弓形虫核酸DNA免疫系列研究.pdf
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1、刚地弓形虫是一种机会性致病原虫! 寄生于 宿主的细胞内!在机体免疫力下降时!弓形虫大量 增殖! 可导致组织器官的损伤! 引起弓形虫病 !“#$#%!有增强弓形虫入侵 宿主细胞的作用!具有很强的免疫原性“ 本研究根 据弓形虫7?株基因序列设计两对引物! 采用聚 合酶链反应技术$97%扩增0A2%!789D 基因 片段为EFG %“ 通过比较弓形虫7? 株# H0XX_ “ “Qnb*X“ Q“X_ *dX_ _m0-2X 0-2n 0-28? !且表达产物具有免疫活性“ 而789基因 片段则被插入原核质粒?ABB=多克隆位点!并转 入大肠杆菌进行高效表达!%!% C$9=! 表达产量占菌体总蛋白
2、的9DBEFCG#H“ 分 别 构 建?I!J(K%()9#?)LR#STO !能 够被免疫鼠血清所识别FCKK%()9肌肉注射免疫小鼠!周后! 采用 原位分子杂交在免疫接种的小鼠骨骼肌中检测到 紫蓝色的阳性杂交信号! 提示%()9基因在局部 肌肉组织中有X7J(转录的发生$ 免疫组化的结 果显示%()9在免疫小鼠的骨骼肌中表达! 并分 泌到肌肉间隙“?I!J(K789肌肉接种小鼠后! 免疫组化检测发现789重组抗原同样能在局部 肌肉中表达$ 在免疫后9V周! 提取外周血基因组 !J(!采用Q7法及核酸探针杂交的方法检测!未 发现接种质粒!J(整合到小鼠基因组中去FK9#H“ %()9!789
3、及%()9Y789真 核 表达质粒!J(免疫小鼠后的免疫效 应 以#= !4重组质粒肌肉免疫(ZYI小鼠!每 隔周接种9次!共次“用NN法对脾脏J细 胞杀伤率和淋巴转化率进行测定! 以免疫荧光法 测定Q!C和Q!S亚群!结果表明%J杀伤细胞的 活性显著提高 ?;比 值 增 高!有效地加强了免疫效果%! : ;G?HI %3!J3!NKI%3$N%3%AOAKI A%N3$#;AC %JO%;KI %?J%3!,-J 陈海峰C郑焕钦C陈观今C等 ()*%和+,-%混合基 因真核表达质粒接种小鼠诱导产生拮抗致死性弓形 虫感染的保护性免疫$E热带医学杂志C #;AC AO%KI %?3!& O编辑张敏瑞K .!/ .01 .$1 .%1 .,1 .-1 .21 .1 .31 .!“1 .!1 .!01 .!$1 .!%1 .!,1 .!-1 .!21 .!1 陈观今!等&弓形虫核酸%82)&免疫系列研究 第!期 A
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