氧化槐定碱镇痛作用及其对小鼠中枢PKCγ表达的影响.pdf
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1、中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 9N o v ;2 5 ( 1 1 ) :1 4 5 3 61 4 5 3 氧化槐定碱镇痛作用及其对小鼠中枢P K C l , 表达的影响 高进贤1 ,陶丽君1 ,余建强1 ,金少举1 ,杨光1 ,徐永辉2 ,蒋袁絮1 ( 宁夏医科大学1 药理学教研室、2 附属医院,宁夏银川7 5 0 0 0 4 ) 中国图书分类号:R 一3 3 2 ;R2 8 4 1 ;R3 2 2 8 1 ;R3 2 9 2 ;R4 4 1 1 ; R9 7 1 1 文献标识码:A
2、 文章编号:1 0 0 1 1 9 7 8 ( 2 0 0 9 ) 1 1 1 4 5 3 一0 4 摘要:目的研究氧化槐定碱( o x y s o p h o r i d i n e ,O S R ) 的镇痛 作用及对小鼠脊髓背角、大脑皮层和丘脑蛋白激酶C - y ( P r o - t e i nk i n a s eC 1 ,P K C l , ) 免疫阳性细胞的影响。方法用热板 法观察并分析i v 、i c v 途径给药后O S R 镇痛作用强度及作用 部位,免疫组织化学方法( S A B C 法) 检测O S R 对小鼠脊髓背 角、大脑皮层和丘脑P K C y 免疫阳性细胞的影响。结
3、果 i v O S R5 0 0 、2 5 0 、1 2 5m g k g “及i c yO S R1 0 0 、5 0 、2 5m g k g “ 均可延长小鼠热板反应舔足潜伏期( P 0 0 5 、P 0 0 1 ) ,痛 阈提高率分别为4 2 5 1 ( i v ) 和6 0 7 0 ( i c y ) 。i pO S R 10 0 0m g k g 一可使小鼠脊髓背角、大脑皮层和丘脑P K C 、 免疫阳性细胞明显减少( P 0 0 1 ) 。结论O S R 外周和中 枢给药均有镇痛作用,P K c l 参与了O S R 的镇痛作用。 关键词:氧化槐定碱;镇痛;P K c Y ;脊髓背
4、角;皮层;丘脑 氧化槐定碱( o x y s o p h o r i d i n e ,O S R ) 是从豆科槐 属植物苦豆子中提取的主要生物碱之一。本室前期 的研究表明氧化槐定碱具有镇静催眠、腹腔注射后 具有一定的镇痛作用等中枢药理作用,本实验在前 期研究的基础上进一步探讨O S R 镇痛作用强度、部 位及与中枢信号转导分子P K C 、的关系。 1 动物与材料 1 1 动物昆明种小鼠,S P F 级,体重1 8 2 2g ,宁 夏医科大学实验动物中心提供,合格证号:S C X K ( 宁) 2 0 0 5 - 0 0 1 。 1 2 药品和试剂O S R ( 宁夏紫金花药业公司,批 号:
5、0 7 1 2 1 7 ) ,盐酸吗啡注射液( M o r p h i n e ,M o r ,沈阳 第一制药厂,批号:0 5 1 1 0 6 ) ,兔抗P K c y 抗体( 美国 S A N T AC R U Z 公司,批号:C 0 6 0 8 ) ,即用型S A B C 试 收稿日期:2 0 0 9 0 6 0 9 ,修回日期:2 0 0 9 0 7 0 6 基金项目:国家自然科学基金资助项目( N o3 0 8 6 0 3 7 2 ) ;宁夏教育厅 重点科研资助项目( N o 宁教高 2 0 0 8 2 9 3 号) ;宁夏医科 大学科研资助项目( N ox z 2 0 0 7 0 1
6、 ) 作者简介:高进贤( 1 9 8 2 一) ,男,硕士生,研究方向:神经药理学,E m a i l :g a o j x 8 2 1 6 3 c o i n ; 蒋袁絮( 1 9 5 7 一) ,女,教授,硕士生导师,研究方向:神经 药理学,通讯作者,T e l :0 9 5 1 4 9 8 0 1 2 3 ,E m a i l :j i a n g y u a n x u 3 3 1 6 3 t o m 剂盒( 武汉博士德生物工程有限公司,批号: S A l 0 2 2 ) ,D A B 显色试剂盒( 武汉博士德生物工程有 限公司分装,批号:A R l 0 2 2 ) 。 1 3 仪器B
7、 M J 型包埋机、M J 一型病理组织包 埋冷冻台:常州中威电子仪器厂;L e i c aR M 2 2 3 5 切 片机:德国L e i c a 公司;O L Y M P U SB H - 2 显微镜:中 日合资O l y m o u sO p t i c a lC O L T D ;智能热板仪:山东 省医学科学院设备站。 2 方法 2 1 热板致痛法早小鼠随机分为1 0 组,每组 1 0 只。i v 途径6 组,分别为:N S 组、M o r ( 2 0m g k g 一1 ,i p ) 组、O S R ( 5 0 0 、2 5 0 、1 2 5 、6 2 5m g k g 一1 ) 组
8、,给药容量均为0 0 1m l g 。i c v 途径4 组,分 别为:N S 组、O S R ( 1 0 0 、5 0 、2 5m g k g 叫) 组,给药容 量均为每只1 0 山。分别测定各组给药前及给药后 1 5 、3 0 、4 5 、6 0 、9 0 、1 2 0m i n 舔足潜伏期并计算痛阈提 高百分率。 2 2 免疫组织化学法小鼠2 0 只,96 兼用,随机 分成O S R 组和N S 组,每组1 0 只,分别i p 10 0 0m 奎k g O S R 和等容量的生理盐水,给药4 5 m i n 后麻醉,用4 0g L 。1 多聚甲醛常规灌注,取脑 和腰段脊髓放入4 。C 的
9、4 0g L 一多聚甲醛固定液 中固定4 8h ,石蜡包埋,制成4l x m 切片。切片脱蜡 至水,3 0m L L H :O :浸泡1 0m i n 封闭内源性过 氧化物酶,抗原微波修复后滴加1 :1 0 0 兔抗P K c l 抗体4 过夜,滴加生物素化山羊抗兔二抗,3 7 。C 培 养箱内孵育2 0m i n ,再滴加S A B C 复合物,3 7 c c 培养 箱内孵育2 0m i n ,D A B 显色,苏木精复染。每个动 物随机取2 张切片,每个切片随机抽取2 个不重叠 代表陛视野,显微镜下观察脊髓背角、大脑皮质和丘 脑内P K C 一、免疫阳性细胞并计数。 2 3 统计学方法所有
10、数据均以戈s 表示。采用 S P S S1 1 0 统计软件包中的重复测量方差分析和 O n e w a yA N O V A 检验。 3 结果 3 1 O S R 对小鼠热板痛阈的影响 采用重复测量 方差分析,结果表明i vO S R5 0 0 、2 5 0 、1 2 5 和i c v 1 0 0 、5 0 、2 5m g k g 叫与给药前及N s 组比较对小鼠 热板反应舔足潜伏期影响的差别有统计学意义( P 万方数据 1 4 5 4 中国药理学通报C h i n e s eP h a r m a c o f D g i c a lB 姚t i n2 0 0 9N o v ;2 5 ( 1
11、 1 ) T a b1E 伍e c to t O S R ( i v ) O Dt h et o o t - e k i n gl a t e n c i 鼯o t m i 沁出eh o tp I a t et e s t ( ;s ,l = 1 0 ) N S 1 4 2 2 4 9 61 5 0 2 6 8 71 5 5 8 9 3 21 4 2 2 4 7 71 5 4 8 3 8 42 0 1 7 5 7 61 9 5 7 6 1 0 M o r 2 01 6 2 8 4 8 4 6 0 0 0 O 0 0 6 0 o o 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0
12、 0 + 5 7 6 4 6 1 3 4 9 5 5 1 4 3 3 O S R5 0 01 4 5 8 4 5 3 2 3 7 4 1 4 1 6 62 5 3 4 1 5 3 8 3 0 0 4 1 5 9 4 2 3 7 5 1 2 5 2 3 3 8 9 1 3 1 l 6 6 2 6 1 5 1 4 1 6 6 2 5 0 1 5 1 3 2 0 3 1 9 8 5 6 5 2 2 2 1 6 7 8 2 6 2 5 3 3 1 3 1 0 2 1 4 1 6 6 5 2 6 4 2 1 2 0 0 62 7 3 0 1 4 5 3 4 1 2 51 4 5 5 5 1 5 1 9
13、5 5 6 2 9 6 1 5 6 7 4 0 01 9 4 9 8 6 22 0 4 3 6 8 8 3 2 9 7 1 6 7 1 6 2 8 9 4 1 3 4 0 4 6 2 5 1 5 3 3 4 5 2 1 6 7 1 6 0 01 7 0 5 7 4 5 1 8 8 8 6 1 71 8 5 5 4 3 4 2 3 2 3 8 9 0 6 2 4 7 5 1 3 9 2 P 0 0 5 P 0 0 1t go D n t m l :P 0 0 5 ,P ( 0 0 1 埘p r i o t t o m e d i c i n e T n b2E f f e c to t O S
14、R ( i c v ) 加山e t o o t - U c k i n g l a t e n c i 荡o f m i c e i 山eh o tp l a t e t 皓t ( 三s ,l = 1 0 ) N s 1 4 3 0 4 8 0l O ,9 4 3 2 21 6 7 3 59 81 3 2 9 5 0 s1 4 2 2 4 0 51 5 2 6 6 5 71 8 0 7 1 7 3 4 M o t加1 6 2 8 4 科6 0 0 6 0 0 0 O 6 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 5 7 6 4 6 1 3 4 9 5 5 1 4 3 3 + o s
15、R1 1 4 9 4 4 0 3 3 1 3 6 1 3 6 1 。2 7 3 8 1 1 5 9 2 2 6 5 2 土1 7 7 9 3 5 4 1 1 7 6 5 3 2 1 1 1 4 8 5 4 2 2 9 1 7 6 6 5 01 5 3 7 5 3 2 5 8 1 4 8 4 2 2 4 5 1 4 “3 1 0 0 1 9 3 1 3 2 0 3 1 5 5 5 3 1 5 3 1 9 3 3 4 0 2 6 1 9 9 8 2 51 4 5 1 3 2 52 5 4 9 9 5 1 2 0 9 7 1 5 3 81 9 3 3 1 8 0 2 2 4 4 2 1 2 7 12
16、 2 5 5 1 1 9 6 2 1 2 9 1 4 0 7 P 0 0 5 。P 0 0 1 椰c o n t r o lg r o u p ;P O 0 5 ,P 0 0 1 似p r i o rt om e d i c i n e 0 0 5 ,P 0 0 1 ) ,表明O S R 有镇痛作用,i v 后痛阈 提高率最高为4 2 5 1 ,而i c v 后痛阈提高率可达 6 0 7 0 。i c y 后起效时间由i v 后的4 5r a i n 缩短为1 5 r a i n ,而作用持续时间由i v 后的9 0r a i n 延长至1 2 0 r a i n 以上,见表T a b1 、2
17、 。 3 2 O S R 对小鼠脊髓背角、大脑皮层和丘脑 P K C Y 免疫阳性细胞的影响 采用O n e w a yA N O V A 检验,结果表明N s 组与给药组P K C y 免疫阳性 细胞数的差别有统计学意义( P 0 0 1 ) 。O S R 可使 小鼠脊髓背角、大脑皮层和丘脑P K C Y 免疫阳性细 胞数目明显减少,分别比对照组降低了6 7 、6 2 和6 3 F i g1 。 4 讨论 P K C 作为重要的细胞内信号转导分子广泛分 布在中枢神经系统,P K c l 亚单位为脑、脊髓所独 有b 。P K C 与N M D A 受体和G A B A 受体的相互作 用在痛觉信
18、息的处理过程中发挥重要作用。P K C 的激活有赖于细胞内C a 2 + 浓度的增加。研究发现 P K C 活性增强能减少N 9 2 + 对N N D A 受体的阻滞, 促进N M D A 受体通道的打开,导致痛觉过敏的形 成 。P K C 磷酸化G A B A 受体抑制C l + 内流弱化了 G A B A 介导的突触后抑制作用7 I ,而G A B A 受体激 活则会抑制C a 2 + 内流,减少细胞内C a 2 + 浓度,抑制 P K C 的激活;另有研究发现在突触前膜P K C 能够通 过调节c A M P P K A 途径影响G A B A 的释放1 。脊 髓背角P K C y 的激
19、活提高N N D A 受体兴奋性导致细 胞核内C R E B 的磷酸化水平被抑制,使c f o s 和c j a n 等即早期基因表达降低是炎性疼痛和神经病理 1 瑚融o r O S R 伽出ee I l 玳耐叩o r P K C r i n t h e d 嘲lh o m 0 fs p h l a I r d ,钟弛b r 蚰n I 既柚dh y p o 山山锄哪o f 叫钟( x 2 0 0 ) A :d a lh o r no f8 p i e dc o r d0 fc o n l m lg r o u pB :d 嘲lh o r no fs p i r e d 耐0 fO S Rg -
20、 o u p ;C :e e r e b n l lc o r t n0 fc o n t m lg r o u p ;D :c e r e b r a le o r l e x o fO S R 伊叫p ;E :h y p o t h 抽瑚o f n t r dg r o u pF :h y p o l l I a L 明m 8o fO S R g r o u p 性痛发生的机制之一9 1 。鞘内注射P K C Y 反义寡核 苷酸或其特异性抑制剂,能抑制P K C y 活性,并明显 抑制慢性神经痛大鼠的痛觉过敏m 】。 我室以往的研究显示O S Ri p 具有一定的镇痛 万方数据 中国药理学
21、通报C h i n e s eP h a r m a c o l o g i c a lB u l l e t i n 2 0 0 9N o v ;2 5 ( II ) 1 4 5 5 作用,其镇痛作用可被C a C l :拮抗而被v a r a p a m i l 增 强 2 一J ,O S R 还能使大鼠脑和脊髓G A B A 免疫阳性 细胞表达增多 4 j 。本实验结果显示无论i v 还是i c v 途径O S R 均可明显提高小鼠热板痛阈( P 0 0 1 ,P 0 0 5 ) ,且i c v 后其镇痛作用更明显,提示O S R 镇 痛作用可能涉及中枢和外周,中枢镇痛起主导作用。 O
22、S R 使小鼠脊髓背角、皮层和丘脑P K C ,免疫阳性 细胞明显减少( P 0 0 1 ) 的结果提示中枢神经系统 信号转导分子P K C 一、参与了O S R 的镇痛作用。P K C 的激活有赖于细胞内C a 2 + 浓度,而O S R 可通过增强 G A B A 介导的中枢抑制作用【2 “J ,引起c a 2 + 内流减 少,细胞内的c a 2 + 浓度降低而抑制P K C 的激活。 O S R 镇痛作用的详细机制尚有待进一步研究。 参考文献: 1 刘艳丽,颜玲娣,吴春福,等不同阿片受体在羟考酮引起小鼠 高活动性和镇痛过程中的作用 J 中国药理学通报2 0 0 7 。2 , 3 ( 1
23、1 ) :1 4 8 4 9 1 u uYL ,Y a hLD ,W uCF ,e ta 1 E f f e c t so fd i f f e r e n tk i n d so fo p i a t sr e c e p t o ro no x y c o d o n e - i n d u c e dh y p e r l o c o e o m o t o ra n da n a l g e s i a i n m i c e J C h i n P h a r n m lB u l l ,2 0 0 7 ,2 3 ( 1 1 ) :1 4 8 4 - 9 2 姚婉霞,周俊俊,同琳,等
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- 氧化 槐定碱 镇痛 作用 及其 小鼠 中枢 PKC 表达 影响
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