大鼠肺纤维化发生过程中IL-1β及其Ⅰ型受体的动态表达.pdf
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1、2 0 1 0 年6 月第1 7 卷第1 7 期论著 大鼠肺纤维化发生过程中I L - 1B 及其I 型受体的 动态表达 王其林1 ,袁耀2 ( 1 山西省阳煤集团总医院I C U 科,山西阳泉0 4 5 0 0 0 ;2 山西医科大学第一医院老年病科,山西奠源0 3 0 0 0 1 ) 【摘要】目的:研究大鼠肺纤维化发生中白细胞介素一1 1 3 ( I L 一1 B ) 及其I 型受体的动态表达。方法:气管内注入博莱霉 素制备大鼠肺纤维化模型,观察肺组织病理变化,测定肺组织中羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测其中I L 一1 B 及其I 型受体的含量。结果:病理切片显示模型组大鼠肺泡间隔明显增宽较
2、多纤维母细胞增生及炎性细胞浸润,后期肺组 织实变;羟脯氨酸的含量随造模时间的推移逐渐升高,于2 8d 时达峰值;模型组大鼠在第7 天时肺组织中I L l B 及 其I 型受体的表达积分达到峰值,1 4d 时显著下降,但仍高于正常组( P O 0 1 1 ,2 8d 时基本回到正常水平。结论:I L _ 1 B 及其I 型受体在肺纤维化的早期显著升高,提示其可能在肺纤维化发生的早期起重要作用。 关键词】肺纤维化;白细胞介素- 1 1 3 ;I 型受体 【中图分类号】R 一3 3 2【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 4 4 7 2 1 ( 2 0 1 0 ) 0 6 ( b ) 一0 0 9
3、 0 3 D y n a m i ce x p r e s s i o no fI L - 11 3a n di t st y p eIr e c e p t o ri nt h er a t so fp u l m o n a r y f i b r o s i s W A N GQ i l i n l , Y U A Ny 2 ( 1 D e p a r t m e n to fI C U ,Y a n g q u a nC o a lG e n e r a lF l o s p i t a li nS h a n x iP 蜀v i n c e ,Y a n g q u a n0 4 5
4、 0 0 0 ,C h i n a 簋D e p a r t m e n to f G e r a t o l o g y ,t h eF i r s tH o s p i t a lo fS h a n x iM e d i c a lU n i v e r s i t y ,S h a n x iP r o v i n c e ,T a i y u a n0 3 0 0 0 1 ,C h i n a ) 【A b s t r a c t O b j e c t i v e :T os t u d yt h ec h a n g e so fI n t e r l e u k i n - 1
5、b e t a ( I L - 11 3 ) a n di t st y p eIr e c e p t o ri np u l m o n a r yf i b r o s i s i nr a t s M e t h o d s :T h ep u l m o n a r yf i b r o s i sm o d e lW a Se s t a b l i s h e db yi n t r a t r a c h e a li n j e c t i o no fb l e o m y e i nw i t hr a t s ;i n v e s f i - g a t et h el
6、 u n gt i s s u ep a t h o l o g i c a lc h a n g e si nt h er a t so fp u l m o n a r yf i b r o s i s ,a n da s s a yt h ec o n t e n to fh y d r o x y p r o l i n ei nl u n g t i s s u e ,t e s tt h ec o n t e n t so fI L - 1 1 3a n di t sr e c e p t o ra n di nt h el u n gt i s s u eu s i n gt h
7、 em e t h o do fi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y R e - s u i t s :P a t h o l o g i c a le v i d e n c eo ft h eM - g r o u pr a t sd e m o n s t r a t e dt h a tt h ea l v e o l a rc o m p a r t m e n te o m p a n i e dw i t lm a s s i v ei n - f l a r n m a t o r yc e l li n v a s i o na n
8、dan u m b e ro fm y o f i b r o b l a s tp r o l i f e r a t i o nb e c a m em o r et h i c k T h ec o n t e n to fh y d r o x y p r o l i n eW a s i n c r e a s i n ga st i m eg o e s ,a n da c h i e v e dp e a ko nt h e2 8 t hd a y I L l Ba n dI L 一1 R Ii nl u n gt i s s u e si nm o d e l - g r o
9、u ps h e wa h i g h e s te x p r e s s i o ns c o r i n go nt h e7 r d ,a n dr e d u c e do nt h e1 4 t hd a y ,a n de q u a lt ot h en o r m a l - g r o u pa l m o s to nt h e2 8 t h d a y C o n c l u s i o n :I L - 1 1 3a n dt h et y p eIr e c e p t o rf o rI L - 1 1 3i np u l m o n a r yf i b r o
10、 s i sr a i s et ot h ep e a ke a r l ya n db r i e f l y ,a n d p l a y 蛐i m p o r t a n tr o l ei nt h ee a r l i e rp e r i o do fp u l m o n a r yf i b r o s i s 【K e yw o r d s 】P u l m o n a r yf i b r o s i s ;I n t e r l e u k i n - 1b e t a ( I L - 1 1 3 ) ;T h et y p eIr e c e p t o rf o r
11、I L - 1 1 3 肺纤维化是对人类健康危害极大的一类疾病。是间质性 肺疾病的最终病理结果【l I 。其发病机制尚不明确临床治疗效 果不佳,病死率极高田。故对其发病机制的研究具有理论和实 际意义。白细胞介素一1 1 3 ( I L - 1 1 3 ) 作为机体前炎性细胞因子之 一,作用于多个环节,介导炎症及损伤后的修复和过度修复。 参与了机体多种疾病的发生和发展 3 1 。本实验建立大鼠肺纤 维化模型,并通过免疫组织化学方法研究肺纤维化形成过 程中I L 一1 B 及其I 型受体在肺组织中的表达情况,进一步探 讨肺纤维化的发生机制。 1 材料与方法 1 1 材料 1 1 1 实验动物清洁级
12、健康雄性W i s t a r 大鼠9 0 只,体重 ( 2 0 0 2 0 ) g ,购自山西医科大学生理教研室所属动物房,清洁 环境下饲养。 1 1 2 主要药品与试剂博莱霉素A 2 ( 1 3 本化药株式会社) , 【作者简介】王其林,4 4 岁,男,汉族;副主任医师;学历:本科;毕业于江苏 徐州医学院。 甲基泼尼松龙( 辉瑞制药有限公司) ,羟脯氨酸试剂盒( 南京 建成生物工程研究所) ,兔抗人I L - 1 8 多克隆抗体( 武汉博士 德公司) ,兔抗人I L 一1 RI 多克隆抗体( 武汉博士德公司) 即 用型辣根酶标记抗兔I s G 多聚体( 武汉博士德公司) ,D A B 显
13、色剂( 武汉博士德公司) 。 1 2 方法 1 2 1 动物模型的制作将9 0 只W i s t a r 大鼠随机分为正常组 3 0 只,模型组3 0 只和甲基泼尼松龙组3 0 只。腹腔注射5 水合氯醛( 1m l 1 0 0g 体重) 麻醉,取仰卧位固定,常规消毒。行 颈部正中切口,钝性分离暴露气管,于气管软骨环间隙穿刺。 模型组和甲基泼尼松龙组注入博莱霉素A 20 9 N a C l 溶液 O 3I I l l ( 5m s k g 体重) ;正常组注入0 9 N a C l 溶液0 3r I l l ,立 即将动物直立并上下旋转,缝合皮肤待动物自然清醒后置笼 内常规饲养。次日起,甲基泼尼
14、松龙组每日经腹腔内注入甲基 泼尼松龙0 9 N a C I 溶液0 - 3I I l l ( 1 5m g k g 体重) 治疗,正常组 和模型组注入0 9 N a C I 溶液0 3m l 。分别于造模后第1 、3 、7 、 1 4 、2 8 天腹主动脉放血随机处死每组大鼠各6 只进行检测。 C H I N AM O D E R NM E D I C l N E 中国当代医药9 万方数据 论著2 0 1 0 年6 月第1 7 卷第1 7 期 1 2 2 标本制备收集右肺,分为2 份,一份一4 0 保存待测; 另一份用4 中性甲醛溶液固定4 8h ,逐级酒精脱水二甲 苯透明、浸蜡,石蜡包埋,常
15、规切片4I x m ,将切片分为两份。 一份行H E 染色。镜下观察肺组织病理变化;另一份用于测 定I L - 1 B 及其I 型受体的含量。 1 2 3 羟脯氨酸浓度的测定将所留取的肺组织按照羟脯氨 酸试剂盒说明书采用碱水解法进行测定。 1 2 4IL - 1 B 及其I 型受体含量的测定将所取肺组织切片 标本按照免疫组化试剂盒说明书进行操作。 1 3 统计学处理 所有数据用菇5 表示采用S P S S1 5 0 统计软件包进行分 析。多组间比较采用单因素方差分析( A V N O N ) 方法。P 0 0 5 为差异有统计学意义。 2 结果 2 1 大体标本观察 整个实验期间正常组大鼠双肺
16、呈淡粉色。表面光滑,弹 性良好。模型组第3 天未见有明显改变,第7 天双肺可见散 在的点状、灶状出血。并可见斑片状实变灶第1 4 天双肺色 泽暗淡局部见大小不等的结节样改变,且有陈旧出血点。 第2 8 天双肺呈灰白色,硬度增加,体积缩小,表面有条索样 凹沟。用药组双肺呈粉红色,第7 天偶见点状出血,第1 4 、2 8 天双肺外观无异常改变。 2 2 镜下组织病理观察 见图1 、2 。正常组各观察点均未出现明显病变。模型组 第3 天时出现炎性细胞浸润等急性肺泡炎改变;第7 天时肺 泡间隔增厚,大量炎性细胞浸润,成纤维细胞开始增多;第 1 4 天时肺泡炎仍较重纤维组织进一步增加:第2 8 天时炎
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- 大鼠 纤维化 发生 过程 IL 及其 受体 动态 表达
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