 曲a n dc D 2 5 ,c ”o k i n es u
6、 c h 衄I L 一4 肌d1 一I F N ;P r o v i d i n gm o l e c u l a r 比值,用来反映荷瘤小鼠阴虚状况。总体上,各荷瘤组小鼠 在病程初期,去瘤体重相近,以后逐渐分化,阴虚程度逐渐 严重。其趋势是模型组 0 0 5 。 表24 8 h 复方昆明山海棠对小鼠脾淋巴 细胞增殖的影响( ,l = 3 ,i 5 ) 注:以S P s S l l 5 软件方差分析与对照组比较,护 0 0 5 。 表37 2 h 复方昆明山海棠对小鼠脾淋巴 细胞增殖的影响( n = 3 ,i s ) 注:经s P s s l l 5 软件方差分析与对照比较,a ,c ,P 0
7、 0 5 0 4 讨论 复方昆明山海棠以昆明山海棠为主药另加黄芩、甘草 等9 味中药组成,临床观察发现该组方有免疫抑制作用。 脾是体内最大的外周淋巴器官,脾中T 细胞占3 5 ,B 细 胞占5 5 。本实验表明复方昆明山海棠颗粒高剂量时对 c o r 认诱导的小鼠淋巴细胞增殖有明显的抑制作用提示该 药可能对小鼠的细胞免疫及体液免疫均有抑制作用。 T 细胞是整个免疫应答的中心环节,以T 细胞为靶向 的免疫干预( i m m I u l o i n t er v e n d o n ) 能有效地控制对机体有 害的免疫应答,如移植排斥、病理性自身免疫反应等】。 现有的免疫抑制剂都是通过阻断细胞行为(
8、 抗原识别、活 化、增殖、克隆扩增、分化效应者机制等) 的信息传递而实 现的H 1 如相对特异性免疫抑制剂环胞霉素( 简称c 3 A ) 和 F l ( 5 0 6 ,它们的免疫药理作用主要表现在对细胞活化和增 殖的抑制。因此,本文又以细胞的活化为靶标,研究对细胞 行为的影响,探讨其作用机制。 万方数据 第2 6 誊第7 期中华中医药学刊V 0 1 2 6N o 7 2OO8 年7 月 C H I N E S EA R C H I V E SO FT R A D I T I O N A LC H l N E S EM E D I C I N E j I l l 20O8 ( ) :用流式细胞仪
9、分析经6 一H m m c D 3 一F r I c 荧光染色的小鼠脾淋巴细胞以决定小鼠脾淋巴细胞所在的区域;( B 、c ) :加入a 瓶一- m m C D 3 一 F T l 、枷一M 一c D 田一P E 用流式细胞仪双色荧光分析加入不同浓度药物后c D 胡的表达情况8 未加c o n A 组( c D 表达率只有6 5 3 ) b 经c o l l A 刺 激6 h 后( c D 6 9 表达率升高到7 8 1 6 ) ;c c o n 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液1 2 5 0 斗m L c D 6 9 表达率降至1 4 9 ;d c 刺激下分别加入复 方昆明山海棠颗粒溶液
10、2 5 0 p 晷m L ,C D 胡表达率降至9 7 4 ;e C o n A 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液5 0 川I I l L ,c 表达率降至1 4 1 2 ;c A 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液l O 嵋m L ,c D 表达率降至3 5 1 4 ;g 。c o n A 刺激下分别加人复方昆明山海棠颗粒溶2 嘴m L ,c D 表达率为 6 5 2 3 h c o n 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液O 4 峙m L ,C D 臼表达率为7 7 5 6 。( D 、E ) :加入n m 一c D 3 一F 1 T c 、d m o 一C D 2 , 一P E 用
11、流式细胞仪双色荧光分析加入不同浓度药物后c D 巧的表达情况8 未加c o l l A 组( c D ”表达率只有8 1 ) b 经c o r L 刺激6 h 后( c D 2 5 表达率升高 到7 5 1 3 ) ;c c a n A 刺激下分别加人复方昆明山海棠颗粒溶液1 2 5 0 峙m L ,c D 2 5 表达率降至2 8 7 ;d c o n 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液 2 5 0 嵋m L ,c D 2 5 表达率分别降至4 4 l ;c c o n A 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液5 0 瑚l I I L ,c D 2 5 表达率分别降至1 5 1 8 ;f
12、c o n A 刺激下分别加 人复方昆明山海棠颗粒溶液l O 彬r I I L ,c D 2 5 表达率降至3 3 3 l ;g c A 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液2 m L ,c D 表达率分别为5 7 2 l h C o n 刺激下分别加入复方昆明山海棠颗粒溶液0 4 I I l L ,C D 2 5 表达率分别为7 4 2 6 。 图l复方昆明山海棠颗粒对小鼠脾淋巴细胞C D ,细胞表达C D 和C D 拈的抑制效应 目前,已有多种方式可以诱导细胞活化,刀豆蛋白 ( c o n c 阴a v a l i n A ,c o n A ) 可以与结合刺激细胞内C a 2 + 释放,
13、从而诱导细胞活化,C o n A 是最先发现的T 细胞多克隆激活 剂( 8 c t i v t o r ) ,能诱发增殖反应,故属于有丝分裂原( m i t o g e n ) :丝裂原c o n A 经T c R c D 3 复合物激活胞内信号途径, 很可能需通过z A P 7 0 、跏、k k 等上游的蛋白酪氨酸激酶 中 华 中 医 药 1 4 9 1 学 刊 万方数据 第2 6 卷第7 期 2 O O8 年7 月 中华 C H I N E S EA R C H I V E S 中医药 O FT R A D l T l O N A L 学刊 C H I N E S EM E D l C I
14、 N E V 0 1 2 6N o 7 J u l 2OO8 ( P n ( ) 进行信息传递垆。oo ;细胞活化后可诱发静止细胞分 泌淋巴因子( 如I L 一4 、 一I F N 等) ,同时表达一系列新的 表面分子( 包括高亲和力c D 笛和c D ) o 等。这些分子被 称为活化标志,其中最早表达的是C D 。细胞激活后1 2 h 即可检测到c D 的表达,并且迅速达到高峰,可持续1 8 2 4 h 。C D 在多种血细胞的激活过程中表达并与胸腺细胞 的发育有关,说明其对细胞的生理功能起到广泛的甚至关 键性作用,作为细胞激活后最早表达的蛋白,C D 。可以引发 一系列的免疫反应,但是目前
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