溶血试验作为眼刺激试验替代方法的研究.pdf
《溶血试验作为眼刺激试验替代方法的研究.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《溶血试验作为眼刺激试验替代方法的研究.pdf(3页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、现 代预防 医学 2 0 0 2 年 第 2 9 卷 第 4 期M o d e r n P r e v e n t i v e Me d i c in e , 2 0 0 2 , V o l . 2 9 . N o 5 9 3 溶血试验作为眼刺激试验替代方法的研究 序艳, ,王雪2 ,张立实 ,李冠民“ ,张宝旭3 摘要目的:使用溶血试验作为体内眼刺激试验 ( D r a i z e t e s t )的一种替代方法。方法用该方法对 1 4种化学物的 眼刺激性进行检测,得到指标HC 。 值,与D r a i z e t e s t 两种评分标准,即最大平均值 ( MA S )和 2 4 h作用
2、值的结果进行相关 性比较。结果:L o g HC so 与MA S和 2 4 h作用值的相关系数分别是。9 5 5和。 . 9 4 4 , MAS与结膜评分相关显著.结论溶血 试验可用于替代 D r a i z e眼刺激试验. L 关镇词眼刺激;体外试验;替代方法;溶血试验 中图分类号R 一 3 3 文献标识码口A 文章编号1 0 0 3 - 8 5 0 7 ( 2 0 0 2 ) 0 4 - 0 5 9 3 - 0 3 S T UDY O N US I NG HAEM O L YS I S T ES T AS AN AL TE RNAT I VE M ET HO D OF DRAI Z E
3、EYE I RRI T A- TI ON T ES T. L I AO Y a n , WANG Xu e , ZHANG Li - s h i . e t a l . H- i S c h wt v I P u b li c He a t h , S i c h u a n U n iv e r s it y , C h e n g d u 61 0 0 4 1 . Ab s t r a c t : O b j e c t i v e : T o u s e Ha e mo l y s i s T e s t a s a n a l t e r n a t i v e me t h o d
4、o f D r a i z e e y e ir r i t a t io n t e s t ( D r a iz e t e s t ) . Me t h o d : 1 4 c o s me t ic in g r e d ie n t s w e r e t e s t e d b y H a e m o ly s is T e s t a n d t h e r e s u lt s w e r e c o mp a r e d wi t h t w o k i n d s o f s c o r e s i n Dr a iz e t e s t ( i . e . Ma x im
5、u m a v e r a g e D r a i z e t o t a l s c o r e ( MA S ) a n d 2 4 h a f t e r a p p l ic a t io n ) . R e s u lt ; T h e c o r r e la t i o n c o e f f i c i e n t ( r ) b e t w e e n Me a n L o g HC so a n d t h e M AS o r t h e 2 4 h a f t e r a p p l i c a t i o n w e r e 0 . 9 5 5 a n d 0 . 9
6、 4 4 . r e s p e c t i v e ly . An d i t a ls o s h o w e d L o g HC s o h a d s ig n if i c a n t c o r r e l a t io n w i t h c o n ju n c t i v a e s c o r e i n t h e t h r e e c o mp o n e n t s o f t h e MAS . C o n c l u s io n; T h e r e s u l t s s u g g e s t t h a t Ha e mo l y s i s T e
7、s t i s s i mp l e . q u i c k. s e n s i t i v e a n d c h e a p . I t c a n b e u s e d a s a n e f f e c t i v e a l t e r n a t i v e me t h o d t o Dr a iz e e y e i r r it a t i o n re st Ke y w o r d : E y e ir r i t a t io n ; I n v it r o ; A l t e r n a t iv e t e s t ; Ha e mo ly s i s T
8、e s t 体内 眼刺激试验 ( D r a i z e e y e ir r i t a t io n t e s t . D r a iz e 试 验)自二十世纪5 0年代起一直作为评价化学物眼刺激作用 的传统方法. 但是, 许多研究发现0 . 2 1 该方法在实验室间和实 验室内的结果常有很大差异,故对D r a iz e试验作为眼刺激 评价的唯一方法产生了置疑。 而且, 近年来由于动物福利、 动 物保 护运动 的兴起 和人 们对 “ 3 R”运 动,即 “ 减少 ( r e d u c t i o n ) ,优化 ( r e f i n e m e n t ) ,替代 ( r e p
9、l a c e m e n t )对动 物的使用”的关注D I , 各国已广泛开展了许多动物试验的体 外替代法研究。欧共体要求其成员国从2 0 0 2年7月 1日起 禁止使用动物对化妆品及其原料进行安全性检测。并列入 W T O双边协议的条款而我国目前产品的主要仍沿用传统 的动物试验方法,与有关国际条约没有接轨,在加入WT O 以后可能造成贸易摩擦 将影响我国的产品进入发达国家的 市 场 。 用多因家分析发现 D r a iz试验的检测原理大部分可以 用蛋白变性和细胞膜破坏来解释. 由此发展了基于测定从 红细胞中漏出的血红蛋白的最来评价膜损伤的Dr a iz e 试验 替代方法一溶血试验( h
10、 e mo l v s i s t e s t ) 。 使用分光光度法测 定化学物作用后的红细胞悬液的吸光度, 可计算出溶血率和 H C 。 值 即使 5 0 %红细胞溶血的受试物的浓度值) 。 此H C , o 值与D r a i 。试验两种评分标准即最大平均值 ( MAS ) 和2 4 h 作用值的结果及其组成参数 ( 角膜、 结膜、虹膜)的评分进 行相关性分析显示较好的一致性。 因此, 近年来国外已将此 试验用作 D r a iz e 试验的一种替代方法并进行了较深入的研 究,目前已发展到验证研究阶段, 并提出了包括其在内的替 代D r a i z e 眼刺激试验的化学物安全性评价方案I
11、 l 而我国在 动物试验替代方法的研究和使用方面尚刚刚起步, 对使用溶 血试验作为替代D r a in 。 眼刺激试验也未见报道。本文报告 使用溶血试验对 1 4 种化学物的检测结果,并将其与D r a i z e 试验的相关性进行比较和探讨。 材料与方法 汇 落 金项 目科技 部社 会公益 研究 专项资金 资助项 目 仁 作者单位1 四川大学华西公共卫生学院,6 1 0 0 4 1 2 中国药品生物制品位定所 3 北京大 学公共 卫生 学院 作者简介 启艳 ,女 。在读 博士生 收稿 口 期 2 0 0 1 -0 4 -1 5 I I I 受试物受试物的选择标准参照日本化妆品成分标准 和日本
12、药典。 所选择的 1 4 种受试物 ( 表 1 ) 包括表面活性剂 ( N o - 2 , 3 . 4 , 7 ) ,多经 基化合物 ( N o . 5 ) ,有色染料 ( No . 6 ) .醇类 ( N o . 8 . 1 0 , 1 4 ) 。有机胺盐 ( N o . 9 ) ,链烷 醇胺 ( N o . 1 1 , 1 2 )和梭酸 ( No . 1 3 , 1 5 ) .所有受试物和生 理盐水均为国产分析纯以上等级。 1 . 2 全血从北京市红十字血站购得新鲜人全血一袋 ( 2 0 0 mU. 1 . 3 试验方法 1 . 3 . 1 试剂和样品配置按常规配置和消毒 P H7 . 4
13、的 5 9 4现代预防医学2 0 0 2 年第2 9 卷第4 期M o d e r n P r e v e n t i v e Me d ic in e . 2 0 0 2 , V o l , 2 9 , N o P B S , 4 C 保 存. 制备R B C 悬液C C 的过程如下, 将新鲜人全 血分装于离心管. 于冷冻离心机4 C 1 5 0 0 r / m i n , 离心1 0 m i n . 弃上清, 然后同 样条件下等渗盐水洗两次. 再用p H 7 . 4 的 P B S洗一次,最后在 P B S中调RB C为 4 0 O X 1 0 个/ m l .保 存在 4 冰箱备用。整个
14、过程无菌操作。 表 1 受试物列表 N o E n g l is h n a me C h in e s e n a m e I I s o t o n i c s o d iu m c h lo r id e s o l u ti o n生理盐 水 2 P o l y o x y e t h y l e n e s c u b it - m o n o l a u r a t e T w a c n 2 0 3 S o d i u m N-la u r y l , z rc o s in z t 。月桂阶肌氨酸钠 4 S o d iu m l a u r y l . u lf u t。月桂基
15、硫酸钠 5 G l y c e r in甘油 5 A c id R e d 9 2酸性 红 , 2 7 P o ly o x y e th y l e n e , o r b iL a m o n o o le a t e T w e e n 8 0 8 B e n a y l a l c o h o l笨甲醉 9 S o d iu m a a l ic y l a t e间苯二胺 1 0 E t h a n o l乙醉 1 1 Mo n o e t h a n o l a m i n e乙醉胺 1 2 T n e t h a n o l a m in e三乙醉胺 1 3 A c e ti c
16、 a c id冰醋酸 1 4 B u , . . . 丁 醉 l 5 L a c t i , a c id乳酸 1 . 3 . 2 试验程序f s 7 用p H 7 . 4 的P B S溶解或悬浮受试物 后先进行预试,从 2 写的浓度起。按1:1 稀释成5个浓度 加人等体积的 R B S悬液,轻轻混匀在电热恒温水浴箱中 3 2 -C 孵育 3 0 mi n . 然后4 C 1 5 0 0 r / min离心 1 0 mi n , 取上清. 在 分光光度仪 ( 5 4 0 n m和 5 7 5 n m)分别测其吸光度值 ( A b a ) 设蒸馏水为完全溶血对照,P B S为溶剂对照 ( 自溶对
17、照) . S L S ( V . . 4 )为阳性对照。用 5 4 0 n m的Ab a 计算溶血率 ( HR) ; HR= ( A b a “ ;K ,一Ab a e ,s x )/( A b a g y , 一A b a g . , ) x l o o , 按预试结果调整受试物浓度设置4个剂量。 其剂量 设置原理是使溶血率在 5 0 写上 ; 均有分布,以保证能得到 较准确的HC , . 值在 5 7 5 n m波长下测定变性的血红蛋白 ( HD ) , 并计算血红蛋白变性率HD R= ( Ab a 5 7 5 / A b a 5 4 0 ) x 1 0 0 如H D R 1 0 0 0
18、0 3 2 1 4 8 9 9 1 5 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 2 8 1 4 9 36 1 4 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 士0 3 0 0 8 3 0 1 2 士 2 0 0 - 0 3 0 1 0 2 1 9 5 2 1 6 2 . 5 5 4 1 0 0 0 1 3 0 0 上 2 6 4 . 5 7 5 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 士0 4 .0 0 0 3 . 4 7 9 2 . 9 7 9 3 . 1 1 4 4 .0 0 0 6升价势 玲长 舟并 件卡 普苍 普 7 1 0 0 0 0 1 0 0 0
19、0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 士0 4 . 0 0 0 8 5 6 2 5 0 7 5 3 9 5 3 6 士 2 7 . 6 2 2 2 . 7 2 9 9 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 土 0 4 . 0 0 0 1 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 士0 4 . 0 0 0 1 1 6 0 3 5 1 0 6 0 3 5 7 2 士5 3 . 6 9 4 2 . 7 5 7 1 2 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 土 0 4 .
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 溶血 试验 作为 刺激 替代 方法 研究
链接地址:https://www.31doc.com/p-3712283.html