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1、2 5 0 C MN F S K J O U R N A L . O F C L I N I C A L A N A T OM Y V o l . 1 9 N o . 3 2 0 0 1 实 马 全不 开究 成年大鼠脑神经元a F G F 基因m R N A表达 王清华 , 徐如祥 , 钟世镇2 ( 1 _ 第一军医大学珠江医院神经外科, 广东 厂 5 1 0 2 8 2 ; 2 _ 解剖学 教研室, 广东广州 5 1 0 5 1 5 ) 【 摘要 目 的: 为a F G F 对成年大鼠 脑内神经元的作用提供理论依据。 方法: 观察了成年大鼠脑内神经 ) m P N A 表达分布情况。 结果;
2、 成年大鼠 脑皮质、 海马、 下丘脑和中 脑神经元核内均有不同 程度的a F G F 基 因表达结论: a F G F 在脑多个部位神经元的表达可能与 神经元的存活和功能活动的维持有关。 【 关键词a F G F ; 基因表达; 脑;大鼠 1 中图分类号 R - 3 3 2 ; 8 3 9 4 . 3 ; 8 3 3 9 【 文献 标识 码】 A 文章编号 1 0 0 1 - 1 6 5 x ( 2 0 0 1 ) 0 3 - 0 2 5 0- 0 2 a MF m R N A e x p r e s s i o n 成b r a n n e u r o n s i n a m il t t
3、a t s n 月 5 0 Q i n q - h u n , X U R o - x i a n g , Z H O N G S h i - z h e n g - V e u r o n rr g e l , Z iu g ia n g H o s p ita l , t h e F ir s t M il ita ry M e d ic a l U m a e r s it y , 剑e c f l v e : T o p r o v i d e t h e o re t i c a l b a s i s f o r t h e e ff e c t o f a F G F o n h
4、 y m n G u a n 脚o u 5 1 0 2 8 2 , C h in a n e u ron s o f a d u l t n i t s . Me d wd: u s i n g t h e m e te d o f i n s it u 场 e x t e n t i n c e re d ra l c o d e x 月u p T h e d is tr ib u ti o n s o f a F G F m R N A e x p re s s i o n o f b r a in n e u ro n s in a d u l t r a t w e re b r ir
5、a e o n . R e w h : T h e a F G F m R N A in n u e l e u s o f n e u t er s w a s e x p r e s s e d in p o c a m p u s , h ip p u d w l m w a n d m i d b r a i n . C o n c l u si o n : T h e e x p r e s s io n o f a y ( ; F g io n s c o u l d b e re l a t e d t o t h e s u rv i v a l a n d f u n c t
6、 i o n o f n e u ro n s i n n e u n x s i n m u l t i p l e b r a i n re- K e y w o r d s a F G F ; g e n e e x p r e s s io n ; b ra in ; ra ts 成纤维细胞生长因子( F G F ) 因为能刺激成纤维细 胞 增殖而于1 9 7 4 年被发现 , 该家族至少有7 个成 员, 其中酸性成纤维细胞生长因子( a F G F ) 和碱性成纤 维细胞生长因子( b F G F ) 是最卞要的两个成员, 因为各 白氨基酸残基的等电点为酸性和碱性而得名。实际上 两者
7、的基因结构有高度的同源性, 均通过同样的受体 发挥相同的生物学作用。F G F 对中胚层及外胚层源的 组织和细胞具有广泛的促增殖作用, 在机体的胚胎发 育、 血管形成、 创伤愈合及神经系统的生长发育过程中 起重要作用。近年来 F G F在中枢神经系统中的作用 引起人们的极大重视。研究发现, a F G F 主要对中枢神 经元发挥作川, a F G F 对来源于脑多个部位的体外培养 神经元有营养支持作用, 表现为促进神经元的存活和 突起 生长2 , 在体内 也 能促进受损伤 神经 元的 恢复川, 因而a F G F 被认为在中枢神经系统创伤时神经元修复 和神经功能重建中 起重要作用川。本文观察了
8、成年大 鼠脑多个部位神经细胞 a F G F 基因rn R N A表达规律, 为 进一步了解a F G F在中枢神经系统的作用提供一些参 考 , 材料和方法 1 . 1 土要试剂及来源重组人a F G F 质粒, 全长3 . 4 5 k b , 含0 . 5 k h 的人a F G I 片 段由 军事医 学科学院三 所八室提供; 乒 一 a c ti n 片 段购自 华美生物工程公司; 蛋白酶 K 、 地高辛标记与检测试剂 盒购自B o e h r i n g e r M a n n h e i m 公司; D E P C , 继鱼精子D N A , 酵母1R - 1 a , 硫酸葡聚糖购自S
9、 ig m a 公司; 甲酸胺购自S e v a 公司 1 . 2 实验动物 成年雄性S D大鼠1 0 只, 体重( 2 5 0 t 1 0 ) g , 由 第一军医大学实验动物中心提供, 实验前、 后动物自由饮食、 饮 【 收 稿日 期 N I X 】 一 0 7 一 1 9 【 基金项目 】 广 东省 科技攻 关项目 ( 9 9 M P 1 6 0 6 G ) 【 作者简介I 王清华( 1 9 6 5 一 ) , 男, 云南丽江人 博1 : , 主治医师, 主要 4 , 事领脑创伤研究, T P I ; ( 0 2 0 ) 8 5 1 4 3 6 2 3 水 1 . 3 组织固定及取材 动
10、物用1 0 %水合氯醛0 . 3 5 留吨体重腹 腔内注射麻醉后, 经升主动脉快速灌注生理盆水 1 5 0 m l , 继之 快速灌注冰冷的4 %多聚甲醛( 。1 m o l P B S , 州 7 . 4 配制) 2 0 0 m l , 再用冰冷的4 %多聚甲 醛3 0 0 . 1 慢速灌注2 h , 最后灌注5 % 蔗糖( 0 . 1 m a l P B S , 声7 . 4 配制) 2 0 0 m l , 取脑浸人2 0 %蔗糖4 C 过夜 1 . 4 原位杂交用振动切片机行3 0 I-连续冠状切片, 切片用 0 . 1 m o l P B S ( p H 7 . 4 , D E P (
11、 : 水配制) 洗3 次, 2 p g / n d 蛋白酶 K 3 7 cC消化切片 3 0 m i n , 4 %多聚甲醛固定 5 m i n , 0 . 1 m o l P B S ( p H 7 . 4 ) 洗3 次, 人S O N 1 / 切k杂交液, 4 2 杂交过夜。杂交液 成分: 5 x S S C , 2 %B l w k i n g R e a g e n t , 5 0 %去离子甲酞胺, 2 % S D S , 1 0 % 硫酸葡聚 糖, 0 . 1 m o l 二 硫苏糖醇, 2 0 0 闻m l 变 性蛙鱼精子 D N A , 5 0 I ,g / m l 酵母tR N
12、 A , 0 . 5 W m l 变性的地高辛标记a F G F D - N A 探针。经杂交后漂洗, 人5 0 四 切片的1 : 1 0 0 0 鼠抗地高辛 抗体一 碱性磷酸酶抗体, 室温过夜。用缓冲液 1 ( 0 . 1 m o 1 T r is . C I , 州7 . 5 , 0 . 1 5 m o l N a d ) 及缓冲液5 0 n m x il M 9 C lz ) 各漂洗2 次, N B T / B C B 4 C S Z 色过夜, T E 终止反应, 裱片、 脱水、 透明、 中 性树 胶封片 原位杂交设阳性对照和阴性对照。阳性对照: 单独使用地 高辛标记的p 一 a c t
13、 in 探针, 结果为阳 性 阴性对照: 杂交前使用 1 0 0 解m l 的R N A - 3 7 9C 孵 育3 0 m i n 或杂交液内 不加地高辛标 记的a F G F 探针, 结果为阴性 2 结果 原位杂交观察到, a F G F m R N A表达仅见于神经元, 双侧大脑皮质、 双侧海马、 下丘脑及中脑神经元核均有 不同程度的a F G F m R N A表达。其中以皮质和海马、 中 脑神经元的表达最高, 下丘脑神经元表达较弱。在皮质 中, 以基底前脑、 顶叶的神经元表达最强。双侧海马 C A I - 4 及齿状回神经元 a f G F m R N A有均一表达。在 F 丘脑,
14、a F G I 表达以腹内侧核为明显( 图I 一 4 ) , 万方数据 中 国 临 床 解 剖 学 杂 志 2 0 0 1年 第 1 9卷 第 3期2 51 3 讨论 虽然体外实验已证明中枢神经系统能够合成 a F G F , 并对神经细胞具有营养支持作用, 但对 J 它们 在脑内的分布却知之甚少。有研究发现 a F G F 、 在中枢 神经系统发育的不同阶段其表达出现的时间和程度不 同应用免疫组织化学方法观察到, 在胚胎第 1 8 d , 中 脑感觉神经元最先表达 a F G F蛋白, 而皮质运动神经 元在出生时出现a F G 】表达。出生后第2 8 d 以后脑各 个部位的神经元a F G
15、F 蛋白表达达最高值, 持续至成 年期 5 1 。本文应用原位杂交观察到成年大鼠 脑各个部 位的神经元有选择性 a F G F r a R N A表达, 其中以额叶和 顶叶、 海马神经元为明显, 胶质细胞未见a F G F r n R N A 表达。观察a F G F m R N A在脑内的表达特点有助于认 识a F G F 在正常生理状态下的神经生物学特点, 并对 研究中枢神经系统退行性疾病如 P a r k i n s o n , 病、 A lz h e i m e r s 病的发生机理有重要意义。a F C F在成年 大鼠脑各个部位神经元的表达说明其可 能为神经元 的必需营养因子, 与神
16、经元的生存和功能活动的维持 有关在病理情况下, 神经元 a F G F m R N A表达的缺乏 可能与上述疾病关系密切。已知皮质一 纹状体神经元 死亡是P a r k i n s o n s 病的主要病理改变, A l z h e i m e r s 病 的 发生是由于 大脑 皮质、 海马 等部位的 神经 元缺失6 两者的发生和发展均与神经元的凋亡有关。最近, 有 学者认为, 神经元微环境中的些毒性物质与神经营 养因子的比例失调与神经元的凋亡有关。体外实验证 实, a F G F可以对抗谷氨酸对神经元的抑制突起生长及 死亡等毒性作用一 7 一 。a F G F 作为主要作用于神经元的 营养因
17、子, 可能对上述退行性疾病的治疗起一定作用。 在脑缺血和脑损伤周围组织内a F G F含量明显升高, 说明脑损害后神经细胞的修复需要a F G F 的存在 4 a F G F 脑室内注射可防止缺血区海马C A I 神经元的损 伤和 死亡8 ,9 , 表明a F G F 对中 枢神经神经元的 生存 是 必需的, 并在中枢神经系统损伤修复中起重要作用 研究a F G F 在脑内神经元的表达具有重要意义 ( 本文图1 - 4 及其说明见播图第4 页) 【 参考文献】 川 金曼林 童坦君 成纤维细胞生长因子研究进展 J 生理科学进展, 1 9 9 4 , 2 5 : 1 5 7 . 巨 W a lic
18、 k e P A . B a si c a n d a c id ic f ib aa b l a s t g ,o w th fa c to r h a v e m 户c e ff e c ts o n s u m m a fi v u rm il ti p le C N S v4-J,1 N e u m e c i , 1 9 9 8 , 8 ( 7 ) : 2 6 1 8 - 3 1 F ig u e ir e d o B C , P i - d o P , M a y s ia g e , U , d a d . E ff e c ts o f a c id ic fib ro b l
19、a m gm-f, f a c to r o n c h o l i n a g c n - o f n u c l e u s 1 a r v a l is s a g a o o c B W a n s a n d in a a p s ti l m e m or y ta s k Mo w i n g co r t i c a l d e - s c ul a - - J . N -i- , 1 9 9 3 , 5 6 ( 4 ) : 9 5 5 - 6 3 4 1 M + :c h e a i 1 , W r m h d l J B . N a r r a n o p h ic fa
20、ct o r s i n c m tr a l n e r v o u s . y w e m t , a u - m a J . J N , 1 9 9 5 , 1 2 ( 5 ) : 8 5 3 一 7 0 5 K u z is K , 肠 ” 】 S , C h e r r y N J , e t a l . D e v e l o p m e n t a l t i m e ,o f a c i di c an d b a c k f i b r a b l- g ro w th f e c to re 甲 n 翅】田in d i s t in c t r e l lW a r p o
21、 p n la i + ta o f t h e re d c e n t ra l n e r v o u s s y s te m J . 1 C m p N e m o 1 , 1 9 9 5 , 3 5 8 ( 1 ) : 1 4 2 一 5 3 6 C u m m v rg s e 1 , S a 1 H , C e d d es W , d d . A g g re p p ti m o f t h e a m y l o id pr-or p ra ta n ( A P P ) w ith in d e g e n e r a ti o n.a n d d y s m 润 。m
22、m d tes m A 1 7 1 . 二 , s d i s e a s e J 7 - N -u -, 1 9 9 2 , 4 8 : 7 6 3 . 7 C h a rg 13 , M c N l a h a n D C , M a ti MP. M a d ir W- of c a lc iu m c m r e r rt , M tr a - c e ll u l a r c a l c im n l e v e ls a n d c e l l 闷 场 咖d e p r i v a ti o n a n d g r o w th fa c t- in M p p o c a m p
23、 a l - J I . B, a in li e s , 1 9 9 3 , 6 0 7 : 2 7 5 【 引M a c M inm v , W a k o n n l c , D a v is 1 . A c id ic s b m b la s t g n w rt , fa c to r in fm im r e d u e -w l w n i c C A I h ip l 州 习 胜 叱 u s d a m a g e i n 侃 g e r b i l 1 . C a n 1 N - d S e i , 1 9 9 3 , 2 0 ( 1 ) : 3 7 . 9 1 C . -
24、 . P , C a r c e ll e r F , M - W I , e t . t . I n t r a v e n o u s f i M o b la s t g n ,w t h f - l a , p en e tr a t e s t h e b l o o d 一 M a i n b a r r i e r a n d p ro te c ts 1 自 a ca m p d n a r m n s a g a i n s t is a h e m i。 一 m p e rr s io n M im y 1 . s m g N - 1 . 1 9 9 8 . 4 9 ( 1
25、 ) : 7 7 一 8 3 . 脊柱推拿的基础与临床 已出版 由 钟世镇院士主审, 李义凯博士主编的( 脊柱推拿 的基础与临床 一书已由军事医学科学出版社出版。 全书共2 0 余章, 3 0 ( ! 余幅擂图。本书是为开展眷柱推 拿和有关脊柱推拿手法研究 提供临床解剖学和生物力 学基础和依据的专业书, 是推拿医师、 理疗康复科和相 关学科医师以及中医院校的骨伤、 推拿和针灸专业的 学生、 进修生以及研究生的参考书。定价7 0 元。另 外, 由李义凯博士编写, 钟世镇院士主审的 汉英人体 骨骼肌学习 手册 一书, 已由人民军医出版社出版。本 书采用简练的中英文语言, 从方便学习和实用的角度, 对人体骨骼肌的起止、 作用、 神经支配和血液供应等基 本的解剖学内容加以介绍。定价 巧元。联系电话: ( 0 2 0 ) 8 5 1 4 8 2 5 5 ( 办) , 8 5 1 4 0 3 7 5 ( 宅) 。E 一 二 1 : o r th o # m d- m u . e d u . c n , 联系地址: 广州市同和第一军医大学中医 系骨伤科( 5 1 0 5 1 5 ) 。联系人: 李义凯。 万方数据
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