清肺口服液对3Ⅰ、7B型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子β1和血小板衍生生长因子BB蛋白表达的影响.pdf
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1、中国中西医结合杂志2 0 0 5 年7 月第2 5 卷第 7 期 C J I T WM, J u l y 2 0 0 5 , V o l . 2 5 , N o . 7 ,6 4 3 博 士之 窗 清肺口服液对3 1 , 7 b 型腺病毒感染人胚肺成纤维 细胞转化生长因子- 1 和血小板衍生 生长因子一 B B蛋白表达的影响 王文革陈四文汪受传 摘要目的 探讨清肺口 服液含药血清对腺病毒3 1 , 7 b 感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子一 伪 ( T G F - P i ) 、 血小板衍生生长因 子一 B B ( P D G F - B B ) 蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、
2、病毒对照 组、 空白血清组、 利巴韦林组和含药血清组, 除正常细胞组外, 其余4 组均以3 1 , 7 b型腺病毒分别攻击之, 并 分别加入相应药物至各组细胞中; 采用酶联免疫吸附( E L I S A ) 法检刚各组细胞上清液中T G F - p 1 , P D G F - B B 的含量。结果 病毒对照组较正常细胞组细胞中T G F - 日 1 , P D G F - B B 含量均明显增多( P 0 . 0 1 ) , 含药血清 组比 病毒对照组的细胞T G F - (3 1 , P D G F - B B 含量显著降 低( P 0 . 0 1 ) 。结论 ( 1 ) 腺病毒感染可使人胚
3、肺成 纤维细 胞T G F - (3 1 , P D G F - B B 蛋白 表达增高; ( 2 ) 清肺口 服液可降 低T G F - R 1 , P D G F - B B细 胞因子的 蛋白 表达, 这可能是其抗病毒作用的机制之一。 关键词清肺口 服液; 人胚肺成纤维细胞; 腺病毒; 转化生长因 子一 p 1 ; 血小板衍生生长因子一 B B E f f e c t o f Q i n g f e i O r a l L i q u i d o n P r o t e i n E x p r e s s i o n o f T r a n s f o r m i n g G r o w
4、t h F a c t o r - P i a n d P l a t e l e t D e r i v e d G r o w t h F a c t o r - B B o f A d e n o v i r u s T y p e 3 1 , 7 b I n d u c e d H u m a n E m b r y o n i c L u n g F i b r o b l a s t C e l l s WA N G We n - g e , C H E N S i - w e n , a n d WA N G S h o u - c h u a n D e p a r t m e
5、 n t o f P e d i a t r i c s , N a n j i n g T C M U n i v e r s i t y , N a n j i n g ( 2 1 0 0 2 9 ) A b s t r a c t O b j e c t i v e T o e x p lo r e t h e e f f e c t o f Q in g f e i o r a l l i q u i d ( Q O L ) c o n t a i n e d s e r u m o n p r o t e i n e x - p r e s s io n o f t r a n s
6、f o r m i n g g r o w t h f a c t o r - P 1 ( T G F - P , ) a n d p la t e l e t d e r iv e d g r o w t h f a c t o r - B B ( P D G F - B B ) o f a d e n - o v i r u s t y p e 3 1 , 7 b i n d u c e d h u m a n e mb r y o n i c l u n g f i b r o b l a s t c e l l s . Me t h o d s T h e c e l l s w e
7、r e d i v i d e d i n t o 5 g r o u p s , t h e n o r m a l c e l l s g r o u p ( N C G ) , t h e v i r u s c o n t r o l g r o u p ( V C G ) , t h e b l a n k s e r u m g r o u p ( B S G ) , t h e r i b - a v i r i n g r o u p ( R V G ) a n d t h e Q O L c o n t a i n e d s e r u m g r o u p( Q S G
8、 ) . A l l t h e c e l l s e x c e p t t h o s e i n t h e N C G w e r e c h a l l e n g e d b y a d e n o v i r u s t y p e 3 1 , 7 b a n d t r e a t e d w i t h c o r r e s p o n d e n t m e d i c i n e . T h e c o n t e n t s o f T G F - 俘 , a n d P D G F B B i n t h e s u p e r n a t a n t o f c
9、 e l l c u l t u r e w e r e m o n i t o r e d b y E L I S A a n d c o m p a r e d a m o n g g r o u p s . R e - s u i t s C o n t e n t s o f T G F - (3 1 a n d P D G F - B B i n V C G w e r e s i g n i f i c a n t l y h i g h e r , w h i l e t h o s e i n Q S G w e r e s i g n i f i - c a n t l y
10、l o w e r t h a n t h o s e i n V C G ( P0 . 0 1 ) . C o n c l u s i o n A d e n o v i r u s i n f e c t i o n c a n i n c r e a s e t h e p r o t e i n e x p r e s - s io n o f T G F - R 1 a n d P D G F - B B o f h u m a n e m b r y o n i c l u n g f i b r o b l a s t c e l l s . Q O L c a n d e c
11、r e a s e t h e p r o t e in e x p r e s - s i o n o f t h e s e c y t o k i n e s , w h i c h m a y b e o n e o f t h e m e c h a n i s ms o f i t s a n t i v i r a l e f f e c t . K e y w o r d s Q i n g f e i o r a l l i q u i d , h u m a n e m b r y o n i c l u n g f i b r o b l a s t c e l l s
12、, a d e n o v i r u s , t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r - P , , p l a t e l e t d e r i v e d g r o w t h f a c t o r - B B 清肺口服液是临床治疗小儿病毒性肺炎的有效药 物, 前期的药效学研究已显示其具有抗病毒、 调节免 基金项目: 国家自 然科学基金项目( N o . 3 0 1 7 1 1 7 1 ) 作者单位: 南京中医药大学儿科( 南京 2 1 0 0 2 9 ) 通讯作者: 王文革, 现在山西省儿童医院( 太原 0 3 0 0 1
13、3 ) , T e l : 0 3 5 1 一 3 3 6 0 7 4 8 , E - m a i l : w w g 8 2 4 )y a h o o . c o m. c n 疫、 解热、 止咳、 化痰及体外抑菌等作用 。在此基础 上我们采用血清药理学方法, 用酶联免疫吸附实验 ( e n z y m e - l i n k e d i m m u n o s o r b e n t a s s a y , E L I S A ) 研究清 肺口服液对腺病毒攻击后细胞转化生长因子- R i ( t r a n s f o r m i n g g r o w t h f a c t o r -
14、 (3 1 , T G F - (3 1 ) 和血小板衍生 生长因子一 B B ( p l a t e l e t d e r i v e d g r o n t h f a c t o r - B B , P D G F - B B ) 蛋白水平的影响, 进一步阐明清肺口服液治疗病 中国中西医结合杂志2 0 0 5 年7 月第2 5 卷第7 期C J I T WM, J u l y 2 0 0 5 , V o l . 2 5 , N o . 7 毒性肺炎的分子生物学机制。 材料与方法 1 材料 1 . 1 动物健康大耳白兔 1 0 只, 雌雄各半, 体重 2 . 5 - - 3 k g ,
15、由 南京中医药大学实验动物中心提供。 1 . 2 细胞人胚肺成纤维细胞 C C C - H P F - 1 , 由 中国医学科学院基础医学研究所细胞中心提供。本实 验采用第 5 一3 0 代细胞。 1 . 3 病毒腺病毒3 1 , 7 b 两型, 由白求恩医科大 学第一临床医学院儿科提供, 南京医科大学微生物中 心在人胚肾细胞上增殖活化。 1 . 4 药物与试剂清肺口服液: 由麻黄、 草劳子、 虎杖、 生石膏、 杏仁、 丹参、 僵蚕、 前胡、 桑白皮、 拳参组 成, 每剂含生药l m g / m l , 南京中医药大学附属医院制 剂室负责制剂和质量控制。R P MI - 1 6 4 0培养基(
16、 含终 浓度青霉素、 链霉素各 1 0 0 U / m l , 2 0 %新生牛血清) : 由美国G I B I C O公司提供。利巴韦林注射液: 华北制 药有限公司生产, 规格为1 0 0 m g / m l , 批号0 2 0 2 4 4 。 新 生牛血清: 由杭州四季青公司提供。胰蛋白酶: 由美国 G I B I C O公司提供。人T G F - p i , P D G F - B B E L I S A测 定试剂盒: 由上海森雄公司提供。 2方法 2 . 1 含药血清的制备将动物随机分为两组, A 组灌服清肺口 服液, 给药剂量2 5 g / k g , 分两次给予( 相 当于临床等效
17、剂量) ; B组给相应体积的生理盐水, 连 续给药3 天, 末次给药后禁食( 1 2 h ) 不禁水, 再灌服 1 天的量, 1 h 后, 动物在清醒状态下行颈动脉分离插管 采血, 血液静置 3 0 m i n后, 离心取血清, 5 6 水浴 3 0 mi n 灭活, 在超净工作台上过滤除菌, 分装于 1 . 5 m l E P管, 一 7 0 冰箱保存备用。A组为清肺口服液含药 血清, B组为空白血清。 2 . 2 细胞分组共分 3 1 型、 7 b型腺病毒两大 组, 每一大组又分5 个小组: 正常细胞组、 病毒对照组、 利巴韦林组、 含药血清组、 空白血清组。 2 . 3 细胞培养将复苏后
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