多巴胺对缺血再灌注大鼠心肌热休克蛋白表达的影响.pdf
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1、1 4 6中国医科大学学报J C h i n M e d U n i v 第3 5 卷第2 期2 0 0 6 年4 月 多巴胺对缺血再灌注大鼠心肌热休克蛋白表达的影响 张明吉 , 胡健, , 吴迪2 ( 1 . 中国医 科大学附属第一医院循环内 科, 辽宁 沈阳 1 1 0 0 0 1 ; 2 . 第8 8 期临床医学7 年制) 摘要目 的: 检浏心从细胞缺血再灌注( I R ) 过程中 热 休克蛋白7 0 ( H S P 7 0 )的表达, 探讨多巴胺对H S P 7 0 表达的影响。方 法: 不同时间阻断W i s t a r 大鼠冠状动脉的前降支, 用含多巴 胺或生理益水的灌注液再灌注5
2、 h 后, 取出 心脏前降支支配区的全 层心肌组织; 用W e s t e n B l o t 方法检浏H S P 7 0 的 表达。结果: 心肌细胞的H S P 7 0 表达随缺血时间的延长而增加, 缺血3 0 m i n 时 表达最高, 其后逐渐减少; 灌注液含多巴 胺的实 脸组较相同 缺血时间的灌注生理盐水的对照组H S P 7 0 表达均有明显增加( 尸 0 . 0 5 ) 。结论: 心肛H S P 7 0 表达与心肌缺血相关, 且呈时间 依赖性, 最大缺血耐受时间为3 0 m i n 左右。多巴胺在心从缺血再 灌注过程中 促进H S P 7 0 的表达。 【 关键词缺血再灌泣; 热休
3、克蛋白7 0 ; 多巴 胺 【 中圈分类号R 5 4 文献标识码A 文章编号0 2 5 8 - 4 6 4 6 ( 2 0 0 6 ) 0 2 一 0 1 4 6 一 0 3 E f f e c t o f d o p a m i n e o n h e a t s h o c k p r o t e i n - 7 0 e x p r e s s i o n i n i s c h e m i c - r e p e r a t h e a r t Z H A N G M i n g 一 i t , H U J i a n t , W U D i 2 ( 1 . D e p a rt m e
4、 n t o f C a r d i o l o gy, T h e F i r s t A ff i l i a t e d H o s p i t a l , C h in a M e d i c a l U n i v e r s i t y , S h e n y a n g 1 1 0 0 0 1 , C h i n a ; 2 . T h e 8 8 t h g r a d e o f s e v e n - y e a r s y s - t e m , D e p a rt m e n t o f C l i n i c a l M e d i c i n e ) A b s
5、t r a c t O b j e c t i v e ; T o i n v e s t i n g a t e t h e e x p r e s s i o n o f h e a t - s h o c k p r o t e i n s 7 0 ( H S P 7 0 ) i n i s c h e m i c - r e p e r f u s e d m y o c a r d i u m a n d t h e e ff e c t o f d o p a m i n e o n H S P 7 0 e x p re s s i o n . Me t h o d s ; T h
6、 e a rt e r i e s w e r e r e p e r f u s e d w i t h p e r f u s a t e c o n t a i n i n g d o p a m i n e o r s a li n e f o r 5 h o u r s a f t e r t h e a n t e r i o r d e s c e n d i n g b r a n c h e s o f l e f t c o r o n a ry a rt e r i e s o f W i s t a r r a t s w e r e li g a t e d f o
7、r d if f e r e n t d u r a t i o n s ( 0 , 1 5 , 3 0 , 4 5 , 6 0 , a n d 9 0 m i n u t e s ) . E a c h l a y e r o f m y o c a r d i u m m a n i p u l a t e d b y t h e l e f t a n t e r i o r d e s c e n d i n g b r a n c h w a s s a m p l e d , a n d H S P 7 0 e x p re s - s i o n i n t h e m y o
8、c a r d i u m w a s d e t e c t e d b y u s i n g W e s t e rn B l o t . R e s u l t s ; H S P 7 0 e x p re s s io n i n c r e a s e d w i th t h e p r o l o n g a t i o n o f i s c h e m i c d u r a t i o n , r e a c h e d t h e p e a k 3 0 m i n u t e s a f t e r i s c h e m i a , a n d t h e n d
9、e c r e a s e d s l o w l y . H S P 7 0 e x p r e s s i o n i n a rt e r ie s re p e r f u s e d w i t h p e 而- s a t e c o n t a i n i n g d o p a m i n e w a s s i g n i f i c a n t l y h i g h e r t h a n t h a t i n a rt e r ie s re p e r f u s e d w i t h s a li n e ( P 0 . 0 5 ) . C o n c l u
10、s i o n ; T h e e x p r e s s io n o f H P S 7 0 i s c o r r e l a t e d w i t h m y o c a r d i a l i s c h e m i a i n a t i m e 一 d e p e n d e n t m a n n e r . D o p a m i n e m a y i n c r e a s e H S P 7 0 e x p re s s i o n d u r i n g i s - c h e m i c re p e r f u s i o n . K e y w o r d s
11、 i s c h e m i c re p e r f u s i o n ; h e a t s h o c k p r o t e i n 7 0 ; d o p a m i n e 急性缺血再灌注( i s c h e m i a r e p e r f u s i o n , I R ) 损伤 是目前应用静脉溶栓和冠状动脉球囊扩张支架手 术, 治疗急性心肌梗死后发生的一系列病理生理过 程。 热 休克 蛋白7 0 ( h e a t s h o c k p ro t e i n s 7 0 , H S P 7 0 ) 在心肌应激状态中起保护作用。多巴 胺作为治疗心 肌梗死的常用药物可能发
12、挥对抗缺血再灌注损伤保 护心肌的作用。目 前国内外综合研究急性缺血再灌 注损伤时H S P 7 0和多巴胺的的报道鲜见。本研究 利用动物模型和分子生物学方法, 深人探讨心肌 H S P 7 0 表达与急性缺血再灌注损伤的关系, 以及多 巴胺在此过程中的作用。 1 . 1 材料与方法 材料 1 . 1 . 1 实验动物及分组: 成年W i s t a r 大鼠4 8 只, 体 作者简介7张明吉( 1 9 7 7 一 ) , 男, 医师, 硕士. 现在鞍山市中心医 院工作. 研究方向: 心血管病的临床防治 通讯作者胡健, E - m a i l ; h u j 二 一 m u h o t m a
13、i l . c o in 重( 2 7 0 土 1 5 ) g , 雌性2 3 只, 雄性2 5只( 中国医科大 学动物中心) 。随机分为2 组, 每组2 4 只。第1 组 为生理盐水灌注组, 结扎冠状动脉时间分别为0 ( 不 结扎) , 1 5 , 3 0 , 4 5 , 6 0 , 9 0 m i n , 第2 组为多巴胺注射 液5 w g / ( m i n k g ) 灌注组, 结扎冠状动脉情况和时 间同第1 组。各组的每个结扎时段设4 只大鼠。 1 . 1 . 2 药品与试剂: 盐酸多巴胺注射液( 上海禾丰 制药有限公司) ; H S I 7 0 抗体( 小鼠 单克隆I g G ,
14、购于 美国S A N T A C R U Z 公司) 。 1 . 1 . 3 主要仪器: T K R - 2 0 0 型呼吸机( 江西特力麻 醉呼吸设备公司) 。 1 . 2 方法 1 . 2 . 1 大鼠在体心肌缺血再灌注模型建立: 大鼠 腹腔麻醉后, 颈静脉穿刺建立静脉输液通路, 气管切 开连接小动物呼吸机给予机械通气( 潮气量6 m l , 6 0 次/ m i n ) , 连接二导记录仪描记肢导心电图。沿 左侧胸骨旁线切开大鼠 皮肤, 剪开心包, 按压胸壁将 心脏挤出胸腔, 在左心耳下方连同大静脉一并结扎 第2 期张明吉等. 多巴胺对缺血再灌注大鼠 心肌热休克蛋白表达的影响 1 4 7
15、 左冠状动脉前降支( 不结扎组只穿线不结扎) , 闭合1 . 3 统计学分析各组结果以z士! 表示, R u - 胸腔, 令其恢复自主呼吸。根据分组在不同的时间o c h i m V 2 . 0 软件采集灰度值, 采用S P S S 1 1 . 0 统计 点, 剪断结扎线恢复心肌血液供应进行再灌注, 同时软件进行t 检验。 经颈静脉插管输再灌注液5 h o灌注结束后立即取 山。 _ 。 *,。*士士。二、 , _ 。,、。, 。 。 相如2 结果 出心脏, 剪取前降支支配区左心室的全层心肌组织 c a fi ( 1 . 5 c m x 1 . 5 c m ) , 一 7 0 冰箱保存。2 .
16、1 不同缺血时间H S P 7 0 表达 1 . 2 . 2 W e s t e rn b l o t 检测: 心肌组织匀浆后加人生理盐水灌注组大鼠, 缺血0 - 3 0 m in内, 心肌 3 0 0闪裂解液( 1 x P B S , 1 % N P , , 0 . 5 %脱氧胆酸H S P 7 0 表达量随缺血时间的延长而增加, 缺血3 0 钠、 0 . 1 %S D S ) , 4 冰浴超声振荡, 1 2 0 0 0 r / m i n 离m i n 时表达最高, 自4 5 m i n 起H S P 7 0 表达量逐渐减 心3 0 m i n , 取上清, 加人3 0 0闪样品缓冲液(
17、0 . 3 1 2少。 多巴 胺注射液 再灌注液组与生理盐水再灌注液 m o l/ L T r i s H C l p H 6 . 8 , 1 0 % S D S , 2 5 %p 一 琉基乙组大鼠H S P 7 0 表达量随缺血时间变化规律相似。 醇, 0 . 2 5 %澳酚蓝、 5 0 %甘油) , 沸水煮5 m i n 。按总2 . 2 多巴 胺对H S P 7 0 表达的影响 蛋白3 0 w g 上样。1 0 %分离胶4 %浓缩胶 S D S 一多巴胺注射液再灌注组与生理盐水再灌注组相 P A S E电泳 1 . 5 h , 硝酸纤维素膜转印2h ( 电压比, 不结扎冠状动脉的大鼠(
18、缺血0 m i n ) H S P 7 0 表 5 0 V ) , 5 %脱脂奶粉封闭5 h , 一抗( 1 4 0 0 ) 孵育过夜,达无显著性差异; 而对于各缺血时段的大鼠, 给予多 H B P 柄 林 己 山 羊抗鼠I g G ( 1 : 5 0 0 0 ) 孵育2 h , 碱性磷酸酶巴 胺灌注液的心肌H S P 7 0 表达较对照均明显增加 检测。( 表1 ) 0 表1 多巴 胺注射液组与生理盐水组的再灌注心肌H S P 7 0 表达比 较( i t s ) T a b . 1 H S P 7 0 e x p r e s s io n i n t h e m y o c a r d i
19、 u m o f d o p a m i n e - r e p e r f u s e d g r o u p a n d s a li n e - re p e r f u s e d g r o u p ( z 士 s ) 缺血时间( m i n ) 夕 了 习 In一- 一一一 0 1 5 3 0 4 5 6 0 9 0 分组 生理盐水组 多巴胺组 2 4 2 4 3 1 . 2 t 1 . 4 7 3 1 11 . 4 4 3 5 . 2土1 . 1 7 5 0 . 1 士 2 . 7 5 ) 6 0 7 0 . 2土 2 . 7 5 . 5 t 1 . 8 3 1 4 0 . 21
20、1 . 1 3 4 7 . 6 士 1 . 2 9 1 3 3 . 7 1 2 . 2 9 4 1 . 4 1 1 . 1 5 1 3 1 . 8士2 . 2 1 3 7 . 7 t 2 . 1 9 ) 注; 1 ) 与生理盐水组比 较P 0 . 0 5 3 讨论 急性缺血再灌注损伤是脏器移植、 体外循环及 冠状动脉再通术( 冠状动脉溶栓术溶栓、 经皮冠状 动脉成形术或冠状动脉搭桥术) 等的一个重要并发 症和致死原因, 此外, 没有自 觉症状的缺血再灌注损 伤可能常发生于心血管疾病人群中。心肌再灌注损 伤主要包括4 种类型: 再灌注心律失常、 心肌顿抑、 微血管损伤、 坏死和凋亡等不可逆改变
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