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1、中国生物工程杂志 C h i n a B i o t c c h n o l o g y , 2 0 0 6 , 2 6 ( 3 ) : 2 2 一 2 5 新型佐剂 D C - C h 0 1 对不同来源H B s A g 促细胞免疫比较研究* 易 学 瑞 袁 有 成 祖 萍 施 理 孔 祥 平“ ( 解放 军第 四五八医 院全军肝 病 中 心 全军肝 病重点 实验室厂州5 1 0 6 0 0 摘要目的: 筛选治疗性乙肝疫苗的候选杭原。方法: 分别用国产C H O乙肝表面抗原和酵母 乙 肝表面杭原结合 D C - C h o l 脂质体佐剂免疫B A L B / 。 小A I 周后检N 1
2、其脾细胞产生的 I L - 2和 I F N - ,的水平。E L I S P O T法评价铝佐剂和D C - C h o l 脂质体佐剂结合 H B s A g 促小鼠细胞免及反应水平。 结果: 酵 母乙 肝 表面杭原结合D C - C h o l 脂质体所诱导的I L 一和I F N - y 的水平分别为C H O乙 肝表 面杭原结合 D C - C h o l 脂质体的2 0倍和 1 1 9倍。酵母 乙肝表面抗原结合D C - C h o l 脂质体所诱导的 I L -4和I F N - y的 斑点 数分别为酵 母乙 肝表面 杭原结合铝佐剂的2 . 8 倍和4 6 . 3 倍。结论: 就
3、D C - C h o l 脂 质体佐剂而言, 酵母表达的乙 肝表面杭原细胞免 疫原性强, 是适合用于治疗性乙 肝疫苗的 候 选疫苗。 关键词D C - C h o l C H O 酵母I L - 2 I F N - w E L I S P O T 近来治疗性乙肝疫苗的研究成为乙肝治疗药物研 究的热点, 临床研究表明通过乙肝疫苗与干扰素或拉 咪吠陡联合应用, 能明显降低H B V D N A的水平, 上调 机体特异性 T h 1 类细胞因子的水平, 以非溶细胞性机 制清除H B V 川。寻 找能 增 强疫苗 细胞免 疫的 新佐剂 成为治疗性乙肝疫苗研究的策略之一, 对新型佐剂D C - C h
4、 o l 的原料合成、 制剂制备工艺及药效学进行了初步 的探索, D C - C h o l 脂质体可使乙肝表面抗原诱生的T L - 2 , I F N -y 等T h l 类 细胞因 子 提高 数倍, , ,8 7 。 国产的乙肝疫苗来自两种表达系统, 分别为C H O 表 达系 统和 酵母表 达系 统。 梁 争论等 5 1 , 张弛 等 “ 报 道不同来源的乙肝表面抗原制品对人体的保护率、 母 婴传播阻断效果、 诱导淋巴细胞增殖、 迟发型超敏反应 ( D T H) 、 免疫小鼠产生细胞因子、 C D分子表达和 C T L 反应都有差异。为使治疗性乙肝疫苗配方更趋合理, 利用E L IS A
5、法检测D C - C h o l 脂质体佐剂结合不同来源 的H B s A g 免 疫B A L B / c 小鼠 , 其脾细胞经体外 抗原刺 激产生 T h l类细胞 因子水平; 用酶联免疫斑点法 收 稿 日 期 ; 2 0 0 5 -0 8 -1 1修 回 日 期 ; 2 005 - 1 2 -0 5 。广东省科技攻关项目 ( 2 0 0 3 0工 2 0 5 ) 。通讯作者, 电子信箱. x ia n g p in g _ Icn n g (d h o t m a il. c o m ( E L I S P O T ) 检测了酵母乙肝表面抗原结合铝佐剂及 D C - C h o l 脂质
6、体佐剂免疫B A L B / c 小鼠, 经特异性抗原 刺激后分泌 I L 4, I F N- ,的 T细胞数量的差别。 1 材料与方法 1 . 1 动物和试剂 B A L B / 。 小鼠, 6 - 8周龄, 雌性, 未孕, 购自广州第 一 军医大学实验动物中心; . I L -2 , m I F N - ,检测试剂盒, 均为 法 国 D I A C L O N E公 司 产 品; m I L 4, m I F N - ,y E L I S P O T 试剂盒, U - C Y T E C H公司产品, 购自深圳达科 为公司; D C - C h o l 脂质体( 2 . 5 m g / x
7、 n l ) 佐剂由本实验室 制备; 无佐剂 H B s A g ( C H O , 7 8 . 3 4 ;a g / m l ) , 铝佐剂 H B s A g ( C H O, 2 0 00 盯m l , 批号: A 2 0 0 2 1 0 0 1 ) 由中国药品 生物制品检定所梁争论博士惠赠; 无佐剂H B s A 酬酵 母, 6 0 w g / m l F 0 1 0 6 0 1 ) , 无佐齐 g H B s A g 酵母, 1 4 0 W 群 n i l ) , 铝佐剂H B s A g ( 酵母 6 0 W m 1 , T U 1 0 6 0 1 ) 由深圳康 泰生物制品股份有限
8、公司提供。 1 . 2 疫苗样品的配制 E L I S A实验; A: 生理盐水; B : 铝佐剂 H B s A g ( C H O ) ( H B s A g 4 W/ . 1 ) ; C ; D C - C h o l 脂质体+无佐剂 H B s A g ( C H O ) ( H B s A g 4 w g . d, D C - C h o l 1 . 6 m 盯d) ; D : D C - 2 0 0 6 , 2 6( 3 )易学瑞 等:新型佐剂D C - C h o l 对不同来源 H B s A g 促细胞免疫比较研究 C h o l 脂质体 + 无佐剂 H B s A g (
9、酵母) ( H B s A g 4 A g / m l , D C-C h o l 1 . 6 m 盯ml ) 。 E L I S P O T 实验: E : 生理盐水; F : 铝佐剂H B s A g ( 酵 母) ( H B s A g 2 0 k g / m l ) ; c : D ac h o l 脂质体 + 无佐剂 H B s A g ( 酵母) ( H B s A g 2 0 p g / m l , D C - C h o l 2 m g / m l ) , 免 疫后剩余样品做外观稳定性观察, 稀释剂为生理盐水。 1 . 3 免疫 E L I S A实验: 将2 4只小鼠平均分为
10、4 组, 每只注射 2 5 0 闪相应疫苗, 皮 卜 免疫, 1 周取脾细胞。 E L I S P O T实验: 将1 8 只小鼠平均分为3 组, 每只注 射2 5 0 川相 应疫 苗, 皮 下免 疫, 1 周 取脾细 胞。 1 . 4 细胞因子检测 E L I S A 实 验: 小鼠 免疫1 周后常 规制 备 脾细 胞悬 液, 用1 0 % B P M I 1 6 4 0 培养 基调整细胞浓度至1 x 1 0 l / m l , 于 2 4 孔板每孔加 1 m l 细胞悬液, 对应的乙肝表面抗原, 盐 水组用 C H O抗原, 终浓度为5 m g / m l , 3 7 C , 5 % C
11、仇 培 养4 8 h , 收集上清, 分别用 m m一检测试剂盒和 m I F N - y 检测试剂盒检测细胞因子。 E L IS P O T实验: 小鼠免疫1 周后无菌取脾细胞, 调 整细胞浓度为 4x1 沪/ m l , 前 l d用包被抗体包被 E L IS P O T专用的% 孔培养板, 4 过夜; 用P B S T 洗板5 次; 加1 % B S A阻断, 3 7 9 0 孵育1 h ; 每只鼠分2 孔对照, 2 孔加3 0 p g / m l H B s A g 刺激; 每孔总体积为2 0 0 p , 细胞 数为4 x 1 0 5 / 孔; 3 7 -C, 5 % C 0 2培养2
12、 4 h ; 去除细胞, 加 冰冻 去离 子水2 0 0 沙孔, 培养 板置 冰上1 0 m i n , P B S T 洗 板 1 0 次; 加入生物素标记的检测抗体, 3 7 9 0 孵育 I h ; P B S T洗板5 次, 加入酶标抗生物素抗体( G A B A ) , 3 7 C 孵育1 h ; P B S T 洗板5次, 加人临时混合的显色剂L 1 1 , 暗处、 室温放置2 0 m i n ; 去离子水清洗培养板, 室温干燥 后统计结果。 2 . 2 免疫小鼠产生II , 一和I F N - T 的水平 小鼠产生 1 L 一的水平如表 1所示, 两种来源的乙 肝表面抗原免疫小鼠
13、1 周后分离脾细胞, 体外经相应 抗原刺激, D组产生 I L 一的能力最强, 为C组的2 0倍, t 二 1 0 . 4 1 2 , p 0 . 0 0 0 5 ; C 组 产生的I F N - r 水平 为B 组的 6 . 8 倍t = 6 . 6 3 7 , p 0 . 0 0 0 5 0 小鼠产生I F N - , 的水平如表1 所示, 两种来源的乙 肝表面抗原免疫小鼠 1周后分离脾细胞, 体外经相应 抗原刺激, D组产生I F N - ,的水平最高, 为C组的1 1 9 倍, t = 6 . 7 0 5 , p 0 . 0 0 0 5 ; C组产生 I F N - ,的水平为 B 组
14、的1 . 7 8 倍t 二 2 . 2 4 8 , p 0 . 0 5 0 表1 E L I S A法 检测免 疫后小鼠 产生II . 一和I F N - Y 的 水平 T a b l e 1 L e v e l o f 1 7 . -2 a n d I F N - y p r o d u c t i o n o f immu n i z e d m i ce勿 E L L S A G mp s n IL - 2 ( p 留u 1 ) I F N1 - r ( p g/.d) I伪 土0 . 1 6 2 . 3 7土1 . 8 8 1 6 . 2 3士 4 . 7 5 1 3 2 6 _ 4
15、1 士 6 6阴 of 卜 1 2 土 1 1 . 3 2 5 . 9 5 土 2. 2 1 1 0 . 5 8 士 3 . 4 6 1 1 2 6 2 . 6 4 m 4 0 5 . 2 4 0 1 D v s C ; a ) P 0 . 0 0 0 5 ; C v s B ; 6 ) P 0 . 0 5 , a ) p 0 . 0 0 0 5 2结果 2 . 1 疫 苗样 品外 观稳 定性 观察 B ; 铝佐剂H B e A g ( C H O ) 和生理盐水混合后, 混合 物仍混浊, 室温放置2 4 h有明显沉淀产生; C ; D C - C h o l 脂质体与无佐剂H B s A g
16、 ( C H O ) 和生理盐水混合后, 混 合物外观同D C - C h o l 脂质体, 室温放置2 4 h无任何变 化, 为一稳定分散体系; D o D C - C h o l 脂质体与无佐剂 H B s A g ( 酵母) 和 生 理盐水 混合后, 混合 物立 刻变混, 室 温放置2 4 h 有大量沉淀产生, 上清透明; F : 外观同B ; C: 外观同Da 2 . 3 E L I S P O T实验I L -4和I F N - -y 结果 小鼠脾淋巴细胞产生I L -4斑点数如表2 所示, 酵 母乙肝表面抗原分别结合铝佐剂和D C - C h o l 佐剂免疫 小鼠, 1 周后分离
17、脾细胞, E I I S P O T检测, 减去空白对照 后G组斑点数最多, 为 F组的2 . 8倍, t 二4 . 9 4 6 , p 0 . 0 0 0 5 , 小鼠 脾淋巴细胞产生I F N -y斑点数如表2所示, 酵 母乙肝表面抗原分别结合铝佐剂和 D C - C h o 脂质体佐 剂免疫小鼠, 1 周后分离脾细胞, E L I S P O T 检测, 减去空 白对照后 G组斑点数最多, 为 F组的4 6 . 3倍, t = 1 2 . 2 5 2, p 0 . 0 0 0 5 a 表2 E L I S P O T法检测免疫后小鼠分泌 I L -0和I F N - y 的细胞数 T a
18、 b le 2 S p o t -f o r min g c e l l o f I L -0 a n d I F N - y f rom i mmu n i z e d mi c e b y E L I S P O T G ro u p s I Ld ( S F C / 4 x 1 0 c e ll ) I F N -y 6 . 5 0 1 2. 9 2 1 5 . 3 0士1 0 . 7 5 4 3 . 5 0 土 9 既 .) S F C / 4 x 1 0 c e ll ) 1 . 5 0土1 铭 2 . 1 0士1 . 2 1 9 7 . 2 0 士 1 6 . l 7 “ 1 G
19、v s F : a ) p 0 . 0 0 0 5 中国 生物工程杂志C h i n a B i o t e c h n o l o g y V o l . 2 6 No . 3 2 0 0 6 3讨论 乙肝疫苗选择表面抗原提供了初步的实验依据 在清除细胞内病毒过程中, T h l 细胞及相关细胞因 子 起 非常 重要 的 作用。 活 化后的T h l 细 胞分泌I F N - y , I L 一等因子直接作用于靶细胞, 介导对各种细胞内感 染微生物的杀伤作用, 并可刺激 T细胞的增殖、 分化和 N K细胞的生长 , 因此在治疗性乙肝疫苗的设计 中选择 诱导高水平T h l 细胞因子的疫苗成为
20、关键。 初步结果表明不同来源的乙肝表面抗原结合新佐 剂D C - C h o l 脂质体, 诱导小鼠脾细胞产生T h l 类细胞因 子水平有很大差别, 推测这可能与不同疫苗的所带电 荷有关, 由于D C - C h o l 是正电荷脂质体, 若与带负电荷 的疫苗结合就会有明显的凝集反应。在本实验中酵母 疫苗有明显的凝集反应, 证明所带电荷为负电荷, 而 C H O疫苗不与 脂质体结合, 尝试通过调整C H O疫苗的 p H , 始终不与脂质体结合, 至于这种现象与 诱导细胞免 疫的差异的关系有待丁进一步研究。 D i m i n s k y 等h l 研究结果 表明, C H O细 胞表达的含
21、 p r e S I / S 2 , S 蛋白的乙肝表面抗原微粒表面基木不带负 电荷, 接近中性, 而酵母表达的只含S 蛋白的乙肝表面 抗原微粒表面带有大量的负电 荷( - 6 4 . 6 . V ) , 这一结果 与 本实 验一 致。 但B r u n e l 等Ls l 利用C H O 细胞表达的 含p r e S 2 和S蛋白的乙肝表面抗原结合 D C - C h o l 脂质 体免疫R A L B / 。 小鼠, 诱导出很强的细胞免疫应答, 这 可能跟疫苗本身的结构有关, 缺少p r c s l 可能带来的肤 链长度、 空间结构以及表面电荷性质的变化。国产的 C H O疫苗只含S蛋白,
22、 但其带电荷性质却于同样来源 C H O表达系统含 p r e S I / S 2 , S蛋白的乙肝表面抗原相 似。当然, 由于C H O 疫苗结构的不同, 糖基化的差异, 很可能遮盖了部分抗原决定簇, 降低了细胞免疫原 性l 9 . , 有关的作用机理有待于深人探讨。 酶 联免疫斑点法( E L I S Y O T ) 1 t 0 是在分泌细胞 原 处捕获该细胞分泌的细胞因子, 通过显色形成斑点, 从 而得出分泌该细胞因子的细胞数。该方法特异性强, 灵敏度高, 是通过检测细胞因子评价T细胞功能的新 方法。 本研究表明, H B s A g 结合新佐剂 D C - C h o l 脂质 体免疫
23、小鼠分泌I L 4和1 F N - -y的细胞数均明显高于 H B s A g 结合铝佐剂, 与以往用淋巴细胞体外刺激后 E L IS A 检 测结 果一 致1 3 1 。 就新型佐剂D C - C h i n 脂质体而言, 与酵母疫苗结合 能诱导很强的细胞免疫, 较适合作为治疗性乙肝疫苗 的 候选疫苗, 本实验为新型佐剂D C -C h o l 脂质体治疗性 参考文献 1 H o r u k e N , F ile A S M, M i e h i ta k a K , e t a l . I n v iv o i m m u rr ta a d n n b y v a u , m c th
24、 e r a p y fo ll o w in g v i ru a s u p p r e s s io n b y Im n iv u d in e ; a n o v e l a p p r o a c h fo r t re a t in g p a tie n t s w i t h c h ro n i c h e p a t it is B . J C6.二 , . 1 , 2 0 0 5 , 3 2 ( 2 ) : 1 5 6一 1 6 1 2 J H e lv a c i M, K iz il g m re s le r A , K a s ir g a F: , e t a
25、 l . E ff i c a c y o f h e p a t it is B v a c c in a t io n a n d in t e r fe ro n - a -2 6 c o n ib in u ti u n t h e ra p y v e rs u s in te rf e ro n -a -2 6 m n n o th e r a p y in c h il d r e n w it h c h ro n ic h e p a t it is B . J G a st ro e n te . l a n d H e p a ta 1 ,2 0 0 4 , 1 9 ,7
26、 8 5 - 7 9 1 仁 3 易学瑞, 祖萍, 袁有成 脂质体佐剂促进H B s A g 免疫增强作 用的研究 上海免疫学杂志, 2 0 0 2 ,2 2 ( 6 ) : 3 9 5 - 3 9 7 Y i X R , Z u P , Y u s n Y C I I . S h s m g h a i J n u m a l o f I m m u n o lo gy 2 0 0 2 ,2 2 ( 6 ) ;3 9 5 - 3 9 7 ( 4 袁有成, 易学瑞, 祖萍 等 新型佐剂及其与重组H B s A g 结 合物的那化性质的初步研究. 中国生物制品学杂志, 2 0 0 3 , . 1
27、 6 ( 3 ) ; 1 6 8 一 1 7 1 Y u a n Y C H, Y i X R , Z n P , e t a l . C h in e s e J o u rn a l o f R ln l o g ic a ls , 2 0 0 3 , 1 6 ( 3 ) : 1 6 8 一1 7 1 L 5 梁争论 李河民, 吴小音t 等 中国乙型肝炎疫苗免疫效果和 免疫机理的研究进展. 中 华实验和临床病毒学杂志2 0 0 2 , 1 6 ( 1 ) :9 1 一 9 3 L i a n g Z H L L i 1 1 M, Wu X Y , s t a l. C h i n e s
28、e J o u rn a l o f E x p e ri m e n t a l a n d C l 且n i, A V i m lu gy, 2 0 0 2 , 1 6 9 1 ) ;9 1 一 9 3 6 张弛, 廖雪雁 梁争论, 等一 不同来湃乙肝表面抗原的细胞免 疫学对比研究 中华微生物学和免疫学杂志, 2 0 0 4 , 2 4 ( 1 ) ; 4 8 -5 1 Z h a n g C H, L i on , X Y , L ia n g Z I I L , e t a l . C h i n e s e J o u rn a l o f M ic ro b io l o gy a
29、 n d Im m u n o l o gy, 2 0 0 4 , 2 4 ( 1 ) : 4 8 - 5 1 L 7 D i m i n s k y D , S c h i rm b e c k It , R e i m a m , J , e t a l. C o m p a r is o n b e tw e e n h e p a ti ti s B s u r fa c e a n tig e n ( H B s A g ) p a r ti c l e s d e ri v e d fro m m a m m a lia n c e ll s( C H O) a n d y e a
30、 s t c e l ls ( H a n s e n u la p o ly m o r p h n ) :com p o s i tio n , s tr u c tu re a n d ir n m u u o g e n i c it y V a 崔 赶 1脱 , 8 B rn n e l A , 1 9 9 7 , 1 5 ( 6 -7 ) :6 3 7 一 6 4 7 D a rb o u r e t J R . C a ti o n ic li p id D C - C h o l in d u c e s a n i m p ro v e d a n d b a l a n c
31、e d im m u n i ty a b l e to o r e re o m e t h e u n re s p n n s i v e n e s s to th e h e p u t it ie B v a c c i n e . V a c c in e , 1 9 9 9 , k 7 ( 1 7 ) : 2 1 9 2一 2 2 0 3 L , !汪春义 叶世德 陈万革等 糖基化对乙型肝炎表面抗原疫 苗的影响 微生物学免疫学进展, 2 0 (X ) , 2 8 ( 2 ) : 3 1 - 3 4 Wa n g C H Y , Y e S I I D , C h - W G ,
32、 e t a l . T re n d s i n M i c ro b i a l I m m u n o lo g y , 2 0 0 0 , 2 8 ( 2 ) :3 1 一 3 4 1 0 商小英, 庞学雯, 张华刚 等.酶联免疫斑点法检测抗原特 异 性的 C 儿 免疫 应答试验 条件 的优 化 , 畜华 微生 物学 和 免 疫 学杂 志 2 0 0 2 ,2 2 ( 6 ) : 6 7 7一 6 8 1 2 0 0 6 , 2 6( 3 )易学瑞 等: 新型佐剂D C - C h o l 对不同来源 H B s A g 促细胞免疫比较研究 2 5 S h a n g X Y , P
33、a n g X W, Z h a n g H G , e t a l . C h in e s e J o u r n a l o fM w r u b io to g y a n d I m m u n o lo g y , 2 0 0 2 , 2 2 ( 6 ) ; 6 7 7 - 6 8 7 C o m p a r i s o n o f C e l l u l a r I mm u n i t y R a i s e d b y a N o v e l A d j u v a n t D C - C h o l w i t h D i f f e r e n t H B s A g P
34、 r e p a r a t i o n s Y I X u e - r u i Y U A N Y o u - c h e n g Z U P i n g S H l L i K O N G X i a n g - p i n g ( T h e C a o i - o f L i v e r P i- - o f P L A , K e y L a b o f L iv e r D is e a s e s o f P l J k , N o 4 5 8 H o s p i ta l o f P L A G u a W h o u 5 1 0 6 0 0 , C h in n ) A b
35、s t r a c t O b j e c t i v e ; T o s c r e e n c a n d id a t e a n t i g e n f o r t h e r a p e u ti c H B V v a c c i n e w i t h a n o v e l 药u v a n t D C - C h o l . Me th o d s ; B A L B / c m i c e w e r e i n j e c t e d w i t h D C - C h o l li p o s o m e a n d H B s A g p rep a r e d f
36、r o m C H O a n d Y e a s t r e s p e c t i v e l y . O n e w e e k l a t e r , I L -4, I L - 2 , I F N - y w e r e m e a s u r e d b y E L I S A o r E L I S P O T . R e s u l t s ; T h e l e v e l s o f I L - 2 , I F N - y o f H B s A g f ro m Y e a s t w i t h D C - C h o l l i p o s o m e w e r e
37、 2 0 a n d 1 1 9 t i m e s h i g h e r re s p e c ti v e l y t h a n t h o s e o f H B s A g f ro m C H O w i t h D C - C h o l l i p o s o m e . E L I S P O T a s s a y s h o w e d t h a t th e c o u n t s o f s p o t - f o r m i n g c e l ls o f I L 4 a n d I F N 一 , o f H B s A g f ro m Y e a s t
38、 w i t h D C - C h o l l i p o s o m e w e r e 2 . 8 a n d 4 6 . 3 t i m e s h i g h e r r e s p e c t i v e l y t h a n t h o s e o f H B s A g f r o m Y e a s t w it h A l ( O H ) 3 . C o n c l u s i o n ; H B s A g p r e p a r e d f r o m Y e a s t t o g e t h e r w i t h D C - C h o l l i p o s
39、o m e m a y b e a n a p p r o p r i a t e c a n d i d a te f o r t h e r a p e u t i c H B V v a c c i n e . K e y w o r d s D C - C h o l C H O Y e a s t D ,- 2 I F N - y E L I S P O T 化学工业出版社新书 化学生物学导论 马林 古练权 主编 IS B N 7 -5 0 2 5 - 8 0 4 1 - 7定价4 9 . 0 0元 出版时间2 0 0 6 年2月 本书着重介绍了蛋白质、 酶、 核酸、 聚糖、 相互作
40、用与分子识别北 学物质与蛋白质的相互作用、 化学物质 与酶的相互作 用、 化学物质与核酸的相互作用 、 无机物质与生物大分子的相互作用、 生物氧化、 生物代谢、 遗传信息的传递与表达、 细胞和 细胞器 、细胞信号转导、 细胞周期及其调控、 细胞凋亡及其调控等内容。可作为高校化学生物学专业基础教材, 也可供从事 相关学科研究的教师、 研究生及科研人员作为参考书使用 生物医学微系统技术及应用 蒋稼欢编著 I S B N 7 - 5 0 2 5 - 8 0 5 4 - 9定价5 9 . 0 () 元 出版时间2 0 0 6年3月 本书包括微阵列芯片在内的微图型化技术、 与生物分子及细胞生物学中研究和
41、流程紧密结合的微流动技术等, 主要反 映软刻技术思路在生物科学和生物工程领域中的结合与渗透, 并描述从生物分子水平到细胞水平中所展现的相当丰富的 微技术形式和过程。本书适合从事生物医学微米一 纳米技术及相关专业的科研工作者、 教师、 研究生和本科生阅读参考 生物实验室系列植物分子生物技术应用手册 彭学贤 主编 I S B N 7 - 5 0 2 5 - 7 8 8 2一 X定价4 9 . 0 0元 出版时间2 0 0 6年2月 本书全面介绍了植物基因资源的开发、 植物基因的转化、 转基因植物的分析和应用等内容1提供 r 最新进展和相关文 献, 在实例操作后对结果进行了相应的分析讨论,在内容框架上以典型实验为单元。可供从事植物分子生物学研究和应用 开发的相关技术人员参考使用, 也可作为高等院校生物、 生物技术、 植物 农亚、 医药等专业的教学和实验指导用 书 以上图书全国各大新华书店均有梢售, 邮购加收 1 0 %邮寄费, 邮购电话 0 1 0 - 6 4 9 1 8 0 1 3 , 邮编; 1 0 0 0 2 9地址: 北京市朝 阳区惠新里3号, 收款人: 化学工业出版社发行部, 并享受其他购书优惠, 详情请致电:0 1 。 一 6 4 9 8 2 5 3 0 0 c i p . c o m. “ n , 欢迎加入“ 化学工业出版社读者俱乐部” , 可免收邮费
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