抗霍乱弧菌O1群单克隆抗体的制备及初步鉴定.pdf
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1、5 1 6 中国生物制品学杂志2 0 0 8 年6 月第2 1 卷第6 期C h i nJB i o l 晒c a I sJ u n e2 0 0 8 ,v 0 1 2 1N o 6 中国图书分类号R 3 9 2 - 3 3文献标识码A 文章编号l O 舛- 5 5 帕( 2 0 憾) 晰- 惦l 枷3 抗霍乱弧菌0 1 群单克隆抗体的制备及初步鉴定 杨璇1李学民2 杜英1 杨书豪3 付庆1朱沙1 【诊断制品】 【摘要】 目的制备抗霍乱弧菌o l 群特异性单克隆抗体( M c A b ) ,并进行鉴定。方法以福尔马林灭活的o l 群霍乱弧菌 免疫B A L B c 小鼠,应用细胞融合技术建立分
2、泌抗0 1 群霍乱弧菌M c A b 的杂交瘤细胞株。对配对较好的6 个细胞株分泌的 M c A b 进行腹水效价、免疫球蛋向类及亚类、抗体亲和常数测定及凝集试验和稳定性试验。与细菌培养法对比检测2 0 8 份临床标 本。结果6 个细胞株分泌的M c A b 腹水效价均为l0 5 ,均为I g M ;抗体亲和常数为1 8 4 1 0 5 5 3 8 1 0 7 ;且均与0 1 群霍乱弧 菌菌株发生凝集反应,与霍乱弧菌0 1 3 9 群、大肠杆菌、出血性大肠杆菌0 1 5 7 :H 7 、副溶血弧菌、麦弧菌、河弧菌、结肠炎耶尔森 菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及各型副伤寒杆菌均不发生凝集反
3、应。6 个分泌M c A b 的细胞株连续培养1 5 周,经液氮 冻存1 2 个月后复苏,仍能稳定分泌抗体;与细菌培养法对比检测2 0 8 份临床标本,特异性和灵敏度均达1 0 0 。结论制备的 M c A b 具有较高的特异性,有可能用于开发霍乱弧菌0 1 群的检测试剂。 【关键词】霍乱弧菌0 1 群;单克隆抗体;诊断试剂 P r e p a r a t i o na n dP r i m a r yI d e n t i f i c a t i o no fM o n o c l o n a lA n t i b o d ya g a i n s ty 汤,初 c 庇D 昆m PG r o
4、 u p0 1 Y A N Gx u a n ,L Ix u e m i n ,D uY i n g ,邑ta l ( D 印a 们,扎e ,l z 矿朋诒r 0 6 i o z o g y 珊以如t m “,暑D z o 跏c b Z 如g 弩旷B 璐论 肌d 如i 聊,Z 阮,够 D uU h 幻e 糟i 机历e 够 D M4 5 0 0 0 1 ,仍i 眦) 【A b s t r a c t 】 o b j e c t i v e T op r e p a r ea n di d e n t i f yt h em o n o c l o n a la n t i b o d y ( M
5、 c A b ) a g a i n s ty 曲南c b 如n 雠g r o u p0 1 M e n 砌d b s T h eh y b r i d o m ac e Us t r a i n ss e c r e t i n gM c A b sw e r ee s t a b l i s h e db yf u s i n gS P 2 Oc e l l sw i t ht h es p l e e nc e U so fB A L B cm i c ei m m u n i z e d w i t hy e 幻拓瑚g r o u p0 1i n a c t 妇e db yf o r
6、I l l a l i n s 主xe e ns t r a i 璐w e r es c r e e n e db yc o l l o i d a lg o l dm a t c h i n gt e s t ,粕d 出es e c r e l e d M c A b sw e r et e s t e df o rt i t e ri na s c i t e s ,c l a s sa n ds u b c l a s so fI g Ga n da n t i b o d y 插n i t yc o n s t a n t ,t h e ns u b j e c t e dt oa g
7、 出u t i n a t i o na n ds t a b i l i t yt e s 协 At o t a lo f2 0 8c l i n i c a l8 p e c i m e n sw e r ed e t e I l i n e dw i t ht h ep r e p a r e dM c A b s ,a n dt h er e s u l t sw e r ec o m p a r e dw i t l lt h o s eb y b a c t e r i a lc u I t u r e R e s u I t sA 1 1t h eM c A b ss e c r
8、 e t e db y6h y b r i d o m ac e l ls t r a i n sw e r eI g M ,e a c ha tat i t e ro f1 矿i na s c i t e s ,a n dt h e i r a n t i b o d y 拍n i t yc o n s t a n t sm n g e d f 如m1 8 4 l0 5t o5 3 8 1 0 7 A Ut h eM c A b ss h o w e da g d u t i n a t i o nr e a c t i o nw i t hy c b z e r n eg m u p 0
9、1 ,b u tn or e a c t i o n 衍t hy c 舶如r 凹g r o u p0 1 3 9 ,E c o 玩e n t e r o h e m a h a 百cE c o 如0 1 5 7 :H 7 ,y p 咖危n e m o 缈记琊,y ,聊圮 一 ,l 掘D “ 玩y 眦,谢蠡,Fe , e r o c o 矗f 如峨P 勘“ g m 蟊,s 而俘e ,蹴砌已,正,p 舷o r s 己p 田呦耽A ,Bo rc A f t e rt h e6h y b r i d o m ac e s t r a i n sw e r ec u l t u r e dc o n t
10、 i n u o u s l yf o r1 5w e e k sa n ds t o r e di nf 如z e nf o r1 2m o n t h s ,M c A b sw e r es t i l ls e c r e t e ds t a b l y B o t l lt h es p e c i f i c i t ya n ds e n s i t i v i t yo ft h ep r e p a r e dM c A b si nd e t e 肋i n a t i o no f2 0 8c l i n i c a ls p e c i m e n sw e r e1
11、0 0 C o n c l u s i o n7 1 1 1 eM c A b ss e c r e t e db ye s t a b l i s h e d6h y b r i d o m ac e l ls 咖i n 8s h o r w e dg o o ds p e c i f i c i t y 明dm i g h tb eu s e df b rt h ed e v e l o p m e n to fd i a g n o s t i ck i tf o r I ,c 幻如础g r o u p0 l i m c t 缸 【K e yw o r d s 】y 站砌c 五。如磁g
12、r o u pO l ;M o n o c l o n a la n t i b o d y ;D i a g n o s t i ck i t 霍乱是由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病,该病 起病急,传播快,涉及面广,易引起暴发性流行,在我 国已被列为甲类传染病。霍乱弧菌的血清群超过 2 0 0 个,人类历史上已有7 次霍乱大流行,均由0 1 群霍乱弧菌引起,前6 次是由古典型所致,第7 次则 是由E lT o r 型引起。目前,对该病原体的鉴定主要 依靠细菌培养,耗时较长,不能满足快速诊断和迅速 控制传染源的要求。而采用霍乱弧菌的特异性单克 作者单位:1 郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研
13、室 ( 郑州4 5 0 0 0 1 ) ;2 郑州大学第一附属医院检验科 ( 郑州4 5 0 0 0 1 ) ;3 郑州兰森生物工程有限公司( 郑 州4 5 0 0 0 0 ) 通讯作者:杨书豪,E m i l :y s h y y h o t m a i l c 伽 隆抗体开发的胶体金试纸条,可快速、简便、准确地 检测霍乱弧菌 2 。 为了建立霍乱弧菌快速检测方法,本文利用细 胞融合技术,制备了抗0 1 群霍乱弧菌的单克隆抗 体,并对其进行了相关方面的鉴定。用本研究制备 的单克隆抗体研制的0 1 群霍乱弧菌快速诊断试纸 条,经与培养法对比和临床试用,特异性和灵敏度均 较好。 1 材料与方法
14、1 1 菌株及细胞 所有菌株均由中国医学细菌保藏管理中心和中 国疾病预防控制中心传染病预防控制所卫生部医学 中国生物制品学杂志2 0 0 8 年6 月第2 l 卷第6 期C l I i nJB i o l o g i c a l sJ 岫e2 0 0 8 ,V 0 1 2 lN 0 65 1 7 分子细菌学重点实验室提供,均为标准株;小鼠骨髓 瘤细胞S P 2 0 从中国预防医学科学院病毒学研究 所引进。 1 2 实验动物 B A L B c 小鼠,雌性,8 周龄,体重2 0g 左右,从 中国医学科学院实验动物研究所引进。 1 3 试剂 R P M I 1 6 4 0 培养基及鼠I g 类和亚
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- 霍乱弧菌 O1 单克隆抗体 制备 初步 鉴定
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