密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率影响的研究.pdf
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1、密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率影响的研究 张相民, 王世峰, 辛伟, 邓瑶, 李仁清, 闫克夏, 齐香荣, 高瑛瑛, 谭文杰, 鲁宁, 孟昕, 阮力 (中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所, 北京 ! “ “ “ # $) 摘要: 为了研究密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率的影响, 分别采用痘苗病毒及其宿主细胞的优势密码子对绿 色荧光蛋白基因进行改造, 利用荧光、% 的转录产物能 够有效表达, 细胞核内生成的富含12;的转录产物可能受核膜屏障或其它核内因素影响而不能有效表达。因 此, 胞浆内繁殖的特性是痘苗病毒载体具有密码子宽容性的主要原因。此研究为痘苗病毒载体和常用真核表达载 体的选择使用提
2、供了重要实验依据。 关键词: 密码子偏性; 痘苗病毒载体; 基因表达 中图分类号: = ? 文献标识码: 1 文章编号: ! “ “ “ ? = $ ! ($ “ “ A) “ # “ 9 # “ “ ? 收稿日期:$ “ “ A “ $ ! =;修回日期: $ “ “ A “ # $ # 基 金 项 目:/ B C ? 细胞为本室保存。 “ 酶、 抗体与试剂限制性内切酶、 碱性磷酸酶和: JA B 7 连接酶购自: . ; . 2 .公司。高保真A B 7聚合酶 (% K L) 购自 G K ? , Y, B ) 和 密码子适应指数 (/ ) + ? ,. ? . % / . / E , E
3、 , ? + Z, 1 7 ) 。其中,B 作为衡量密码子使用偏性的指标, 反映基因有效使用的密码 09C 9期 张相民等: 密码子偏性对痘苗病毒载体表达效率影响的研究 子种类的多少, 即基因使用密码子的偏性程度 ! ! 。其数值 一般在“ # ! $ !之间, 考虑到不同基因的长度不同、 编码的氨 基酸组分不同, 在计算时通过校正消除这些影响。% 、, ; ?和 A =四种氨基酸外, 其它氨 基酸的同义密码子在人中使用频率最低的反而在痘 苗病毒使用频率最高。即使( ; 、, ; ?和 A =这 四种氨基酸同义密码子的使用频率在人和痘苗病毒 之间也存在明显的差别 (表!) 。 表! “ # $
4、 %、 F ( ,* *“ 2$6#8 8! 4) !4#2 ( (! “, !“#6( , 8! #! 6# , ; M, ( , (“ 92! 3#8 ,2! !# , ( (“ 3, )9! $8 (3! 2#! , ; ? , , ( -! #! ! 2#8 C =( ( ,! :2! 3# , , ,“ :944#( ,! 3! :# , , (! :( .3#“ “( (! :4 34# , , 8! “4 “4#( 8! :) ,:! $ N I H ( , 0“ 232#8 ? =8 ( , +4 #9! #! ( 8“ !, !:#28 ( 8“ $, -:! # ) ; A
5、( 8 , ,“ #6! “#0 ? $ A B ? C B ? D E ? C D ( 9 I I “ 表达水平的荧光分析 重组病毒! “ # $ $ % ? A ? A 3 J ; C ; A K) * +1 L M = 1 ; ; 1 N? J = “ “ ; C 0 1 2 3 B 1 ; -O + = A ( 3 = F 1 =;$ O - A B F;G O “ “;E O ! “ # $ $ % C ; A K) * +1 L M = 1 ; ; 1 N ? J = “ “ ; C 0 1 2 3 B 1 ; / 真核细胞质粒瞬时表达分析痘苗病毒载体密码 子宽容性的机理 以 等
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