灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠海马ATP含量变化和兴奋性氨基酸释放的影响.pdf
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1、论著 灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠海马AT P 含量变化和兴奋性氨基酸释放的影响 张 焰 陈 群 顾卫东 丁浩中 曾因明 【 摘要】 目的 研究灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠海马A T P含量、A T P酶活性和兴奋性氨基 酸释放的影响。方法 脑缺血1 0m i n建立沙土鼠缺血再灌注模型。9 0只沙土鼠分为假手术组、 脑 缺血组和灯盏花素组。测定脑缺血后和再灌注1、 1 2和2 4h海马A T P含量、A T P酶活性和兴奋性 氨基酸含量。结果 脑缺血组,A T P、N a +- K+- A T P酶和C a2 +- A T P酶含量明显下降( P - J ( N . R I - * . 2 H“
2、 * - P . I s c h e m i a/r e p e r f u s i o n;B r a i n;A T P a s e;E x c i t a t o r ya m i n o - a c i d s B % ( * 3 P E - =B,+ 2 Q - I : - N2 0 0 5,3 1(1 1) :8 4 3R8 4 5 M 作者单位:2 1 4 0 6 2 无锡市第四人民医院麻醉科( 张 焰、 顾卫 东、 丁浩中) ; 徐州医学院麻醉学系( 陈 群、 曾因明) 灯盏花素作为蛋白激酶C(P K C) 抑制剂, 具有 减轻脑缺血 / 再灌注引起的神经细胞死亡作用 1, 但
3、 其作用是否与减少A T P含量下降、 降低兴奋性氨 基酸释放有关尚不清楚。本文应用沙土鼠脑缺血再 灌注模型, 探讨灯盏花素是否具有上述作用。 材料与方法 一、 动物与药品 蒙古沙土鼠, 6 07 0g, 雄性, 徐州医学院实验 动物中心提供。灯盏花素注射液( 云南省生物制药 厂, 含黄酮4 . 5m g/m l) ,A T P( S i g m a公司) ,A T P 酶试剂盒( 南京建成生物制品研究所) , 谷氨酸 ( G l u) 、 天冬氨酸(A s p) 、 谷氨酰胺(G l n) 、 - 氨基丁 酸( G A B A) 标准品由华美生物工程公司提供; 其余 试剂均为国产分析纯。 二
4、、 方法 1 .动物模型与分组 戊巴比妥钠4 5m g/ k g 腹 348 江苏医药2 0 0 5年1 1月第3 1卷第1 1期 J i a n g s uM e dJ,N o v e m b e r 2 0 0 5,V o l 3 1,N o . 1 1 腔注射麻醉后, 仔细分离双侧颈总动脉, 用无创动脉 夹阻断脑血流即可造成前脑缺血1 0m i n, 松开动脉 夹恢复脑血流即为再灌注。9 0只沙土鼠分为假手 术组(A组) 、 脑缺血组( B 1组) 、 脑缺血再灌注1h 组( B 2组) 、 脑缺血再灌注1 2 h组(B 3组) 、 脑缺血再 灌注2 4 h组( B 4组) 、 灯盏花素
5、+脑缺血组(C 1组) 、 灯盏花素+脑缺血再灌注1h组( C 2组) 、 灯盏花素 +脑缺血再灌注1 2h组(C 3组) 、 灯盏花素+脑缺 血再灌注2 4h组( C 4组) , 每组1 0只。灯盏花素组 在缺血前3 0m i n腹腔注射灯盏花素1 0m l/ k g , 其余 组同期注射生理盐水。每组6只行A T P、A T P酶 和兴奋性氨基酸测定, 4只行病理学检查。在缺血 期间监测鼓膜温度反映脑温, 并维持鼓膜温度于( 3 7 0 . 2)。 2 .实验方法 (1) 沙土鼠断头取脑, 冰面上分 取海马组织,- 7 5 液氮冷冻, 保存待测标本。( 2) 应用高效液相紫外检测法测定A
6、T P含量, 应用钼 蓝分光光度法测定A T P酶活性。( 3) 应用高效液 相紫外检测法测定G l u、A s p、G l n、G A B A含量。 ( 4) 脑 缺 血 再 灌 注 后7d, 沙 土 鼠 戊 巴 比 妥 钠 4 5m g / k g 腹腔注射麻醉后, 经主动脉插管先后灌注 生理盐水8 0m l和4 %甲醛溶液1 2 0m l。然后断头 取脑, 并浸泡固定于4 %甲醛溶液, 在囟门后1 . 7 mm处石蜡切片, 厚5m。低倍镜观察海马C A 1区 锥体细胞带的厚度; 高倍镜观察海马C A 1区锥体细 胞膜和核膜完整、 核仁清楚的存活锥体细胞数目。 结果以各治疗组计数的海马C
7、A 1区锥体细胞占假 手术组海马C A 1区锥体细胞数的百分数表示。 三、 统计学处理 计量数据以均值标准差(- xs) 表示, 组间比 较采用方差分析, 以P 0 . 0 5为差异有显著意义。 结果 一、A T P、N a + - K + - A T P酶、C a 2 + - A T P酶含 量变化 脑缺血和再灌注组含量均明显下降, 灯盏花素 +脑缺血组, 含量均高于脑缺血组( 表1) 。 二、 脑缺血组, 缺血后G l u、A s p明显升高,G l n 降低, G A B A升高; 再灌注后G l u、A s p、G l n、G A B A 含量明显升高。灯盏花素+脑缺血组,G l u、
8、A s p、 G A B A虽亦升高, 但明显低于脑缺血组,G l n则明显 高于脑缺血组( 表2) 。 三、 脑缺血后7d, 海马C A 1区低倍镜下缺血 / 再灌注组锥体细胞带变薄、 稀疏, 甚至消失; 灯盏花 素组锥体细胞带明显比缺血组宽厚。高倍镜下缺血 组锥体细胞大部凝固性坏死, 核膜完整、 核仁清楚的 存活锥体细胞数较少( 见封二图1) ; 灯盏花素组存 活锥体细胞明显多于缺血组( 见封二图2) 。各组锥 体细胞存活数见表3。 表1 海马A T P和A T P酶含量的变化(- xs,n= 6) 组别 A T P (mm o l/ k g ) N a +- K+- A T P酶 ( m
9、 o l p i m g p r o t - 1 h - 1) C a 2 +- A T P酶 ( m o l p i m g p r o t - 1 h - 1) C 1组0 . 5 6 0 . 1 1#5 . 4 3 0 . 5 5#2 . 4 5 0 . 3 6# C 2组0 . 8 1 0 . 1 2#5 . 0 9 0 . 3 6#2 . 1 4 0 . 4 1# C 3组0 . 5 8 0 . 0 7#3 . 6 7 0 . 3 7#1 . 6 4 0 . 3 9# C 4组0 . 4 3 0 . 0 9#2 . 7 1 0 . 4 2#1 . 3 9 0 . 4 0# B 1组0
10、 . 2 1 0 . 0 4#4 . 1 3 0 . 4 1#1 . 9 2 0 . 4 7# B 2组0 . 4 9 0 . 0 9#4 . 3 5 0 . 2 9#2 . 0 7 0 . 3 7# B 3组0 . 3 8 0 . 1 1#3 . 0 7 0 . 3 7#1 . 2 8 0 . 4 8# B 4组0 . 2 5 0 . 0 8#1 . 2 3 0 . 4 3#0 . 5 8 0 . 3 5# A组1 . 1 2 0 . 1 28 . 8 7 0 . 3 93 . 8 5 0 . 4 4 与A组比较, #P 0 . 0 1 与B组比较,P 0 . 0 1 表 2 海马G l u
11、、A s p、G l n、G A B A的含量(n m o l/g,- xs,n= 6) 组别 G l uA s pG l nG A B A C 1组1 8 . 3 8 2 . 9 1#9 . 5 5 2 . 6 2#4 . 2 3 0 . 8 1#3 . 8 3 0 . 6 7# C 2组2 1 . 4 2 3 . 0 2#1 2 . 6 4 2 . 6 9#6 . 4 9 1 . 0 1#4 . 1 9 0 . 5 1# C 3组2 1 . 7 7 2 . 9 7#1 2 . 2 9 2 . 5 9#6 . 9 7 0 . 9 8#4 . 0 9 0 . 4 8# C 4组2 2 . 3
12、2 2 . 5 4#1 2 . 8 3 2 . 1 2#7 . 2 2 1 . 1 7#3 . 7 9 0 . 4 9# B 1组2 7 . 2 1 3 . 4 5#1 6 . 3 1 2 . 7 8#3 . 4 2 0 . 6 2#4 . 9 7 0 . 5 9# B 2组3 2 . 7 6 2 . 9 8#1 9 . 1 9 3 . 0 1#5 . 9 7 0 . 9 2#5 . 1 3 0 . 6 7# B 3组3 3 . 4 8 3 . 7 6#1 9 . 9 4 2 . 8 8#6 . 1 3 0 . 8 1#5 . 0 8 0 . 5 1# B 4组3 6 . 4 4 2 . 7
13、1#2 1 . 0 6 2 . 4 2#6 . 5 4 1 . 0 7#4 . 9 8 0 . 4 8# A组6 . 4 5 1 . 1 03 . 0 7 0 . 7 45 . 1 1 0 . 5 93 . 0 4 0 . 4 1 与A组比较, #P 0 . 0 1 与B组( 各亚组之间) 比较,P 0 . 0 1 表3 海马C A 1区锥体细胞计数(- xs,%,n= 4) 组别内侧中间外侧 灯盏花素组(C 1 4组) 7 1 1 5 # 7 2 1 1#7 5 1 4# 缺血组(B 1 4组) 4 36 25 3 与缺血组比较, #P 0 . 0 1 讨论 脑组织缺血时, 氧供中断, 导致
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