《新型BCL-2反义寡核苷酸F951对人白血病裸鼠移植瘤的治疗作用.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《新型BCL-2反义寡核苷酸F951对人白血病裸鼠移植瘤的治疗作用.pdf(5页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、2 3 0 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o 咖u lB u l l e t i n2 0 0 9F e b ;2 5 ( 2 ) :2 3 0 - 4 新型b c l 2 反义寡核苷酸F 9 5 1 对人白血病裸鼠 移植瘤的治疗作用 李东良1 2 ,吕联煌1 ,林锦娟1 ,林振兴1 ,陈英玉1 ( 1 福建医科大学附属协和医院血液病研究所,福建福州3 5 0 0 0 1 ;2 南京军区福州总医院肝胆病中心,福建福州3 5 0 0 2 5 ) 中国图书分类号:R _ 3 3 2 ;R3 2 9 2 5 ;R3 4 2 4 ;R3 9 4 2 ; R
2、7 3 - 3 5 2 ;R7 3 3 7 0 5 ;R9 7 9 1 文献标识码:A 文章编号:1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 9 ) 0 2 - 0 2 3 0 一0 5 摘要:目的研究新型反义寡核苷酸F 9 5 1 对急性髓性白血 病( A M L ) 裸鼠移植瘤b e l - 2 基因表达、肿瘤生长及荷瘤鼠生 存期的影响。方法体外大量扩增高表达b c l - 2 基因的 H 瑚细胞,皮下接种建立A M L 裸鼠移植瘤模型,采取瘤体 局部注射给药,观察F 9 5 1 及F 9 5 1 联合小剂量A m C 对肿 瘤生长及荷瘤裸鼠生存期的影响;应用荧光定量R T P e R
3、 检 测瘤细胞b e l - 2m R N A 表达;光镜观察瘤组织形态结构变化。 结果治疗1 4d 各组荷瘤鼠瘤体积、瘤重、瘤组织b c l - 2m R N A 定量分别为:N S 对照组( 1 5 1 7 3 4 0 ) c m 、( 1 2 6 9 0 9 2 ) g , 9 7 9 1 0 4C o p i e s I t g ;元义寡核苷酸( F N S ) 组 ( 1 5 9 1 3 7 7 ) e m 3 ,( 1 2 3 8 1 2 1 ) g ;8 3 1 1 0 4C o p i e s 峭;A r a C 组( 1 2 41 0 5 5 ) c m ,( 2 3 2 O
4、 4 9 ) g , 2 5 9 I o “ C o p i e s t r g ;F 9 5 1 组( 2 6 1 5 5 ) c m 3 ,( 3 5 3 0 6 7 ) g ; 1 0 1 1 0C o p i e s p , g ;F 9 5 1 + A r a C 组( 0 6 2 - r 0 4 8 ) c m , ( 1 0 5 0 6 3 ) g ,9 5 1 0 2C o p i e s 斗g ;上述各组数据显示 I ;9 5 1 有下调肿瘤细胞b e l - 2 基因表达,抑制肿瘤生长的作 用,抑瘤率为7 2 1 8 ,与N s 及F N S 对照组比差异均有极显 著性(
5、P 0 0 1 ) , 9 5 1 联合A r a - C 后治疗效果更佳,抑瘤率 达9 1 7 3 ,与A r a C 组相比差异有显著性( P 0 0 5 ) 。瘤 组织病理学检查:F 9 5 1 及F 9 5 1 联合A r a C 治疗组瘤细胞减 少,瘤细胞变性坏死,大量纤维组织增生。各组动物生存期 观察:N S 对照组( 1 3 6 7 0 8 2 ) d 、,F N S 组( 1 3 5 0 土I 2 2 ) d , A r a C 组( 2 8 3 3 1 8 6 ) d ,F 9 5 1 组( 2 9 3 3 7 4 4 ) d ,1 7 9 5 1 + A r a C 组(
6、3 7 8 3 - I - 5 8 5 ) d 。F 9 5 1 组及聃5 l + A r a - C 组生存 期延长率分别为1 1 4 5 6 与1 7 6 7 1 ,明显延长了荷瘤鼠 的生存期( P 0 0 1 ) 。结论F 9 5 1 能特异性地抑制A M L 裸 鼠移植瘤细胞b e l - 2 基因表达,激活凋亡调控机制,诱导瘤细 胞凋亡,同时增加化疗药物的敏感性,而发挥抗肿瘤作用。 关键词:自血病;骨髓细胞;急性;基因;b c l - 2 ;寡核苷酸类;反 义;药效学 收稿日期:2 0 0 8 0 9 - 2 3 。修回日期:2 0 0 8 1 l 一2 0 基金项目:福建省“2 1
7、 1 ”工程重点学科专项资助 作者简介:李东良( 1 9 6 3 一) 男,博士,主任医师,研究方向:病毒性肝 炎及恶性肿瘤的基因治疗,T e l :0 5 9 l - 2 2 8 5 9 1 2 8 ,E - m a i l : d o n g l i a n g l i 缈a i l e o m ; 吕联煌( 1 9 3 1 一) 男,教授,博士生导师,研究方向:血液肿 瘤及反义药物,通讯作者,T d :0 5 9 1 - 8 3 3 2 4 1 1 6 ,E - m a i l : f j h e m a t p u b 3 6 c n 反义寡核苷酸( a n t i s e n s e
8、o l i g o d e o x y n u c l e o t i d e , A S O D N ) 是一种被用于调控失控基因过度表达的手 段。F 9 5 1 是我们自行设计合成和筛选的针对癌基 因b e l - 2m R N A 的一种新型反义硫代磷酸寡脱氧核 苷酸( a n t i s e n s ep h o s p h o r o t h i o a t eo l i g o d e o x y n u c l e o t i d e , A S P S O D N ) ,体外药效学研究发现对急性髓性白血 病( a c u t em y e l o i dl e u k e m
9、i a ,A M L ) 细胞有明显的抑制 作用【lq 1 。本研究进一步观察了F 9 5 1 对人A M L 裸 鼠移植瘤的治疗作用,为1 7 9 5 1 治疗血液肿瘤提供可 靠的理论依据。 1 材料与方法 1 1 药物F 9 5 1 是一条在淋巴瘤细胞( C A 4 6 ) 和 白血病细胞( H L 6 0 ) 中筛选并优化的由1 8 个碱基组 成的与b c l - 2 基因m R N A 起始密码A U G 附近特异 性互补序列;无义P S - O D N ( F N S ) 是与F 9 5 1 碱基组 成相同,序列混杂的一段单链D N A ,在基因库( G e n e b a n k
10、) 中检索,没有发现与其完全互补的m R N A 序 列,作为反义序列特异性对照。二者均在O l i g o p i l o t I ID N A R N A 大规模合成仪上采用亚磷酸胺法合 成,经过纯化、脱盐、定量后分装、冻干,置一2 0 。C 保 存,纯度9 8 ( 福建省血液病研究所基因工程室 合成) 。阿糖胞苷( A r a c ) 北京双鹤药业生产。 1 2A M L 裸鼠移植瘤模型建立 1 2 ,1 H L 6 0 细胞的培养高致瘤性H L 6 0 细胞 ( 由福建省血液病研究所细胞室提供) 是将在裸鼠 体内移植成功的H I r i O 细胞,体外传代3 0 代后再移 植给裸鼠,达
11、到皮下接种致瘤率为1 0 0 的细胞,且 生物学特性检查与H L 6 0 细胞无明显的差异,仍高 表达b c l - 2 蛋白,保存备用。复苏后用含1 0 胎牛 血清( G i b c o - B R L ) 的R P M I1 6 4 0 培养液培养,细胞 初始浓度为1 1 0 8 L ,置3 7 ,5 C 0 2 饱和湿 度培养箱培养,2d 传代1 次扩增细胞,取对数生长 期的H L 6 0 细胞P B S 清洗2 次后用无血清的R P M I 1 6 4 0 培养液重悬细胞,调整浓度至5 1 0 9 L 。备 用。 1 2 2 动物饲养、移植瘤建立B A L B c 裸鼠购自 中国科学院
12、上海实验动物中心( 许可证号:S C X K ( 沪) 2 0 0 2 - 0 0 1 0 ) 。二级动物房,恒温( 2 5 2 7 ) , 万方数据 中国药理学通报C h i n e s e 劭口丌r 舢删B u d e t n2 0 0 9F e b ;2 5 ( 2 ) 2 3 1 恒湿( 4 5 5 0 ) S P F 的空气层流柜中饲养,自由 摄取食物和水,饮用水、饲料、垫料以及其它裸鼠接 触物品均经高压灭菌处理。辛6 各半,5 6w k 龄 大,平均体重为2 0g 。于每只裸鼠右后肢背侧皮下, 接种浓度为5 1 0 9 L 一的高致瘤H L 6 0 细胞悬液 O 2m l ( 每只
13、1 1 0 9 L 以个细胞) ,约5d 后即可触 及移植肿瘤生长,d7 所有裸鼠接种部位均肉眼可 见肿块隆起。瘤体测量,拍照备用。 1 3 动物分组药物处理 1 3 1 药效学研究挑选肿块大小相近的荷瘤裸 鼠2 5 只,随机分为5 组,每组5 只,辛6 兼用。1 9 5 1 治疗组每日瘤内注射( i t ) F 9 5 15m g k g ;生理盐 水对照组瘤内注射等体积( 0 3r a l ) 生理盐水;无义 对照组按相应给药途径给同等剂量的F N S ;1 9 5 1 与 A r a - c 联合治疗组每日瘤内注射F 9 5 15m g k g 一, 腹腔注射( i p ) A r a
14、- C2m g k g ;A r a C 对照治疗组 每日腹腔注射A r a k - C2m g k g ;每周测量瘤体 积,治疗1 4d 拉颈处死小鼠,剥离完整瘤块,称重, 取材备检,观察1 7 9 5 1 以及1 9 5 1 与小剂量A r a C 联 合治疗A M L 裸鼠移植瘤的疗效。 1 3 i 2 荷瘤鼠生存期观察动物、治疗分组、给药 途径、剂量与药效学研究相同,每组6 只,辛6 各半, 治疗时间2 1d ,观察荷瘤鼠生存期,准确记录死亡时 间,计算各组生存期延长率。 1 4 瘤体积及重量测定每周测量动物的体重,观 察记录肿瘤的大小( 用游标卡尺) 。按下列公式计 算肿瘤的相对体积
15、:V = L W 2 0 5 2 1 。式中V 为肿瘤的体积( c m 3 ) ,L 、W 分别为肿瘤最长和最短 的2 个径( e r a ) 。药物疗效观察:于治疗结束后拍 照,引颈处死的动物,立即剥离瘤块,称瘤重,计算各 组平均瘤重及抑瘤率( I R ) ,I R = ( 1 一治疗组瘤重 对照组瘤重) ;取材制备病理切片。 l 。5 病理组织标本的制备 切取新鲜瘤组织置于 4 中性甲醛固定液中固定7 2h 后,常规制作石蜡 切片,H E 染色,光镜下阅片并拍照。 1 6 荧光定量R T - P C R 检测瘤细胞b c l - 2m R N A 瘤组织总R N A 提取剪取约5 0m g
16、 新鲜瘤组织, 加lm lT R h o l ( G i b c o 公司) ,充分匀浆后按照说明 书步骤提取总R N A ,以其为模板严格按反转录试剂 盒( P r o m e g a ) 说明书逆转录合成e D N A 后,荧光定量 R T - P C R 反应,定量R T P C R 扩增体系:包括1 0 b u f f e r ,M g C 写,d N T P s ? P r i m e r s 、P r o b e ,A m p l i T a q G o l d , A m p E r a s e U N G 、待测e D N A ( 1 峭) 、阴性对照或标准 品模板,在P E
17、公司7 7 0 0 型S e q u e n c eD e t e c t o r 上进 行检测。 1 7 统计学处理应用统计软件S P S S1 0 0 进行 方差分析,数据两两比较应用多个试验组与对照组 均数L S D 法检验和X 2 检验。 2 结果 2 I F 9 5 1 对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用荷瘤 裸鼠在接种瘤细胞后d5 多数裸鼠即可触及瘤块生 长,d7 接种部位均肉眼可见瘤块隆起,随机分组后 开始用药治疗。N S 、F N S 对照组瘤体增长迅速, 1 7 9 5 1 治疗组、A r a c 对照治疗组和1 9 5 1 与A r a e 联 合治疗组,瘤体增长相对缓慢,在治疗
18、7d 时测量瘤 体积,F 9 5 1 治疗组、1 9 5 1 + A m - C 联合治疗组分别与 N S 及F N S 对照组相比均已有差异,d1 4 测量差异 更明显,而与A r a C 对照治疗组比无差异。1 9 5 1 与 A r a c 联合治疗组瘤块生长最慢,但d1 4 时与A r a C 化疗组比尚无差别( T a b1 ) 。 T a b1T h ee f f e c to fF 9 S lO i lt h eg r o w t ho f t u n l o r - b e a r i n ga t h y m i cm i c e T u m o rs i z e ( c m
19、 3 ) ( n = 5 ,;5 ) B e f o r et r e a t m e n t7d a y s1 4d a y s N S0 3 2 O 1 37 1 0 3 5 5 1 5 1 7 3 4 0 F N S 0 3 2 0 1 57 5 5 4 0 91 5 9 1 3 7 7 A r a C0 4 0 0 2 1 0 9 9 0 4 1 1 2 4 0 5 5 1 ;9 5 10 4 1 O 1 2 1 8 3 1 4 5 2 6 1 5 5 F 9 5 1 A m - c0 4 2 0 2 40 4 2 0 2 1 A A 0 6 24 - 0 4 8 + 。A A + P
20、 ( o t 0 5 。P 0 0 1 饵N S ;A P 0 0 5 P 0 0 1 埘F N S 2 2 F 9 5 1 对瘤块重量的影响及抑瘤率实验结束 时剥离完整移植瘤,解剖时发现N S 、F N S 对照组除 向外生长,还向腹腔生长,周围脏器受压,可见肠梗 阻、尿潴留等现象,但肿块有完整的包膜,无向组织 浸润,脏器受压后的泌尿道和消化道机械性梗阻可 能成为荷瘤鼠死亡的原因。1 9 5 1 和1 9 5 1 + A r a C 二个治疗组平均瘤重均较N S 对照组有明显减少; F 9 5 1 + A r a C 联合治疗效果最佳,优于A r a - C 组 ( T a b2 ,F i
21、g1 ) 。 T a b2T h eb o d yw e i g h t 。t u m o rw e i g h ta n di n h i b i t o r y r a t ei nd i f f e r e n tg r o u p sa f t e r1 4d a y s t r e a t m e n t ( 7 , = 5 ) W e ! i 曲t T u m o rw e i g h t I n h i b i t o r y G r o u p,一一、,一、一 ! 兰圭12 墨! 兰圭12 竖至坚! N S1 0 6 3 1 9 71 2 6 9 0 9 2 F N S1 1
22、0 2 士1 1 3 1 2 3 8 I 2 12 5 1 A m - C 1 3 8 1 3 3 2 3 2 O 4 9 8 1 7 2 F 9 5 11 8 8 1 ,1 3 3 5 3 0 6 7 7 2 1 8 F 9 5 1 + A r a - c 1 0 2 O 9 5 1 0 5 O 6 3 9 1 7 3 。 P O 0 1 埘N S ;P 0 0 5 埘A r a - C 万方数据 - 2 3 2 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n2 0 0 9F e b ;2 5 ( 2 ) F
23、i g 1T h ee x v i v ot l l l l l l O rt i s s I ei n d u c e db yF 9 5 1i n c o m p a r i s o nw i t ht h ec o n t r o lg r o u p 2 3 、F 9 5 1 对荷瘤裸鼠生存期的影响N S 、F N S 对 照组瘤体增长迅速,平均生存时间相近,为1 3d 左 右,治疗组生存期较对照组延长,平均生存期最长的 是F 9 5 1 + A r a C 联合治疗组,比N S 对照组延长约3 倍,与单纯反义治疗组或单纯化疗组相比均有差别 ( P 0 0 1 ) ( T a b3 )
24、 。 2 4 瘤组织细胞b c l - 2m R N A 水平荧光定量R T P C R 检测的b c l - 2m R N A 标准扩增曲线的相关系数 r = 0 9 9 6 ,说明整个扩增反应完全、有效。从检测结 果曲线和数值图可以看出,N S 、F N S 对照组瘤细胞 中b c l - 2m R N A 均处于较高水平;A r a - C 对照治疗 组、F 9 5 1 治疗组和F 9 5 1 + A r a - C 联合治疗组,b c l - 2 m R N A 水平均下降,F 9 5 1 组、F 9 5 1 + A r a C 组与N S 组差异有显著性( P 0 0 1 ) ,而具
25、有相同碱基数的 F N S 组与N S 组相比则无差异,说明F 9 5 1 能特异性 下调b c l - 2m R N A 水平( F i g2 ) 。 2 ,5 瘤块病理改变N S 对照组:A M L 移植瘤呈皮 下生长的单个瘤块,明显突出体表,镜下瘤体为密集 排列的瘤细胞组成,瘤细胞可浸入肌肉( F i g3 A ) ; F N S 对照组:瘤组织结构、细胞形态和N S 对照组基 本相同( F i g3 B ) ;F 9 5 1 治疗组瘤组织变性坏死较常 见,在坏死组织中可见少量瘤细胞,周边尤其是靠腹 侧仍可见残存瘤组织生长( F i g3 C ) ;A r a C 对照治疗 组可见大量肿
26、瘤细胞坏死,周边有部分炎症细胞浸 润;F 9 5 1 + A r a C 治疗组:瘤细胞稀少,变性坏死后 有大量结缔组织增生,纤维化明显,可见较多的成纤 维细胞,周边残存瘤组织较少( F i g3 D ) 。 1 4 0 1 2 0 1 0 0 8 0 6 0 4 0 2 0 O F i g2B c l - 2e x p r e s s i o ni nv a r i o u sg r o u p sd e t e c t e d b yf l u o r e s c e n tq u a n t R a t i o nR T - P C R F i g3P a t h o m o r p h
27、o b s e r v a t i o no ft u m o rl l t l 翻l l e A :N Sc o n t r o l ;B :F N S c o n t r o I ;C :F 9 5 1 :D :F 9 5 1 + A m C 3 讨论 b c l - 2 基因是第一个被发现具有抑制细胞凋亡 作用的癌基因【6J ,编码相对分子质量为2 6k u 的蛋 白质P 2 6 ,它定位于线粒体外膜、内质网和核膜“ 。 b c l - 2 蛋白在线粒体外膜的聚集,阻止线粒体释放细 胞色素C ,使细胞质内C a s p a s e 不能被激活,细胞不 能凋亡。因此b c l - 2 基因
28、过表达是细胞恶性转化的 重要原因之一。在人类恶性肿瘤中,有一半以上的 T a b3T h ee f f e c to fF 9 5 1O I Is u r v i v a lo ft u l l l o r - b e a r i n ga t h y m i cm i c e P O 0 1 懈N S ;P 0 0 5 ,P O 0 1t 蓐A m C 望一岂霹邑nv0HsQdou 万方数据 中国药理学通报C h i n e s e 陬明加。D 驯B u e t n2 0 0 9F e b ;2 S ( 2 ) 2 3 3 肿瘤组织可以检测到b e l - 2 过度表达哺1 ,且随着b e
29、l 一 2 表达的增高,患者生存期缩短,预后不良旧m 1 。因 此,降低肿瘤细胞I I - 2 基因表达,恢复正常凋亡调 控通道,可望在肿瘤治疗中收到良好的治疗效果。 近年来,以b d - 2 为靶基因的反义药物研究倍受重 视,国内外学者已筛选出一些抑制b d - 2 基因表达的 有效序列,可以不同程度地诱导肿瘤细胞凋亡或逆 转b e l - 2 基因过表达引起的耐药性,尤其是G e n t a 公 司和安万特公司共同开发的针对b d - 2 基因反义寡 核苷酸O b l i m e r s e ns o d i u m 在对滤泡性淋巴瘤、白血 病、黑色素瘤、多发性骨髓瘤和前列腺癌等的研究中
30、已被证实有一定作用【l l 1 2 J ,但因临床疗效还不够理 想,被美国F D A 否决了进入期临床的申请引,至 今尚无一种b c l - 2 反义药物上市。但是,对b c l - 2 反 义药物研究一直没有停止,有不少学者试图在已有 的序列以外的位置选择更有效的b e l - 2 反义作用靶 点以提高其抗肿瘤效果。F 9 5 1 是我们自行设计,并 在淋巴瘤细胞和白血病细胞中筛选并优化的由1 8 个碱基组成的与b c l - 2 基因m R N A 起始密码A U G 附近特异性互补序列。体外试验已发现F 9 5 1 对 b e l - 2 基因高表达的淋巴瘤细胞、小细胞肺癌细胞及 急性髓
31、性白血病细胞有明显抑制作用以J4 b 1 ,本 研究采用H L 6 0 细胞建立A M L 裸鼠移植瘤模型,对 F 9 5 1 及F 9 5 1 与小剂量A m C 联合抗肿瘤作用进行 了对照观察,结果显示F 9 5 1 对人A M L 裸鼠移植瘤 有体内抑瘤作用,抑瘤率达7 2 1 8 。近期疗效与 小剂量A m C 腹腔注射相近。F 9 5 1 与小剂量A m C 联合后抑瘤率达9 0 以上,参照新药研究对肿瘤药 物药效学的评价标准L l6 I ,对白血病治疗抑瘤率大于 3 0 为有效,可以判定F 9 5 1 瘤内注射对A M L 裸鼠 移植瘤有明显疗效。生命延长率即生存期,是评价 抗肿瘤
32、药物疗效的最可靠指标之一。本研究结果发 现单用F 9 5 1 能延长荷瘤鼠生存期达1 1 4 5 6 ,与 化疗药( A r a C ) 联合治疗可以提高化疗药物的敏感 性,延长荷瘤鼠生存期近3 倍,比F 9 5 1 或A r a C 单 独治疗疗效更明显。 荧光定量R T P C R 对b d - 2m R N A 检测结果表 明:F 9 5 1 能在体内下调A M L 移植瘤细胞1 ) c 1 - 2 基因 m R N A ,发挥了特异性封闭靶基因表达的作用。通 过下调b c l 一2 蛋白,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏 感性,诱导细胞凋亡,因此具有治疗肿瘤的作用。但 是,肿瘤是多基因疾病,
33、反义药物介导的b c l - 2 蛋白 水平下降诱导肿瘤细胞的凋亡就其本身不足治愈肿 瘤,但他们可以增加肿瘤细胞对化疗药的敏感性,可 以肯定,如果将反义药物与传统的化疗药物联合使 用将会得到更好的治疗效果,且反义药物无化疗药 物的毒副作用。因此,从某种意义上来说,以b c l - 2 为靶基因的反义治疗也许会为未来肿瘤靶向治疗提 供一些有益的启示。 参考文献: 1 】李东良,吕联煌,林振兴。陈英玉新型反义寡核苷酸F 9 5 1 诱 导自血病细胞凋亡【J 】中国药理学通报,2 0 0 7 ,z 3 ( 2 ) :2 6 0 一 3 1 】L IDL ,I m LH ,L I Nzx ,C h e
34、 nYY A p o p t o s i so fH I r i Oc e l l si n d u e e db yF 9 5 1 ,an o v e l1 1 - 2 静m ea n t i s e n a eo l i g o d e o x y n u d e o t i d e J C h nP h a r m a c dB u l l ,2 0 0 7 ,2 3 ( 2 ) :2 6 0 3 【2 李东良,吕联煌,林振兴,等新型反义寡核苷酸1 9 5 1 对H l f i 0 细胞b e l - 2 幕凼表达及细胞增殖的抑制作用【J 中国药理学 通报,2 0 0 5 ,2 1 (
35、4 ) :4 7 9 8 2 2 I j D L ,L mL H ,L i n z X ,C h e n YY D D 姗2 I e 罢山t i o n d B e i 2 2e g - p r e s s i o na n di n h i b i t i o n0 fH I - 6 0c e l l sp r o l i f e r at i o nb y1 9 5 1 。an o - v e lB e i 2 2a n t i s e n s eo l i g n d c e x p a u c l e o t i d e J 】C h nP h a r m a c o B u ,2 0
36、 0 5 ,2 1 ( 4 ) :4 7 9 8 2 3 李东良,吕联煌,陈英玉,等新型b e l - 2 反义寡核苷酸F 9 5 1 提 高臼血病细胞对阿糖胞苷的敏感性 J 中国实验血液学杂 志,2 0 0 4 。1 2 ( 6 ) :7 5 2 6 3 uDI ,L 舡LH ,C h e r tYY ,e la 1 An o v e lb c l - 2a n t i s e n s eo l i g o d e - o x y n u c l e o t i d e1 9 5 1i n c r e a s e ss e n s i t i v i t y0 fH D 6 0c e l l
37、 st oA m - C J E x pH e m a t o ,2 0 0 4 ,1 2 ( 6 ) :7 5 2 6 4 】S n a n k aH ,T s u j iS ,T m j i iM ,e ta 1 C y e i o o x y g e n a s ei n f i b t o m s u p p r e s aa n g i o g e n e s i sa n dr e d u c et u m o rg r o w t hi nv i v o J L a b l n v e 时,1 9 9 9 ,7 9 ( 1 2 ) :1 4 6 9 7 7 5 K i r k l
38、 a n dMA ,O b f i e nSG ,G o l d m a nJM A n t i s e n s et h e r a p e u t i c s i nh a e m a t o l o g i e a im a l i g n a n c i e s 【J 研J H a e m a t o ,1 9 9 4 ,s 7 ( 3 ) : 4 4 7 5 2 6 T s u j i m o t oY ,C r o o cCM A n a l y s i s0 ft h es t r u c t u r e t m n s e r i p t aa n d p r o t e i
39、np r o d u c t so fb e l - 2g e u ei n v o l v e di nh u m a nf o l l i c u l a rl y m p h o - 毗 J P r o cN a t A c a dS o ,1 9 8 6 ,韶( 1 4 ) :5 2 1 4 8 7 B r o o k sC ,D o n gz R e g u l a t i o no fm i t o c h o n d r i a lm o r p h o l o g i c a l d y n a m i c sd u r i n ga p o p t o s i sb yB c
40、 b 2f a m i l yp r o t e i n s :ak e yi nB a k J C e l l 触,2 0 0 7 ,1 5 6 ( 2 4 ) :3 0 4 3 7 8 M i y a s h i t aT ,R e e dJC 1 k 1 - 2o n e u p n R e i nb l o c k sc h e m o t h e r a p y - i n d u c e da p o p t o s i si nah u m a nl e u k e m i ac e l lk n e J B o o d 1 9 9 3 8 l ( 1 ) :1 5 l 一7 9
41、 C h a n a n K h a nA ,C z u c z m a nMS B e l - 2a n t l s e n s et h e r a p yi nB - - c e i l m a l i g n a n tp r o l i f e r a t i v ed i s o r d e r s J C u r tT r e a tO p t i o n sO n e o l , 2 0 0 4 ,5 ( 4 ) :2 6 1 7 【l O K l a s aRJ ,G i l h mAM ,K h mRE ,e la 1 O b l i m e r s e nB c l -
42、2a n t i l l s e :f a c i l i t a t i n ga p o p t e s i si na O t i P A 日L t l c e rt r e a t m e n t 【J A n t s e n s e N u c e cA d dD r 昭D e v ,2 2 ,1 2 ( 3 ) :1 9 3 2 1 3 1 1 】T o l e h e rAW ,K u h nJ ,S c h w a r t zG e la 1 AP h a s eIp h a m m c e k i n e t i ca n db i o l o g i e a lc o r
43、r e l a t i v es t u d yo fo b l i m e r s e ng o d i u n l ( g e - i l h a g e l u l e ,G 3 1 3 9 ) ,a n t i s e n s eo f i g n n u e l e u f i d et ot h eb e l - 2m R - N A a n do fd o c e l a x e li np a t i e n t sw i t l Ih o r m o n e - r e f r a e l o r yp r o s t a t e 咖c 日 J 】c nC a n c e r
44、R e s ,2 0 0 4 ,1 1 0 ( 1 5 ) :5 0 4 8 5 7 1 2 B a d r o oAz ,G o l o u b e v aO ,R a p o p o r tAP ,e ta 1 P h a s e s t u d y0 f 万方数据 2 3 4 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 9F e b ;2 5 ( 2 ) G 3 1 3 9 ,ab c I - 2a n t i s e n s eo l i g o n u c l e o t i d e ,
45、i nc o m b i n a t i o nw i t h d e x a m e t h a s o n ea n dt h a l i d o m i d ei nr e l a p s e d m u l t i p l em y e i o m ap a - t i e n t s 【J JC l i nO n c o l ,2 0 0 5 ,2 3 ( 1 8 ) :4 0 8 9 9 9 1 3 】N oa u t h o r sl i s t e d O b l i m e m e n :A u g m e r o s e n ,B C L - 2a n t i s e n
46、s eo l i - g o n u c l e o t i d e - G e n t a ,G3 1 3 9 ,G C3 1 3 9 ,o b l i m e r s e ns o d i u m J D r u g sRD ,2 0 0 7 ,8 ( 5 ) :3 2 1 3 4 1 4 林芸秀,吕联煌,林振兴,等联合新型B e l - 2 反义核酸与足叶 乙昔抑制A d 细胞肺癌细胞的增殖 J 中国药理学通报, 2 0 0 4 ,2 0 ( 1 ) :5 8 6 0 1 4 u nRx ,L uLH ,L i nzX S y n e r g i s t i cc y t o t o x
47、 i e i t yo fan o v e lB c l 一 2a n t i s e l m eo l i g o n u e l e o t i d ea n de t o p s i d eo nh u m a n $ I i l a l lc e l ll u n g c e rc e i l s 【J 强i nP h a r m a c o lB u l l ,2 0 0 4 ,2 0 ( 1 ) :5 8 6 0 1 5 魏立强一种新的b c l - 2 反义硫代磷酸寡核苷酸( 1 r 9 5 1 ) 治疗人 恶性淋巴瘤的药效学和药代动力学实验研究 J 福建医科大 学学报,2 0 0 3 。3 7 ( 1 ) :4 5 1 5 W e iLQ A n t i t u m o re f f e c ta n dp h a r m a c o k i n e t cp r o p e r t i e so f1 ;9 5 1 an o v e la n t i s e n s ep h o s p h o r o t h i o a t e o l i g o d e o x y n u c l e o t i d et oB c l - 2 。 o l lh u m a nl
链接地址:https://www.31doc.com/p-3707269.html