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1、提高免疫组织化学切片质量的体会论著 方庆全 陈宏 叶美华(福建医科大学附属厦门第一医院病理科 福建 厦门 ) 【摘要】 目的 总结提高免疫组织化学切片质量的经验体会。 方法 在免疫组织化学实验过程中,通过提高组织 固定质量、制备高质量的载玻片、选择最佳的蜡块、制备高质量的切片、合适的抗原修复、严谨进行染色操作、选择合适 的检测系统、设立有效的实验对照等措施提高免疫组织化学切片质量。 结果 阳性细胞呈棕黄色 棕裼色颗粒,阳性 颗粒定位于抗原所在的部位上,背景清晰。 结论 免疫组织化学染色技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确等优点, 严格实验操作,不断优化实验方法,提高其染色质量,在病理诊断与科研
2、工作中具有重要的作用。 【关键词】 免疫组织化学 切片 质量 体会 Experience in improving quality of sections with immunohistochemical staining FANG Qin quan, CHEN Hong, YE Mei huaThe Affilia- ted Xiamen First Hospital of Fujian Medical University, Xiamen Fujian ,China 【Abstract】 Objective Methods , , , , , , Results , Conclusion
3、, , , 【Key words】 ; ; ; 通讯 作 者: 方 庆 全, 福 建 省 厦 门 市 第 一 医 院 病 理 科, 电 话: 、 , : 在临床病理诊断和形态学研究中,免疫组织化学染 色是一种很重要的技术与手段,它的质量直接影响着诊 断结果的判断。 由于免疫组织化学切片制作过程存在 很多步骤和环节,制作一张高质量的免疫组织化学切片 并不是一件容易的事。 作者根据多年的实践经验,总结 一些体会。 现介绍如下。 材料与方法 材料 材料均来源于我科病理工作中的标本。 按 规范 配制试剂、制作切片及进行染色,并注意以下操 作环节。 方法 用 中性福尔马林及时并适当地固 定;对载玻片作适
4、宜的浸泡、冲洗、烘烤、涂胶;选择 最具有代表意义的组织蜡块;制作具有厚度适宜、平 整、无皱褶、无气泡、粘附牢固等优点的高质量组织切 片;选择最合适的修复方法、修复液及其 值;严 谨进行染色操作,尤其注意冲洗与抗体孵育环节;选 择敏感度大、无内源性生物素干扰、与一抗匹配的检测 系统;选择定位清晰、质量稳定的显色剂进行显色; 设立有效的阳性和阴性实验对照。 结果 阳性细胞呈棕黄色 棕裼色颗粒,阳性颗粒定位于 抗原所在的部位上,背景清晰。 讨论 免疫组织化学的临床应用 免疫组织化学在临床 病理诊断中的应用可以归纳为以下几个方面:()标记 淋巴造血组织及其肿瘤的细胞来源和细胞分化程度; ()协助肿瘤良
5、恶性的诊断;()鉴别低分化癌与肉瘤; ()鉴别转移癌的性质;()协助发现微小转移癌灶; ()鉴别小细胞恶性肿瘤;()癌组织耐药基因的检测; ()为癌症患者治疗方案的拟定提供依据;()确定肿 瘤组织的增殖活性;()评估癌症患者的预后;()检 测病原体 。 可见免疫组织化学具有重要的临床意义。 提高免疫组织化学切片质量的体会 组织固定 用于免疫组织化学染色的组织离体 后,必须按照规范 用 中性福尔马林及时固定。 小标本固定 ,大标本固定 。 若组织固定 不佳,部分组织坏死,将造成免疫组织化学的片状着色 现象。 有研究 发现,新鲜组织经过 固定后,组织 中抗原即发生不同程度的不可逆地丢失,因此也应避
6、免 过度固定造成组织的抗原损失。 防脱片制备 我科先将载玻片用盐酸浸泡 后流水冲洗,再用无水乙醇浸泡 以上,然后把 玻片捞出放烤箱烤干,进而涂多聚赖氨酸粘附剂。 玻片 应彻底清洗干净,按标准涂胶,否则易导致后续免疫组 织化学染色时脱片。 胶的浓度太高或涂胶不均,干燥后 会在玻片上留下白色小点,将造成免疫组织化学的片状 着色现象。 蜡块选择 观察苏木精和伊红()染色切片 后,选择蜡块是确保免疫组织化学染色质量的关键因素 之一,应选无出血坏死、具有代表肿瘤特异性区域的组 临床和实验医学杂志 年 月 第 卷 第 期 织蜡块。 切片与烤片 切片的厚度在 为宜,漂 片要平整、无皱褶、无气泡、黏附牢固,否
7、则易引起脱片。 如果组织边缘与玻片粘贴不牢,边缘组织在染色过程漂 浮于液体中,每次清洗不易将切片下的试剂洗尽,将造 成边缘着色现象。 过厚的切片不仅影响免疫组织化学 反应,而且影响镜下观察。 切片宜在 恒温箱里 烤片 左右,以防止脱片。 但不能高温烤片,因为在 干燥条件下加热切片会加速组织中抗原的氧化。 抗原修复 免疫组织化学染色中,抗原修复是 影响染色结果的最关键因素,有的组织必须经抗原修复 而未修复时,将造成假阴性。 修复方法 目前加热修复是绝大多数抗原最 有效的方法,其中又以高压最佳 ,但不能一概而论。 不同的抗体根据其说明书或者在日常工作中摸索的实 验条件选择合适的修复方法。 修复液的
8、选择 的 或 - 缓冲液适用于大多数抗体,但一些胞核抗原在低 值修复液作用下有最佳效果。 没有一种抗原修复液适 合所有的抗体,因此常需按试剂说明选择修复液。 作者 常对不同的抗体,自己探索最合适的修复液及其 值。 染色 冲洗 免疫组织化学染色时,常用的冲洗缓 冲液有磷酸盐缓冲溶液()和 缓冲液( - ,),缓冲液的 值及离子强度不合适, 都将造成假阴性。 我科用 值 缓冲液 进行冲洗。 冲洗过程中,需防止冲洗不充分引起背景着 色,也必须防止用力过猛引起脱片。 抗体孵育 抗体应避免反复冻融与反复从冰 箱中取出。 每次购入新液应做对比实验,并定期检测抗 体效价。 一抗的最佳稀释度是在充分地抗原暴露
9、条件 下,抗体阳性信号和最低背景染色时间最大的性价比, 浓缩型抗体一般按厂家提供的稀释度进行成倍稀释预 实验,然后选择最适抗体稀释度。 抗体失活,效价过低 或稀释度不合适,都将造成假阴性。 一抗一般以室温 ( )孵育 或者过夜。 抗体质量差、孵育时 间过长或温度过高,都将造成假阳性。 二抗、三抗应控 制在室温条件下孵育 (根据说明书而 定),无需加温,以免染色背景过深。 滴加试剂时要充分 覆盖组织,否则孵育时边缘的试剂容易变干,浓度较中 心高而致染色深,造成边缘着色。 孵育时玻片与湿盒须 放平稳,否则将造成免疫组织化学的片状着色现象。 检测系统 作者首选非生物素型酶聚合物检测 系统,其具有敏感
10、度较大、操作便捷、无内源性生物素干 扰等优点。 所选用的检测系统与一抗不匹配时,将造成 假阴性结果。 若内源性成分影响,将造成免疫组织化学 染色的假阳性结果。 显色 作者首选二氨基联苯胺(),因为 定位清晰且易于长期保存 。 每次显色必须挑选 质量好的 ,并新鲜配制,在显微镜下监控其显色。 显色剂配制不正确可造成假阴性。 变质或显色时 间太长,将造成假阳性。 实验对照 设立阳性、阴性对照对免疫组织化 学染色有极大的保障作用,有利于对染色结果的正确判 断 。 为了保证获得良好的阳性对照切片,作者在工作 中收集表达好的阳性蜡块,做有效阳性对照。 也选取确 切不表达的蜡块做阴性对照。 免疫组织化学的
11、自动化 我科采用 - 免疫组化自动染色仪,它使用 电脑自动化控制代替技术人员手工操作,它的精确定量 泵能严格地控制每次滴加试剂的量,空气压缩机能均匀 地吹去切片上多余的液体,电子计时器将染色时间精确 到秒,这些优点避免了人工操作出现的偶然误差,确保 染色结果的一致性与重现性 。 故建议有条件的单位 尽量使用自动的免疫组织化学染色仪。 总之,进行免疫组织化学染色必须有高度的责任 心,选用高质量的试剂,严格实验操作,经常做实验后的 总结工作,不断优化实验方法,可制作出优良的免疫组 织化学切片。 参考文献 中华医学会临床技术操作规范病理学分册北京:人民军医 出版社, : 黄晓赤, 罗克枢免疫组织化学技术的临床应用概况成都医 药, , (): 吴秉铨, 刘彦仿免疫组织化学病理诊断北京:北京科学技 术出版社, : 刘宙, 杨伟明, 刘华庆, 等 种抗原修复法对免疫组化结果的影 响贵州医药, , (): 王伯沅病理学技术北京:人民卫生出版社, , (收稿日期: ) Journal of Clinical and Experimental Medicine Vol , No May
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