戊四氮点燃大鼠海马GAP-43表达的变化.pdf
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1、 5 4 .中国实用神经疾病杂志2 0 0 5 年3 月第1 1 卷第3 期 C h i n e s e j o u r n a l o f p ra c t i c a l N e r vo u s 压s e a s e s M a r. Z o 0 8 , voL l l N o 3 戊四氮点燃大鼠海马 G A P 一 43 表达的变化 杨改清1) 方树友幻 1)郑州市中心医院神经内科郑州 4500002)郑州大学第一附属医院神经内 科郑州450052 【 摘要】 目的 用戊四氮点嫩大鼠模型对海马中G A 卜43 的表达进行研究, 探讨在癫响形成过程中 法将 20 只健康成年雄性SD 大鼠
2、随机分为 2 组, 每组 10 只。1 组为生理盐水对照组, 11 组为点燃组 。 G A R43 表达的变化。方 用免疫组化方法显示各组 动物脑切片G A 卜 43表达的变化, 并用H PIA S I O 00多媒体病理图文分析系统对其定量。 结果各组海马结构内G A P- 43免疫反 应产物呈板层样分布, 多为点状或颗粒状沉积于神经毡内, 血管、 白 质、 神经元及胶质细胞不染色. 定量结果显示, 点燃组海马C A 3 区苔辞纤维层、 齿状回颗粒细胞层、 齿状回 分子 层内 带G A 卜 43免疫反应产物C O D 值与 对照组相比 显著增加( P 0 . O 5)。 结论 点 燃组动物海
3、马齿状回颗粒细胞层、 齿状回内 分子层及苔醉纤维层G A P- 43含量较正常表达增加. G A P- 43表达增加, 一方面是点嫩 的结果, 另一方面可能是点燃维持的分子基础. 【 关键词】 斑病形成; 癫痢; 点燃; 戊四氮; 海马; 生长相关蛋白 【 中图分类号】 R 一3 3 2L 文献标识码】 A【 文章编号】 1 6 7 3 一 5 1 1 0 2 0 0 8 ) 0 3 一 0 0 5 4 一 0 2 近来在不同的癫响模型和人类癫痢灶的形态学研 究中发现有进行性神经元丢失, 胶质细胞增生和突触 重组等神经可塑性变化。目 前点燃现象( ki n dlin g ) 已 作为研究癫殉形
4、成和脑可塑性变化的理想模型。生长 相关蛋白( g r o w t ha s s o c i a t e dp r o t e i n , G A P 一 4 3 ) 是一种 神经元特异性胞膜磷酸蛋白, 与神经系统生长发育、 再 生、 轴突生长和突触重组密切相关, 对G A P-43 的检测 可以反应轴突的生长及突触的形成。本文拟在建立大 鼠戊四氮( p e n t y l e n e t e t r a z o l , P T Z ) 点燃模型的基础 上, 观察大鼠脑内G A P-43 表达水平的变化, 以探讨癫 响形成过程中脑的可塑性变化。 1 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 .
5、1 实验动物及分组: 健康成年雄性 S D大鼠20 只, 随机分为2 组, 每组 10 只。1 组为生理盐水对照 组, 11组为P T Z点燃组 。 1 , 1 . 2 主要试剂和仪器戊四氮粉剂( p e n t y l e n t e t r - ez ol e , P T Z), 美国S i g m a 公司产品, 用前配成1 %生理 盐水溶液, 以3 5 m g / k g 腹腔注射( i n t r o p e r i t o n e a l , 1 p ) , 给药容积为3 . 5 m l / k g 。 小鼠抗G A P 一 43单克隆抗 体( 美国Si g m a 公司产品) ,
6、 用前配成 1, 4 0 0 0 溶液, 即用型超敏 S P免疫组化检测试剂盒( 美国 P o w ervi - 51 o n 公司产品, 购自北京中山生物技术有限公司) , 二 氨基联苯胺( D A B )(购自北京中山生物技术有限公 司) , L e i c a 一 R M2 0 2 5型石蜡切片机, O L Y MP U SH件2 光学显微镜, H PIA Sl o o o 高清晰度彩色病理图文报 告管理系统, 日 本光电4 317 F脑电图机。 1 . 2 实验方法 1 . 2 . 1 动物模型制作: 根据 Die hlR G等1j的方法制 作动物模型。点燃组胃管内注人生理盐水 10m
7、 l/ k g 后 l h 腹腔注射P T Z35 m g / k g ; 对照组于胃管和腹腔 内分别注人 10m l/ k g 和3 。 s m l/ k g 的生理盐水, 间隔 l h 。均 1 次/d, 于上午 8 : 00一10: 00 完成。注射完 P T Z 后观察l h , 记录痢性发作的潜伏期( 给药到首次 发作) 及病性发作级别。连用4 周。 1 . 2 . 2 动物行为观察及免疫组化检测: 痢性发作分级 标准采用S m i a l o w k i 6 级记分法 2 。0 级: 无反应; 1 级: 面部抽动、 抽鼻、 点头、 乱跑; n 级: 前肢阵挛; 111级: 前肢阵挛
8、伴有后退动作; W级: 全身阵挛并有后退、 摔 倒; V级: 持续痉挛、 摔倒。连续 3 次刺激后均表现为 W级或V级发作为点燃成功标准。点燃组点燃成功后 6 h 处死动物。灌注固定, 断头取脑, 修切组织, 石蜡 包埋。石蜡切片机连续冠状切片, 片厚5 拌 m , 每隔5 张取2张, 每例标本取片不少于 10 张。 免疫组化染色 主要步骤按链霉菌抗生素过氧化物酶法( S P法) 。 1 . 3 G A P 一 43 免疫反应结果测定应用 HPIA SI 0 0 0 多媒体彩色病理图文报告管理系统测定。G A P 一 43 免 疫反应的标记强度用光密度值( o p t i c a l d e
9、n s it y , 0 0 值) 表示, 测定部位为海马C A 3 区苔醉纤维层、 齿状回 分子层内带、 齿状回颗粒细胞层。同时测量同一张切 片的脱抵体 O D值作为背底, 因为这些区域很少有 G A P 一 4 3 免疫反应产物。G A P-43 免疫反应产物的 O D值减去背底的 O D值得到校正 O D值( C O D ) 即 G A P 一 4 3 免疫反应产物的实际光密度值。用 C O D值 进行分析可以避免染色过程中的非特异性染色导致的 误差。 每例标本被检各区测 5 张切片。 1 . 4 统计学处理方法本实验结果用 S P S S10. 0 进 行统计分析, 计量资料结果用(
10、了 士: ) 表示。 对各组 G A P 一 4 3 免疫反应产物O D值 的比较采用t 检验, 以a 二 0.05作为检验水准。 2 . 1 结果 动物行为表现和脑电图变化点燃组动物在连 万方数据 中国实用神经疾病杂志 2 0 0 8 年 3 月第 1 1 卷第 3 期C h i n e s e j o u ma l o f P ract i c a l N e rvo u : 肠吕 eases Ma r. Z o o s , V o l . 1 1 N a . 3 5 5 . 续腹腔注射闽下剂量的P T Z ( 35 m g / k g ) 1 2 d 后陆续 出现程度不等的痴性发作, 一
11、般为1 一n级发作, 各动 物出现响性发作的时间差3 d , 以后发作强度逐渐增 强, 平均于2 8d 左右达到点燃标准, 即连续 3次阑下 刺激后发作在W级以上。实验动物的病性发作约在每 次注射P T Z 后s m itt左右出现, 强度渐增, 一般在7 一 10m in达高峰, 以后逐渐减轻, 0 . s h 后少有发作。对 照组动物行为正常, 无痴性发作。 点燃组脑电图均出 现典型的多量高波幅尖慢综合波 , 对照组无痢样放 电。 2 . Z G A P 一 43 免疫组化结果各组海马结构内G A P- 43免疫反应产物分布特征无明显变化, 均呈板层样分 布, 这些免疫反应产物多为点状或颗
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