局灶性脑缺血及再灌注损伤IGF-Ⅰ表达的动态变化.pdf
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1、第 3 1 卷第 3 期 2 0 0 5 年 5 月 吉林大学学报( 医学版 ) J o u r n a l o f J i l i n Un i v e r s i t y ( Me d i c i n e E d i t i o n ) Vo l . 3 1 No . 3 Ma y 2 0 0 54 0 1 文章编号 1 6 7 1 - 5 8 7 X ( 2 0 0 5 ) 0 3 - 0 4 0 1 - 0 3 局灶性脑缺血及再灌注损伤I G F - I 表达的动态变化 徐忠信 ,何金井 ,莽靖 ,哥桂华 ,杨宏 . ,钱佳利2 ( 1 .吉林大学中日 联谊医院神经内科,吉林 长春 1
2、 3 0 0 3 1 ; 2 . 长春中医学院生理学教研室,吉林 长春 1 3 0 1 1 7 ) 摘要目的: 探讨胰岛素样生长因子一 I ( I G F - I )在局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及作用。方法: 采 用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组化染色、原位杂交技术检测 I G F - I 蛋白及 m R N A表达。 结果:正常组织有极低水平的I G F - I 表达, 脑缺血后表达主要位于半影区, 随缺血及缺血再灌注时间延长, 半影 区表达逐渐增强, I G F - I 蛋白及m R N A表达在再灌注2 4 h 为1 6 9 . 6 4 士6 . 9 7 , 1 6 8
3、. 6 4 士6 . 2 8 , 4 8 h 为1 6 8 . 8 6 士 5 . 3 9 , 1 7 0 . 8 6 士5 . 0 7 , 并达高峰. 结论:内源性I G F - I 表达增强, 对局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用。 关健词脑缺血;再灌注损伤;胰岛素样生长因子一 I ,半影区 中图分类号 R - 3 3 2 ; R 7 4 2 文献标识码A C h a n g e s o f I G F - Ie x pr e s s i o n i n f o c a l c e r e b r a l i s c h e mi c a l r e p e r f u s i o ni
4、n j u r y mo d e l o f r a t s X U Z h o n g - x i n , H E J i n - t i n g , MA N G J i n g , X U G u i - h u a , Y A N G H o n g “, Q I A N J i a - l i ( 1 . D e p a r t m e n t o f N e u r o l o g y , C h i n a - J a p a n U n i t e d H o s p i t a l , J i l i n U n i v e r s i t y , J i l i n C h
5、 a n g c h u n 1 3 0 0 3 1 ,C h i n a ; 2 . D e p a r t m e n t o f P h y s i o l o g y , C h a n g c h u n C o l l e g e o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e Me d i c i n e , C h a n g c h u n 1 3 0 1 1 7 , C h i n a ) A b s t r a c t ; O b j e c t i v e T o s t u d y t h e e x p r e s s i o n o
6、 f i n s u l i n - l i k e g r o w t h f a c t o r - I ( I G F - I ) i n f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i c a l r e p e r f u s i o n i n j u r y m o d e l a n d i t s c o n t r i b u t i o n . M e t h o d s T h e f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a r a t m o d e l s w e r e i n d u c e
7、 d u s i n g t h e f i l a m e n t m e t h o d , t h e e x p r e s s i o n s o f I G F - I p r o t e i n a n d I G F - I m R N A w a s d e c t e c t e d b y t h e m e t h o d o f i m m u n o h i s t o c h e m i c a l s t a i n i n g a n d i n s i t u h y b r i d i z a t i o n t e c h n i q u e . R e
8、 s u l t s T h e e x p r e s s i o n o f I G F - I w a s v e r y l o w i n n o r m a l t i s s u e s , w h i l e i n c r e a s e d m a i n l y i n p e n u m b r a a f t e r c e r e b r a l i s c h e m i a . T h e e x p r e s s i o n s o f I G F - I p r o t e i n a n d I G F - I m R N A w e r e 1 6 9
9、 . 6 4 士6 . 9 7 a n d 1 6 8 . 6 4 上6 . 2 8 , r e s p e c t i v e l y , a t 2 4 h a f t e r r e p e r f u s i o n a n d p e a k e d t o 1 6 8 . 8 6 士5 . 3 9 a n d 1 7 0 . 8 6 士5 . 0 7 a t 4 8 h a f t e r r e p e r f u s i o n . C o n c l u s i o n E n h a n c e d e x p r e s s i o n o f e n d o g e n
10、 o u s I G F - I h a s p r o t e c t i v e e f f e c t s o n f o c a l c e r e b r a l i s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y . K e y w o r d s : b r a in i s c h e m i a ; r e p e r f u s io n in j u r y ; in s u l i n - l i k e g r o w t h f a c t o r - I ; p e n u m b r a 胰岛素样生长因子 I (
11、i n s u l i n - l i k e g r o w t h f a c t o r - I , I G F - I ) 作为一种多肤在机体内参与多种 生理功能, 近年有关I G F - I 在中枢神经系统中作用 的研究日益受到重视, 已发现I G F - I 在缺血性脑损 伤病理生理中起着重要作用,尚未见局灶性脑缺血 再灌注后梗死中心区、缺血半影区I G F - I m R N A 表达动态变化报道。为探讨 I G F - I 的表达及作用, 本研究采用免疫组化、原位杂交技术从细胞及分子 水平对I G F - I 表达动态变化进行了观察。 1 材料与方法 1 . 1 动物及分组雄性
12、 Wi s t a r 大鼠,体重 2 3 0 - 收稿日期 仁 基金项目 作者简介 2 0 0 4 - 1 1 - 3 0 吉林省科技厅资助课题 ( 2 0 0 3 0 5 3 6 - 5 ) ,吉林大学中日联谊医院重点资助课题 ( 2 0 0 2 0 1 - 6 ) 徐忠信 ( 1 9 6 5 -) ,男,吉林省辽源市人, 教授,医学博士,主要从事脑血管病基础与临床研究。 通讯作者 ( T e l : 0 4 3 1 - 4 6 4 6 3 3 1 - 5 7 4 1 ) 万方数据 吉林大学学报 ( 医学版) 第 3 1 卷第 3 期2 0 0 5 年 5 月 2 5 0 g ,鼠龄3 -
13、 4 个月,吉林大学实验动物中心提 供。 随机分成假手术组、 缺血3 h 组及缺血3 h 再灌 注 3 , 6 , 2 4 , 4 8 和 7 2 h组。 1 . 2动物模 型制备大 鼠大脑 中动脉梗塞 ( MC A O )模型采用颈外动脉插人线栓法制备。 1 . 3 免疚组化及原位杂交标本制备1 0 %水合氯 醛麻醉大鼠, 暴露心脏, 以1 2 号穿刺针刺人左心室, 眼科剪刀剪开右心房,首先灌注温 0 . 9 %生理盐水 约 2 0 0 m L ,待从右心房流出液体清亮时,换用含 0 . 1 % D E P C , 4 %多聚甲醛、0 . 1 mo l “ L - P B S ( p H 7
14、 . 4 ) 缓冲液2 0 0 m L 进行灌注固定, 断头取脑。 取以视交叉为中心相当于前联合连续脑片继续固定 4 -6 h ,常规脱水,透明, 浸蜡,包埋。 1 . 4 切片制备免疫组化染色切片为常规石蜡切 片;原位杂交的切片经特殊处理:戴手套,切片机 的刀柄、刀片用 1 0 0 0 S D S进行处理,温蒸馏水展 片,并加人 0 . 1 Y o D E P C水适量,制成的切片置于 7 0 烤箱中烤2 -3 h , 放人5 0 烤箱过夜, 烤好的 切片用锡纸包裹后, 人4 冰箱或室温保存。 切片厚 度均为4 j c m o 1 . 5 免疫组化及原位杂交试剂盒为武汉博士德 生物工程有限公
15、司产品。 探针序列为: 5 - G A A G A GATGC GAGGAGGACATGGTGTGCATC TTC A- 3 , 5 - C T C C C T C TA C T T G C G T T C T T C AA AT G T A C T T C C T T - 3 。结果判定以胞浆和胞膜呈棕黄 色为阳性。 1 . 6 图像分析方法免疫组化及原位杂交各组切 片置于摄像显微镜下, 放大 1 0 0 倍, 选取观察部位, 在观察部位随机取3 -5 个视野, 于图像分析仪下测 定灰度值。 1 . 7 统计学分析所有资料经 S P S S统计软件进 行统计学处理, 数据用牙 士 : 表示,
16、 采用t 检验。 T a b . 1 I m a g e a n a l y s i s o f I G F - I i n p e n u m b r a l r e g i o n u s i n g i m mu n o h i s t o c h e m i s t r y a n d i n s i t u h y b r i d i z a t i o n me t h o d ( n = 5 , x士S ) Gr o u p I GF - I p r o t e in I GF - I mRNA S h a m I s c h e m i a / R e p e r f u s
17、i o n ( t / h ) 3 / 0 3 / 3 3 / 6 3 / 2 4 3 / 4 8 3 / 7 2 1 2 7 . 1 8 土 6 . 2 11 2 7 . 1 1 士6 . 0 5 1 4 6 . 6 5 士 5 . 4 6 1 5 2 . 4 4 士4 . 5 7 1 5 3 . 4 3 士5 . 8 4 1 6 9 . 6 4 士 6 . 9 7 . 1 6 8 . 8 6 士 5 . 3 9 二 1 4 9 . 6 1 士6 . 5 4 1 4 3 . 0 2 士5 . 3 0 1 5 1 . 3 8 士4 . 9 6 1 5 5 . 4 3 土4 . 3 7 1 6
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- 局灶性脑 缺血 灌注 损伤 IGF 表达 动态 变化
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