小鼠淋巴瘤细胞TK基因突变试验检测染料木素的诱变性.pdf
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1、8 8 0现代预防医学2 0 0 5 年第3 2 卷第8 期M o d e m P re v e n t i v e M e d i c i n e , 2 0 0 5 , V o l . 3 2 , N o . 8 论著】 小鼠淋巴瘤细胞T K基因突变试验 检测染料木素的诱变性 乌 R 鸣,张立实 摘要l目的: 用小鼠淋巴瘤细胞T K 基因突变试验检测染料木素的诱变性。方法: 不加S 9 活化的条件下, 用染料 木 素5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 1* / m l 处 理1 5 1 7 8 Y 细 胞3 h , 采 用 微 孔 板 法 进 行 细 胞 毒 性、 平 板 接 种 效
2、率和 突 变 频 率 测 定。 结 果: 随 染 毒剂量的增加, 染料木素对1 5 1 7 8 Y 的细胞毒性增大。染料木素能诱发I 5 1 7 8 Y 细胞t k 位点突变频率显著增高,当剂量达到 1 5 p g / m l 以 上 时 其 锈发突 变 频 率 为自 发突 变的3 倍以 上。 结论: 染料木素 对I 5 1 7 8 Y 细胞有明 显的 细 胞毒性, 并可诱发t k 基因突变。 关键词 L 5 1 7 8 Y 细胞; t k 基因突变; 染料木素 【 中图分类号R 1 1 4 文献标识码A【 文章编号1 0 0 3 - 8 5 0 7 ( 2 0 0 5 ) 0 8 - 0 8
3、 8 0 - 0 3 D E T E C T I O N O F MU T A G E N I C I T Y O F G E N I S I h 1 N B Y MO U S E L Y MP H O MA A S S A Y . W U M i n g , Z H A N G l i - s h i . W e s t C h in a S c h o o l of P u b l i c H e a l t h ,S ic h u a n U n i v e r s i t y , C h e n g d u , 6 1 0 0 4 1 . A b s t r a c t : O l 幼
4、 e c ti v e : T o d e t e c t a n d e v a l u a t e t h e T K g e n e m u t a t i o n i n d u c e d场 g e n i s t e i n . Me t h o d s : 1 5 1 7 8 Y m o u s e l y m p h o m a c e ll s w e re e x p o s e d t o g e n is t e i n a t c o n c e n t r a t i o n s 5 , 1 0 , 巧a n d 2 0 W m l f o r 3 h o ur s
5、 w it h o u t S 9 m e t a b o li c a c ti v a t io n . D e te r m i n a ti o n o f c y to to x ic i - ty , p l a t i n g e f fi c i e n c y a n d m u t a n t f r e q u e n c y w e re p e r f o r m e d b y u s i n g t h e m ic r o w e ll m e th o d . R e s u lts : C y t o to x i c i ty o f g e n is t
6、 e in f o r 1. 5 1 7 8 Y c e l ls in c r e a s e d d o s e - d e p e n d e n t ly . I n d u c e d m u ta n t f re q u e n c y w a s in c r e a s e d s i g ni fi c a n t l y t h a n s p o n ta n e o u s m u t a n t f re q u e n c y a t T K l o c u s i n 巧1 7 8 Y c e ll s a t c o n c e n t r a t i o n
7、 s o f 巧1 R S , 3 0 . 4 %R S G 剂量下的R S 可能在 1 0 %一 2 .0 %的理 想范围内, 故 正式 试验的 剂量 定为5 , 1 0 , 1 5 , 2 0 p g / n d . 2 . 2 细胞毒性测定见表 1 、图1 。随染毒剂量的增加, 各剂量组 R S G , R S , R T G均有下降趋势, 最高剂量组 R S G 为4 5 . 9 0 %, R S 为1 0 . 1 8 %, R T G为1 3 . 8 0 %, 表现出较大 的细胞毒性。 表 1 细胞毒性和突变频率测定结果 组 别浓 度 、臀 。凰 臀。 黑6) % SC D o s
8、e ( t g / d 图2 染料木素诱发1 5 1 7 8 Y 细胞t k 位点总突变频率 D M S O ( x 1 0 一 z ) 1 0 0 . 0 00 0 1 0 0 . 0 0 5 0 . 8 7 77 . 7 8 染料木素 ( ( 1m 1 ) 5 . 0 0 8 5 . 4 99 3 . 4 7 7 1 . 3 6 8 0 . 2 98 3 . 3 3 8oo 596765 ,1傀 1 0 . 0 0 巧 . 0 0 7 8 . 3 57 0 . 3 4 6 5 . 1 0 2 0 . 0 0 2 0 . 1 5 1 0 . 1 84 5 . 9 0 3 9 . 3 5 1
9、3. 8 0 . 8 5 8 1 . 2 5 . 9 4 8 4 . 6 2 6 9 8 5 . 7 1 MM S 1 0 . 0 0 4 1 . 9 3 5 9 . 8 8 2 6 . 3 2 4 1 3 . 2 3 7 9 . 5 5 注:, 与溶剂对照 ( D M S O )比较 P 0 . 0 5 2 . 3 t k 位点总突变频率及小集落百分比见表 1 、图2 0 随染料木素浓度增大,L 5 1 7 8 Y 细胞t k 位点的总突变频率有 3 讨论 本次试验中, 溶剂对照 ( D M S O )的P E O , P E 2 和,T M F 分别为6 0 . 4 4 %, 7 1 .
10、6 6 %, 5 0 . 8 7 x 1 0 - 6 ; 最高剂量组的R S 为1 0 . 1 8 %; 阳性对照 ( M A E )的突变频率与溶剂对照比 较 差异有统计学意义 ( P 0 . 0 5 )且达到溶剂对照的 8 倍以 上, 表明本试验系统可靠。 本试验结果表明,随染料木素浓度增大,L 5 1 7 9 Y细胞 tk 位点的总突变频率有升高的趋势。当染毒剂量为1 5 . 0 0 N 岁 m l 时, 染料木素即对L 5 1 7 8 Y 细胞表现出明 显的诱变性, 其诱发突变频率为自 发突变频率的3 倍以上。这与国外染 料木素在体外遗传毒性试验中呈阳性结果的报道相一致。 但现有报道多
11、数显示染料木素不具有体内遗传毒性。 R e c o r d ? 等以 染 料 木 素2 0 m g / 吨. b w 剂量喂 饲小鼠5 d 后, 小鼠 血浆中 染 料木素 浓度已 达9 . 2 娜, 远远高于长期大量 食用大豆的 人群中 血浆染料木素水平 ( 0 . 2 7 6 娜) , 仍未见 小鼠 脾细胞中 微核形成率显著增加; 但在体外微核试验中, 当 剂 量达2 5 礴 时, 染料木素能 诱导小鼠 脾细胞微核形成 率明显增加。体外体内试验结果不一致, 其原因可能是体 外试验中染料木素表现出遗传毒性需要较高的剂量, 但在 正常情况下, 如此高的剂量在体内靶组织不能达到, 从而 ( 下转第
12、 8 8 6 页) 8 8 6现代预防医学2 0 0 5 年第 3 2 卷第8 期M o d e m P r e v e n ti v e M e d ic i n e , 2 0 0 5 , V o l . 3 2 , N o . 8 表2 精液其它参数与吸烟因素的关系 姗382咖溯001019姗溯姗255 0.0.0.0.0.0.0.0.0.认 精液参数 体积 r n l p H 值 。 级活动精子百分率 ( %) a 十 b 级活动精子百分率 ( %) 精子密度 ( x 1 0 6 / m l ) 总精子计数 ( x 1 护 ) 精子存活率 ( %) 正常精子形态百分率 ( %) 白细胞
13、数计数 ( x 1 护 / m l ) 生精细胞计数 ( x 1 0 6 / m l ) 吸烟 ( n 二 5 6 8 )不吸烟 ( n 二 4 3 2 )t 值 尸值 2 . 2 1 7 1 士0 . 7 .土0 . 1 7 1 士0 . 8 5 4 8 70 . 8 1 5土0 . 2 2 4 2 6 2 2 7 8 t 6 . 0 8 8 3 5 、门口 OnJ“月峙气 种j.凡月凡 7n石U闷2 、,.吸二IJCllCU . 1 3 1 7 . 4 8 6 4 t 1 2 . 士4 3. 3 1 1 0 7 巧3951 1 2 6. 9 3 8 9 t 1 4 8 5 8 . 1 4
14、2 3士 5 9 . 2 5土1 3 0 . 8 0 6 7 t 1 . 2 . 4 3 8 9士1 . 0 0 1 6 8 7 . 4 9 4 0 t 0 . 2 2 1 7 0 1 9 . 2 5 6 9.t 6 . 7 1 1 0 8 4 4 . 7 8 1 3 11 1 . 5 9 0 2 3 印 . 3 7 7 3 13 7 . 7 4 7 3 4 1 4 6 . 9 7 3 2 3士1 2 1 . 2 5 0 8 2 6 3 . 6 7 1 3 士1 2 . 3 9 4 3 6 6 3 . 6 2 3 9 t 1 0 . 6 4 6 1 3 0 . 4 5 9 0士0 . 7 6
15、1 2 0 0 . 4 4 5 1 10 . 7 6 1 2 0 0 . 4 0 6 9 10 . 6 7 9 3 9 一3 . 6 9 2 一0 . 8 7 5 一9 . 7 8 6 一7 . 4 3 2 一3 . 4 4 3 一2. 3 5 1 一6 . 6 8 6 一5 . 又 5 5 6. 2 1 7 1 . 1 3 9 发现,吸烟者对婚年男子精液液化时间、粘稠度、凝集反 应、 p H 值、 生精细胞计数无明 显影响, 但对体积、 a 级、a + b 级活动精子百分率、 精子密度、总精子计数、精子存 活率、 正常精子形态率、白细胞计数却有明显影响。造成 精液质量下降的因素可能与下列原因
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