抗人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂单克隆抗体的制备与鉴定.pdf
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1、论著文章编号: !“# $%#3? ABC/ 3DC/ =? !1.EE3AF.?D8?9 7CB.E,56784:A.73?93 .B6784/ =.6 !“#$%“% 7?D H?I47667B8.?, K7?B.C L?8M3EA8B; N3D8=74 1.44393,K7?B.C )!)“) ?:=29= . -).% ?%$% )-5)%( ?)*4 489:;,E) 约为 ! “。免疫组化染色表明,6JR 与肺和结肠组织的上皮细 胞、疑似肥大细胞、扁桃体和包皮组织的疑似肥大细胞的反 应性均呈阳性。流式细胞术分析显示,* 株 6JR 与人肺腺癌 细胞系 J)*, 细胞中的 KOQH
2、均呈阳性反应。激光共聚焦扫描 显微镜观察,荧光标记的阳性反应物主要位于 J)*, 细胞的 胞质内。结论:成功地制备抗 KOQH 6JR,为变态反应性疾病 和炎症性疾病的研究工作提供了有用的试剂。 关键词 人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂;单克隆抗体;特 性鉴定 中图分类号 GE为 ! #“,包括 !“# 个氨基酸。KOQH 由两个同源区组成,1 端区为广谱抑制肥大细胞和 白细胞丝氨酸蛋白酶活性的部位,- 端区能通过介 导与肝素的相互作用而促进抑制剂与丝氨酸蛋白酶 的结合 !。KOQH 来源于上皮细胞、肥大细胞、中性 粒细胞、单核细胞和巨噬细胞,广泛分布在皮肤、呼 吸道、胃肠道、唾液腺和生殖腺。KOQ
3、H 能抑制中性 粒细胞的弹性蛋白酶、组织蛋白酶 U、肥大细胞的类 糜蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶 ,在变态反应性疾 病和炎症中起重要作用。因此,检测 KOQH 的水平有 利于深入了解在变态反应性疾病和黏膜炎症发病机 制中,蛋白酶和蛋白酶抑制剂平衡的问题。目前,国 外已有商品化的抗 KOQH 单克隆抗体 (6JR) ,但价格 昂贵,国内尚无这方面的研究报道。我们采用杂交 瘤技术制备抗 KOQH 6JR,期望能为国内变态反应性 疾病和炎症的研究提供一种廉价、有效的制剂。 *)HKK-!“# $%# ?7; 7 569A。#B3C 细胞 系引自 #D96? EF89 569 ?7;。免疫原 G/$,H
4、、福氏 完全佐剂和不完全佐剂、过氧化物酶标记的羊抗小鼠免疫球 蛋白及 H2 类与亚类鉴定试剂盒,均购自 /?2D: 公司。IJ4J、 K#E 购自 L?M9 公司。,4L JN3OOO 购自 J96 “?79 M=7 检测:将 #B3C 细胞裂解物进行 /I/0,#L4 并转移至 ,PIQ 膜上。加 BO 2% $ 脱脂奶粉封闭后,把 ,PIQ 膜剪成小条,依次滴加各株杂交 瘤细胞的培养上清 (-WX 孵育 T G,充分洗膜) 及过氧化物酶 标记的羊抗小鼠 H2 (-WX孵育 1 G 及洗膜) ,用 I#“ 显色后观 察结果。 (T) 免疫组化染色:将人肺、结肠、扁桃体及包皮组 织依次进行固定
5、、脱水、石蜡包埋及切片 (片厚 3 !D) 。染色 当天将切片脱蜡, 并经过1 OOO (WOO D$% $ 乙醇、 蒸馏水水化 后,滴加 B D$% $ KTYT及 1 2% $ 叠氮钠阻断内源性过氧化物 酶,室温 1O D?;,,“/ 洗 B D?; Z-。滴加 BO 2% $ 的牛血清白 蛋白封闭非特异性蛋白质结合位点,室温1O D?;,,“/ 洗,再 依次滴加各株杂交瘤上清 (室温 T G) 及过氧化物酶标记羊抗 小鼠 H2 (室温 3O D?;) 。用 I#“ 显色后,再以苏木素复染 - D?;,用 #5:D75; 封片,观察结果。 (-) 流式细胞术分析: 用胰酶消化 #B3C 细
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- 分泌 白细胞 蛋白酶 抑制剂 单克隆抗体 制备 鉴定
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