小鼠接种HBV疫苗引起的特异性细胞免疫反应.pdf
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1、 2 4 4 文章编号 1 0 0 1 一 4 7 1 8 ( 2 0 0 6 ) 0 2 一 0 2 4 4 一 。 小、鼠接种 H B v疫苗引起的特异性细胞免疫反应关 施理, , 梁晓岳2 , 易学瑞 , 刘树人, , 孔祥平, , 张宜俊, ( 4 5 8 医院全军肝病中心, 广东 广州 5 1 0 6 0 2 ; z 宁波市传染病院, 浙江 宁波 3 1 5 0 1 0 ) 摘要 目的: 研究小鼠 免疫接种基因重组乙型肝炎表面抗原疫苗( r H B s ) 产生的特异性细胞免疫反应。 方 法: 4 0 只B A L B / c 小鼠 随机分为0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2
2、 . 5 , 5 t g 4 组, 腹腔分别接种0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 , 5 P g 的r H B s 1 次或2 次。 初 次免疫后4 周或加强免 疫后2 周分离小鼠 脾T 淋巴 细胞; 分别进行以 下实验: 实 验组用r H B s ( 1 0 m g / L ) 刺激脾T 淋巴 细胞, 对照组用P B S 代替r H B s 刺激脾T 淋巴细胞; 3 d 后用 3 H 掺人法检测脾T 淋巴细胞特异性增殖反应, 以 3 H 掺 人的同位素c o u n ts “ m i n 一 值及刺激指数( S i , 实验组c o u n ts “ r n i n - 值
3、/ 对照组c o u n ts “ m in - 值) 表示。同时用E L I S A 方法 检 测培 养液中白 细 胞介素一 2 ( I L - 2 ) 及Y - 干 扰素( I F N - Y ) 的 浓度。 结 果: 只 接受 单 次免 疫的0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 , 5 ti g 组 小鼠 脾T 淋巴细胞特异性增殖反应S i 分别为1 . 5 5 , 1 . 9 3 , 2 . 4 1 , 2 . 8 1 1 ; 小鼠 脾T 淋巴细胞释放的I L 一 2 分别为( 5 . 4 8 士 8 . 8 8 ) , ( 9 . 2 8 1 6 . 9 8 ) , (
4、 2 8 . 5 3 土 1 4 . 3 2 ) , ( 6 4 . 6 9 土 2 0 . 8 8 ) n g / L , 释放的i n一 7 分别为( 8 . 2 2 士 8 . 6 1 ) , ( 9 . 8 9 1 9 . 3 4 ) , ( 2 0 . 2 7 1 1 5 . 5 0 ) , ( 3 0 . 7 7 士 2 2 . 1 2 ) 呵L 。 接受 加 强免 疫的0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 , 5 腮组 小鼠 脾T 淋巴 细 胞特 异 性增 殖 反 应S i 分 别为 1 . 6 1 , 2 . 0 5 , 3 . 7 4 , 3 . 6 2 ; 小
5、鼠脾 T 淋巴细胞释放的I L 一 2 分别为( 5 . 7 5 士 5 . 0 4 ) , ( 1 0 2 . 5 3 士 6 7 . 5 2 ) , ( 1 7 7 . 1 3 士 9 1 . 1 2 ) , ( 3 3 2 . 1 0 士 1 2 4 . 3 1 ) n g / L , 释放的y 一 干扰素分别为( 3 . 6 3 1 4 . 4 2 ) J 2 8 . 3 3 土 1 3 . 0 4 ) , ( 5 9 -. 6 6 士 2 5 . 7 5 ) , ( 8 0 . 7 3 士 1 9 . 3 0 ) n g / L 。 结论: 小鼠接种 r H B s 后, 脾 T 淋
6、巴细胞产生特异性增殖反应, 并特异性分泌 I L - 2 , y 一 干扰素, 反应强度与是否 加强免疫及接种的剂量密切相关。 关键词 疫苗 【 中图分类号 , 乙型肝炎表面抗原; 疫苗, 合成; 脾; T 淋巴细胞; 白细胞介素2 ; 干扰素II 型 文献标识码I A T h e s p e c 访cTr e s p o n s e m r mc e wi t h HB V v a c c i n e S H I L i t , L I A N G X i a o 一 y u e 2 , Y I X u e 一 r u i l , L I U S h u 一 re n t , K O N G
7、 X ia n g 一 p i n g s , Z H A N G Y i 一 j u n t ( T h e C e n t e r f o r I nf e c t io u s D is e a s e , 4 5 8 H o sp it a l , G u a n g z h o u 5 1 0 6 0 2 , C h in a ; 2 T h e N in g b o H o s p it a l f o r I n f e c t io u s D is e a s e , N i n g b o 3 1 5 0 1 0 , C h i n a ) A B S T R A C T
8、A I M: T o e v a l u a t e th e s p e c if i c c e ll u l a r i m m u n e re s p o n s e in m i c e in o c u l a te d w it h t h e re c o m b in a n t h e p a t it i s B v ir u s ( H B V ) s u r f a c e v a c c in e ( r H B s ) . ME T H O D S : S p l e e n T l y m p h o c y te re a c t i v i ty to r
9、 H B s w a s a s s e s s e d 场a p r o l if e r a t io n a s s a y a n d c y to k i n e s e c re t i o n . B A L B / c m o u s e w e re i n t r a p e ri t o n e a ll y i n o c u l a t e d w it h r H B s a t d o s e s o f 0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 o r 5 p g f o r o n c e o r t w i c e . 4 w e e k s l
10、a t e r , s p l e e n l y m p h o c y t e s w e re h a r v e s t e d a n d r e s t i m u l a t e d w i t h r H B s i n e x p e ri m e n t a l g r o u p o r w i t h P B S a s c o n t r o l . T h e s p l e e n l y m p h o c y t e s w e re l a b e l e d w it h 3 H - t h y m id in e f o r 3 d a y s . T
11、h e 3 H - th y m id i n e i n c o r p o r a t i o n w a s m e a s u r e d , w h ic h e x p re s s e d a s t h e i n c o r p o r a t io n o f 3 H ( c o u n ts - m i n 一 ) a n d s t im u la ti o n in d e x ( S I ) w a s c al c u la t e d b y t h e m e t h o d o f d iv id i n g th e c p m o b ta i n e
12、d i n t h e e x p e ri m e n t a l g ro u p b y t h a t i n c o n tr o l g ro u p . T h e c o n t e n t o f I L 一 2 a n d I F N一 y s e c r e t e d f r o m t h e s p l e e n l y m - p h o c y t e w e re m e as u r e d 场t h e m e t h o d o f E L I S A . R E S U L T S : 2 w e e k s a ft e r p ri m a ry
13、 v a c c i n a t i o n , t h e S I i n 0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 a n d 5 g r o u p s w as 1 . 5 5 , 1 . 9 3 , 2 . 4 1 , 2 . 8 1 n g / L , r e s p e c t i v e l y . I L 一 2 w as 5 . 4 8 士 8 . 8 8 , 9 . 2 8 士 6 . 9 8 , 2 8 . 5 3 士1 4 . 3 2 , 6 4 . 6 9 土 2 0 . 8 8 n g / L , re s p e c t i v e l y . I F
14、 N 一 y w as 8 . 2 2 1 8 . 6 1 , 9 . 8 9 1 9 . 3 4 , 2 ,0 . 2 7 1 1 5 . 5 0 , 3 0 . 7 7 t 2 2 . 1 2 n g / L , r e s p e c t i v e l y . 2 w e e k s a f t e r b o o s t v a c c i n a t i o n , t h e S I i n 0 . 6 5 , 1 . 2 5 , 2 . 5 a n d 5 g r o u p s w as 1 . 6 1 , 2 . 0 5 , 3 . 7 4 , 3 . 6 2 n g /
15、L , re s p e c t i v e l y . T h e I L 一 2 w as 5 . 7 5 士 5 . 0 4 , 1 0 2 . 5 3 土 6 7 . 5 2 , 1 7 7 . 1 3 士 9 1 . 1 2 , 3 3 2 . 1 0 士1 2 4 . 3 1 n 州L , r e s p e c t iv e l y . H T一y w a s 3 . 6 3 士 4 . 4 2 , 2 8 . 3 3 土1 3 . 0 4 , 5 9 . 6 6 1 2 5 . 7 5 , f r o m t h e s p l e e n tio n. 8 0 . 7 3 1
16、 1 9 . 3 0 n g / L , re s p e c t i v e l y . C O N C L U S I O N: S p e c i f i c p ro l i f e r a t i o n a c t i v i ty a n d I L 一 2 , I F N一 y s e c re ti o n l y m p h o c y t e s o f t h e m o u s e i n o c u l a t e d w i t h r H B s a r e p r o d u c e d , t h a t t h e s t r e n g t h i s
17、d e p e n d e n t o n t h e d o s e o f v a c c i n a - K E Y WO R D S V a c c i n e s , h e p a t it is B s u r f a c e a n t ig e n s ; V a c c i n e s , s y n t h e t ic ; S p l e e n ; T 一 l y m p h o c y t e s ; I n te r l e u k i n 一 2 ; I n t e r f e r o n t y p en 收稿日 期1 2 0 0 4 - 0 6 - 1 0
18、修回日 期1 2 0 0 4 - 1 2 - 0 7 , 基金项目 广州市重点科技项目( N o . 9 9 M O 4 8 1 1 G ) T e l : 0 2 ( ) 一8 7 3 7 1 2 1 4 2 4 5 乙型肝炎病毒( h e p a t i t is B v i r u s , H B V ) 感染是一 种严重危害人体健康的常见疾病, 全世界有 3 . 5 亿 H B V 感染者。接种基因重组H B V 表面抗原疫苗( r e - c o m b i n a n t H B V s u r f a c e v a c c i n e , r H B s ) 能产生保护性抗 体
19、, 已广泛用于预防H B V感染。抗 H B V特异性细胞 免疫反应决定H B V感染的预后, 细胞免疫反应不足, 即 使抗 H B V特异性体液免疫反应较强, 也常导致 H B V 持续感染, 清除体内已有的H B V 、 治疗 H B V感 染需要较强的抗 H B V特异性细胞免疫反应。 接种r H B s 能否产生H B V 特异性细胞免疫反应, 能否用于治疗H B V感染还不十分清楚。我们给小鼠 接种r H B s , 研究其脾T 淋巴细胞能否产生特异性淋 巴细胞增殖反应, 能否释放特异性细胞因子, 对接种 r H B s 产生的特异性细胞免疫反应进行定量及功能分 析。 材料和方法 1
20、 材料 r H B s , 含H B V 表面 抗原p r e S 2 / S 蛋白, 酵母基因 重组产品, M e r c k 公司生产。 3 H 一甲基胸腺嚓陡, 购自中国同位素总公司。B a lb / c 小鼠, 6 一1 0 周龄, S P F 级, 购自 第一军医大学动物实验中心。 2 B a l b / c 小鼠免疫接种 小鼠按以下分组, 腹腔内分别接种不同剂量的 r H B s , 一半小鼠2 周后加强免疫接种 1 次, 另一半只 接种1 次: 0 . 6 5 t cg 组( 1 0 只) , 接种。 . 6 5 p g 的r H B s o 1 . 2 5 p g 组( 1 0
21、 只) , 接种1 . 2 5 K g 的r H B s o 2 . 5 .cg 组 ( 1 0 只) , 接种2 . 5 p g 的r H B s o 5 p g 组( 1 0 只) , 接种5 1 1 9 的r H B s o 3 小鼠脾 T淋巴细胞分离培养 接种后 2 周, 氯仿麻醉小鼠, 颈椎脱臼处死小 鼠, 分离脾细胞, 8 . 3 % N H 4 C 1/ 0 . 1 7 m o l / L T r i s ( p H 7 . 4 ) 3 7 作用1 0 m i n 去除红细胞, 过玻璃毛柱, 收 集T 淋巴 细 胞; 用1 0 0 匹含1 0 %胎牛血清、 5 x 1 0 - 5
22、 M O I A “ 二硫苏糖醇的 D M E M完全培养液, 以 5x 1 0 5 c e l l s / w e l l 浓度接种在%孔细胞培养板上, 每例作 3 个重复孔。 4 实验组小鼠脾T淋巴细胞 用1 0 m g / L r H B s 体外刺激3 d o 55 对照组小鼠脾 T淋巴细胞 用 P B S 体外刺激3 d 。体外刺激2d 后, 用 U- C y T e c h 公司的E L I S A 检测试剂盒测定培养上清的I L 一 2 及I F N一 7 浓度; 体外刺激3 d 后, 每孔加人 3 H I 一 甲 基胸 腺嚓陡3 . 7 x 1 护B q , 1 8 h 后将
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- 小鼠 接种 HBV 疫苗 引起 特异性 细胞 免疫 反应
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