抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性.pdf
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1、51 6 4免 疫 学 杂 志第22卷第3 期2 (X 万年6 月I M MU N O L O GIC A LJ O U B 一 N 川山V o l .2 2N o 3J u n eZ 以 拓 文章编号 1 以 1 工 8 86l( 么 X 巧 ) 03( 5)一 创64一 03 抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性 何艳萍, 钟青萍 , 钟士清( 华 南 农业 大 学 食 品学 院, 广州51 仪 淆 0 ) 摘 要1 目的 制备特异性抗痢疾志贺氏菌的鸡卵黄免疫球蛋白, 研究母鸡对痢疾志贺氏菌的免疫应答规律及抗体的 稳 定性。 方法 以 两种 不同 剂量的 痢 疾志贺氏 菌作为 抗原免疫产
2、卵母鸡, 应用酶 联免疫吸附测定法检测抗痢疾志贺氏 菌1 盯 的 效价及 其稳定性。 结果 初次 免疫后第1 2 天, 卵黄中 开始出 现 抗痢 疾志贺氏 菌的1 盯, 免疫应答持续时间 超过25周。稳定 性 试验表明1 盯在p H3一 n, 温 度不超过印, 蔗 糖质量浓度不高于7 印岁 L 的 渗 透压条 件下活性 稳定。 结 论 用痢 疾志贺氏 菌免疫母鸡制备的1 盯效价高, 理化性质稳定。 关键词 痢疾志贺氏菌; 鸡卵黄免疫球蛋白; 抗体活性; 稳定性 【 中图分类号 R392. n 文献标识码 A h记u c ti on ofs 伴c i fi c c hi c kene ggyo玫
3、1 响 u n o g l obul ina g ai nst shige血 dyse n te 而 解 H EY an 一 p i嗯, Z H O N GQ i ns-p i n g , Z HON GShi一 q i 嗯 ( Col lege ofFoO ds c ic 。 , 50 砚 hChi naA g ri u l t u ra l Uni彩 e rs i ty, 凸 2。 了谬灿u sl( 又 湃 0 , China ) Toprep a rethe c 拉 c k e n e ggy o lki rnmuno gl o b ul in ( 1 叮) 昭 a l n sts 丙
4、妙ll a 碑 ys e 刀 te 几 。 朋 d stu街the v 面 ati o n a n ( 1 s tabili tyofl 叮.T 加 。 山 玉re ntdos 铭e ofsh妙而 咖e 晓ruIe was u se d toiInIn uIuze wered e t e c t edbye Iu y m e li nk e d immuno adso r 】x 三n t as 哪 ( E ll SA) . R es ul ts l 叮was de t e c t e d th e he ns. A l l t i l 众l y ti teran d th e st abili
5、 tyofl 群 o n l Z d al l e r the fi rs t i nunumza lj o n . The s 详c i fi c anti l 刃 d y ac t i vi tyl as t e d 7 00 留 n 止. C o n c l u 幼 o n moret l la n 25 week s . 1 盯 was s t a b l e u ll d e r th e co 诫tion ofp H3 一 1 1 , t e l ll pe r a tu l蕊 团 , suco seco nc e ntra tion簇 而5 1 盯 h as坛 ght i l e
6、 r and st able 曲邓 i c o- c ll e ll l i c alc 卜 田 a c teristic s K e y w o n 七 Sh igel人 Z drs价; E 路扣 I k immunogl o b 己 i n ; 枷ilx ld y A c ti 访 炸 ; S l al 1 1 1汀 当采用某种抗原免疫产蛋母鸡时, 母鸡经免疫 应答后, 产生相应的抗体转移至卵黄中, 这种抗体就 是鸡卵黄免疫球蛋白。母鸡经免疫成功后, 可产生 较 长时间的 免 疫应答, 效价可维持一年以 上, 1 盯来 源方便, 经济, 可大规模生产。另外, 1 盯来自鸡卵 黄, 属纯天然
7、制品, 孕妇、 婴幼儿均可使用; 它不会产 生抗生素的副作用与耐药性; 只杀灭致病菌, 不伤害 有 益 菌群, 并能 形成微生 态平衡 一 。 本研究用痢 疾志贺氏菌作为疫苗免疫产卵母鸡, 通过研究母鸡 对痢疾志贺氏菌的免疫应答规律和抗体的稳定性, 为制备抗痢疾志贺氏菌的免疫功能食品、 免疫生物 制剂提供理论依据。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物 产蛋率高的 健康蛋鸡。 1 . 2 主要实验试剂辣根过氧化物酶( H R P ) 标兔 抗鸡1 盯( si g ll a 公司产品, 产品号: Ag以6 ) ; 包 被液为 p H g . 6 碳酸盐缓冲液; 洗涤液为0 . olmol几p H
8、 7 . 4 P B s 一 0 . s lnI J L T w e e n 一 20; 封闭液为0 . o l mol / L p H 7 . 4 PBS( 含80岁 L 脱脂 奶粉) ; 抗 体稀释 液为0 . olmol 儿 p H7. 4 PBS ; 底物缓冲 液为0 . 05mol/L磷酸盐 一 柠 檬酸 缓冲液; 终止液为Z mol/ L 硫酸。 1 . 3 免疫原制备 将痢疾志贺氏菌( 购自中 科院微 生物研究所菌种保藏中心) 接人液体培养基中摇瓶 培养后离心, 得菌体, 用无菌生理盐水洗涤3 次, 得 到l x 1 0 10C 刊/ mL 菌悬液, 1 00 水浴加热灭活后 备
9、用。 1 . 4 免疫方法12只蛋鸡作为试验鸡随机平均分 成A 、 B 两组。 初次免疫取备用菌悬液, 加人弗氏完 全佐剂, 乳化, 使抗原质量浓度分 别为 lx 1 0 8 鸡不 【 收稿日 期 2 (X) 5 一 01一 10; 仁 修回日 期1 2 (X 拓 一 以一 24 【 作者简介1 何艳萍( 1 97 9 一 ) , 女, 广东 广州市 人, 硕士生 用微生物方面的研究。( 侧) 020 一 8 528 0267; c ake 1 0 11 1 . c o m ,通讯作者 , 主要从事应 ( E 一 二1 ) b ab y - C FU/ mL、 l xl 了C FU/ mL,
10、分别免疫 A 、 B 两组母 间隔两周各追加免疫2 次, 第2 、 3 次改用弗氏 完全佐剂。同时设免疫的对照组。 1 . 5 I gY的 分离提取 采用水稀释 法。用8 倍 蒸馏 水稀释 免 疫 后 鸡卵 黄, 用l mol 几H cl调p H 至5 . 0 - 第 3 期何艳萍, 等 . 抗痢疾志贺氏菌卵黄抗体的制备及其稳定性5 1 6 5 5 . 2 , 4 静置过夜, 取上清液在4 下13640x g 离 心20而 n , 弃沉淀, 留 上清液得到粗提1 叮水溶液。 1 . 6 志贺氏菌I gY效价检测 采用间接E H SA法, 二抗为辣根过氧化物酶标兔抗鸡1 盯, 底物为 邻苯二 胺
11、。 包被: 用包被液将抗原稀释成l x 1 0sc 刊/ mL, 以 每 孔1 00拌 L 包 被 %孔 聚 苯乙 烯 高 结 合 力 酶 标 板, 4 放置过夜。洗板: 每孔加人洗涤液, 室温 放置3 而n 甩净拍干, 重复3 次。 封闭: 每孔加入 1 00拜 L 封闭液, 37温育60m in 。 洗板: 同。 加样: 将粗提1 盯水溶液用抗体稀释液倍比 稀释 为 1 : 2 00、 1 : 4 印、 1 : 8 (X)、 1 : 1 6 0( ) 、 1 : 3 2 00、 1 : 6 4 00、 1 : 128 00、 1 : 256( x ) 等8 个梯度, 以每孔1 00拌 L
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- 关 键 词:
- 痢疾 志贺氏菌 卵黄 抗体 制备 及其 稳定性
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