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1、大鼠心室重构模型的制作 徐信群8 ,曾俊义6 ,应国秋“,魏云峰6 ( 南昌大学第一附属医院a 干部病房;b 心血管内科,南昌3 3 0 0 0 6 ) 7。 摘要:目的为研究心审重构的发生,发展机制及评价治疗,提供简单易行的大鼠心室重构实验模型。方法大 鼠以3 戊巴比妥钠麻醉,经气管插管。左胸第3 、4 肋间开胸,结扎左冠状动脉前降支,4 周后行心脏彩超左心审功 能及组织形态学检查。结果术后4 周内大鼠死亡率为2 3 3 ,存活4 周的人鼠心肌梗死率I 达7 6 7 。心室功 能及心肌组织发生了改变。结论结扎大鼠冠状动脉前降支制作心肌梗死模型简单、有效、重复性好,可为研究心 室重构提供稳定的
2、= 尖验模型。 关键词:心肌梗死;心室重构;动物模型;大鼠 中图分类号:R 一3 3 2文献标识码:A文章编号:1 0 0 0 - - 2 2 9 4 ( 2 0 0 9 ) 1 1 - - 0 0 0 7 - - 0 3 E s t a b l i s h m e n to fR a tM o d e lo fV e n t r i c u l a rR e m o d e l i n g X UX i n q u n 9 ,Z E N GJ u n y i “,Y I N GG u o - q i u 6 ,W E IY u n f e n g “ ( a C a d r e sW a r
3、 d ;b D e p a r t m e n to J C n r d i o u 以5 0 Z ( J g y ,t h eF i r s tA f f i l i a t e d H o s p i t a lo fN a n c h a n gU n i v e r s i t y ,N a n c h a n g3 3 0 0 0 6 ,C h i n a ) A B S T R A C T :O b j e c t i v eT oe s t a b l i s hac o n v e n i e n ta n i m a lm o d e lo fv e n t r i c u
4、l a rr e m o d e l i n gi nr a t s t Os t u d yt h em e c h a n i s ma n dt h e r a p e u t i ce v a l u a t i o no fv e n t r i c u l a rr e m o d e l i n g M e t h o d sT h er a t s w e r ea n a e s t h e t i z e dw i t h3 s o d i u mp e n t o b a r b i t a l T r a c h e o t o m yi n t u b a t i o
5、 na n dl e f ta n t e r i o rt h o r a c o t o m yt h r o u g h3 ,4i n t e r c o s t a lr e g i o nw e r ep e r f o r m e da n dt h el e f ta n t e r i o rd e s c e n d i n gc o r o n a r y a r t e r i e sw e r el i g a t e d A f t e r4w e e k s ,a s s e s s m e n to fh e a r tf u n c t i o nb ye c
6、h o c a r d i o g r a p h ya n dp a t h o l o g i c a le x a m i n a t i o nw e r em o n p h o l o g y R e s u l t s R a tm o r t a l i t yw a s2 3 3 a n dt h es u r v i v a lr a t e w a s7 6 7 i n4w e e k sa f t e ro p e r a t i o n T h ec a r d i a cf u n c t i o na n dp a t h o l o g yw e r ei n
7、f l e c t e d C o n c l u - s i o nT h ep r o c e d u r a lm y o c a r d i a li n f r a c t i o nw a se a s yt ob ep e r f o r m e dw i t hh i g he f f i c i e n c ya n dr e p e t i t i o n ,a n di tw a sv a l u a b l ei ni n v e s t i g a t i o no fv e n t r i c u l a rr e m o d e l i n gi nr a t s
8、 K E YW O R D S :m y o c a r d i a li n f r a c t i o n ;v e n t r i c u l a rr e m o d e l i n g ;a n i m a lm o d e I ;r a t s 急性心肌梗死是严重危害人类健康的常见心血 管病。急性心肌梗死后发生代偿性反应,心窒重构 引起的心力衰竭是心肌梗死后死亡的主要原因之 一。心搴重构在细胞水平上表现为心肌细胞肥大、 问质纤维母细胞增生及间质纤维化,后者使心肌硬 度增加、顺应性F 降2 | 。本实验采用结扎大鼠冠状 动脉前降支制作心肌梗死模型,喂养4 周观察大鼠 心肌形态及心功能
9、变化。 1 材料和方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物与分组 健康的S D 大鼠7 0 只,雄性5 0 只,雌性2 0 只, 鼠龄1 8 周,体质虽( 3 0 0 2 0 ) g ,由南昌大学医学院 实验动物科学部提供。随机分为心肌梗死手术组 ( 心梗组6 0 只) 和假手术组( 1 0 只) 。 1 1 2主要试剂、仪器与设备 3 戊巴比妥钠( 上海化学试剂公司进口分装) , 心电图机( 上海光电医用电子仪器有限公司) ,彩色 多酱勒诊断仪( P h i l i p sI E3 3 ) ,动物手术操作台( 自 制) ,小型动物呼吸机( 江西南昌玖玖电子仪器厂) 。 1 2 方法 1 2
10、1 动物模型复制 心梗组:参照采用开胸结扎左冠状动脉前降支 建立急性心肌梗死模型。具体如下:S D 大鼠称重, 收稿1 3 期:2 0 0 9 0 5 3 1 基金项目:江西省自然科学基金( 0 6 4 0 1 8 9 ) 作者简介:徐信群( 1 9 7 5 一) ,男,硕士,主治医师,主要从事心血管病学的研究。 万方数据 8 江西医学院学报2 0 0 9 年第4 9 卷第1 1 期 A c t aA c a d e m i a eM e d i c i n a eJ i a n g x i2 0 0 9 ,V o l4 9 ,N o1 1 以3 戊巴比妥钠腹腔注射进行麻醉( 3 0m g k
11、 g ) , 待动物失去自主活动能力后将其仰卧位固定于动物 用手术台上。备皮、消毒手术野,消毒范围上至左侧 锁骨,下至肋弓下缘,左至左侧腋前线,右至右锁骨 中线。于心尖搏动最强处作一横行切口,长约 1 5 2c m ,逐层钝性分离皮下组织及胸壁肌肉,至 暴露出肋骨及肋间肌。此时连接动物用人工呼吸 机,调整呼吸频率为6 0 次m i n ,呼气与吸气时间比 为1 :l ,观察动物胸部起伏情况来确定呼吸机是否 工作正常。然后钝性分离第4 或第5 肋间肌进入胸 腔,用眼睑撑开器支撑开肋问,暴露心脏,剪开心包, 辨认心脏位置和解剖标志,在左心耳下缘与肺动脉 圆椎间距主动脉根部约2m m 处,以左冠状静
12、脉为 标志,用6 0 眼科无创缝合针穿过左冠状动脉前降 支深部,进针深度为0 3 0 5m m ,小心打结,观察 心电图动态变化,肢体导联上出现S T 段上抬 0 2m V 以上,同时肉眼观结扎区域变白,术后每隔 1 0m i n 复查1 次心电图,如连续3 次S T 段继续抬 高为结扎成功。仔细检查心脏无出血时关胸,用0 号丝线先I 日J 断缝合肌肉( 包括胸大肌、前锯肌和肋间 肌同时缝合) ,最后1 针先穿针打虚结,通过此间隙 插入5m l 。去针头注射器用于胸腔抽吸,边抽吸边打 结使胸腔恢复负压,然后缝合皮肤。待大鼠出现吞 咽动作时,拔除气管插管,术毕肌肉注射青霉素4 0 万U 以预防感
13、染。 分别于手术前、术中进行心电图的描记。描记 时以针式电极刺入大鼠四肢,记录肢体导联的心电 图并作对比,根据心电图记录的Q R S 波和S T 段的 变化来判断梗死模型是否建立成功。结扎成功的标 志:结扎后1 2m i n 内可见心电图J 点或S T 段 抬高与高耸的T 波融合,呈弓背向上单向曲线; 肉眼观坏死区心肌呈灰白色;病理检查有心肌缺 血和心肌梗死;心肌酶升高。4 项中具备1 项者 为结扎成功。 假手术组:开胸不结扎冠状动脉。 图1 结扎前降支4 周后,前降支 缺血瘢痕形成 1 2 2 心功能指标测定 术后4 周,行心脏彩超测心功能,采用彩色多普 勒超声诊断仪,探头频率1 0 0M
14、H z 。大鼠常规麻 醉,仰卧位固定,胸前备皮,于左胸骨旁取左心长轴 观和左室乳头肌短轴观。连续记录3 个心动周期的 二维图像,记录左室收缩末期内径( L V E D d ) 、左室 舒张末期内径( L V E D s ) 、计算左室射血分数、缩短 率( F S ) ,室间隔厚度( V F d ) 、斜长末期左室后壁厚 度( L V P W d ) 。所有测量值均取3 次测量的平均值。 1 2 3 心肌组织形态学 鼠心肌梗死4 周后,开胸取出心脏,常规H E 染 色可明确梗死范围。即剪下的心脏,在冰生理盐水 中洗去血液,用1 0 甲醛溶液中固定2 4h ,石蜡包 埋切片,并对固定后的心肌组织制
15、作石蜡切片,切片 厚度为3 “m 。 1 2 4 统计学方法 数据用均数标准差( i s ) 表示,用统计软件 S P S S l l 0 分析,组间比较采用t 检验,P 0 0 5 为 差异有显著性。 2 结果 2 1 心肌梗死大鼠的存活情况 梗死模型制作术中麻醉剂麻醉效果良好,未出 现麻醉意外,呼吸机性能稳定。假手术组无死亡。 心梗组最终有4 6 只大鼠存活4 周以上,达到实验终 点,成活率为7 6 7 ;1 4 只死亡( 2 3 3 ) ,其中手术 中因心律失常死亡4 只,术后7 2h 内因心力衰竭和 呼吸道阻塞死亡8 只,术后1 2 周因心力衰竭死亡 2 只。 2 2 心肌梗死模型的心
16、肌形态 大鼠心梗模型建立成功,喂养4 周,心功能检查 完后,开胸取出心脏,心脏标本町见前降支所供血 区,瘢痕形成( 图1 ) 。心梗组与假手术组病理切片 比较,显示心梗组心肌纤维排列紊乱,核溶解,甚至 心肌细胞消失,形成胶原纤维,心脏发生重构,进一 步证明心肌梗死模型成功( 图2 A B ) 。 A :假手术组;B :心梗组 图2 心肌组织的H E 染色 万方数据 2 32 组心室重构及心功能指标 鼠心肌梗死后4 周时,肉眼观察梗死区由瘢痕 组织替代而变薄、苍白,非梗死区心肌肥厚,左心室 腔扩张。心梗组超声指标测值与假手术组比较有非 常显著性差异( P 0 0 1 ) ,见表1 。 表12 组
17、超声指标测值比较( i 士s ) 1 卉讯 排列紊乱,核溶解,甚至心肌细胞消失,形成胶原纤 J 。匕 维,心室发生重构。 动物心肌梗死模型的制作是研究心室蕈构的发 采用传统的冠状动脉结扎作为一种复制心肌梗 生、发展机制及评价治疗的霞要手段 2 。建立动物死模型,此方法简单、有效、重复性好,不需要特别仪 心肌梗死模型的方法归结起来主要有:冠状动脉器,效果稳定可靠,可用于心室重构的实验研究。 曼煮鬯竺要篓譬竺萎竺苎竺篡手童篓妻曼竺聋 参考文献: 等 3 J ,后者仅适用于较大动物;心肌直接损伤法, 一 包括液氮冷冻、电灼、心肌内注射毒素等。冷冻法、 1 O l i v e t t eG C a p
18、 a s s oJM ,M e g g sLG ,e ta l C e l l u l a rB a s i so f 电凝烧灼法都不是阻断血管后引起的心肌缺血坏 c “i 。V 。m i 。“1 8 R 。o d 8 1 1 i “ga f t e r M y 。8 8 i 8 1 1 “8 眦o “ 死与心肌梗死自然发病过程有较大差异。夕 周注 2 兰裳罴擞1 J :沆篡黧嘶砌。帅, 射异丙肾上腺素的不足之处在于不能人为的控制心d i a lI 。f a r c t i 。i 。t h eM o 。:c 。d i a 。s t 。t 。,。l a n dF 。t i 。l 肌梗死的部位,使
19、得一些要求准确定位的研究难以C h 。g e S J C a r d i o ,a s cR 阮1 9 9 9 ,4 1 ( 3 ) :5 8 6 5 9 3 进行。在小鼠心肌梗死模型中,目前应用较广泛的 3 徐淑云,卞如濂陈修药理实验方法学 M 3 版北京:人民 制作方法是冠状动脉结扎。心肌梗死后引起心室重 卫生出版社, 2 0 0 1 :1 0 5 3 构的主要刺激因素是力学超载和神经激素系统的激 4 3 茎纛戋裹翥:三鬻后的心室重构口l 中华心血管病杂 活H 1 。局部心肌缺血坏死失去收缩功能,心室壁运 5 P o u l e nSH , H o s tNB , J e n s e nS
20、E , e t 。1 R e l a t i o n s h i pb 。t 。 动不协调,出现心室壁变薄、膨出,心脏扩大,最终导S e r o t aA m i n o - t e r m i n a lP r o p e p t i d 。o fT y p 。珊P r o c o l l a g 。d 致不可逆性心力衰竭。心肌梗死后肾素一血管紧张 C h a n g e so fL e f tV e n t r i c u l a rF u n c t i o na f t e rA c u t eM y o c a r d i a l 素系统激活5 、醛固酮的作用、基质金属蛋白酶l n
21、f a r c t i o n J C i r c u l a t i o n , 2 0 0 0 ,1 0 1 ( 1 4 ) :1 5 2 7 - 1 5 3 2 ( M M P s ) 的作用嘲、大量炎性因子的作用啪,通过多 6 N g “y 。“Q c 0 1 。m ? F c 1 8 :1 。“! R i 28 “A T 1R e c e p t o A n t a g 一 种机制作用于心肌细胞及基质细胞,直接和( 或) 间 F 。t i o 。j P h 。咄p 。d 。,:。g t h eE 。,l yP h 。f R 。0 d 。l i 。g 接地影响心室的重构。本实验表明,开
22、胸结扎大鼠P o s t - M I E J B ,JP h 。咖。1 。2 0 0 3 ,1 3 8 :1 4 8 5 1 4 9 4 心脏左冠状动脉前降支造成心肌梗死,缺血区心肌 7 3 S i p k e n sJA ,K r i j n e nPA ,M e i s e h lC , e ta 1 H o m o c Y s t e i n eA f f e c t s 颜色变化,随后心电图记录S T 段持续抬高,Q 波形 C a r d i o m y o c y t eV i a b i l i t y :C o n c e n t r a t i o nD e p e n d 州
23、E f f e e 8 “R e 一 成,心梗模型建立成功。术后喂养4 周,彩超结果表 ”r 5 i 6 1 eF 1 p - f l o p , A p o p 。8 i 8a n dN 。啪8 i 5 J A p o p t o s i 8 2 0 0 7 1 2 明冠状动脉结扎心肌梗死模型L V E D d 、L V E D s , ( 责任编辑:罗芳) E F 、F S 心功能下降。心脏大体标本可见前降支所 供血区,瘢痕形成;H E 染色病理切片显示心肌纤维 ( 上接第6 页) 病、恶性肿瘤、单纯疱疹患者及对光过敏者是激光脱毛的禁 理及临床应用 J 激光与光电子学进展,2 0 0 6 ,4 3 ( 3 ) , 5 2 5 5 忌证。 z 包晓青,朱菁,秦梅香,等L i g h tS h e e r 半导体激光脱毛的疗效 参考文献: 评价 J 应用激光,2 0 0 7 ,2 7 ( 3 ) :2 4 1 - 2 4 4 , 2 4 7 1 3 邵建霞,任秋实马晶波8 0 0 。、8 1 0 。半导体激光的脱毛机 ( 责任编辑:锌荣梅) 万方数据
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