新生大鼠高纯度少突胶质前体细胞系细胞的培养与鉴定改良振荡分离纯化法的特点.pdf
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1、 中国临床康复 第 9 者 著 7 7 溯 2 0 0 5 - 0 5 - 0 7 出版 C h i n e s e J o u r n a l o f C l i n i c a l R e h a b i l i t a t i o n , M a y 7 2 0 0 5 V o l . 9 N o . 1 7 墓础研究 新生 大鼠 高纯度少突胶质前 体细胞系 细胞的 培养与鉴 定: 改良 振荡 分 离 纯 化法的 特点“ 殷红兵 , 丁爱石 , 吴卫平 , 范明 , 解放军南京军区福州总医院神经内 科, 福建省福州市 3 5 0 0 2 5 ; 解放 军军事医学科学院基础医学所, 北京市
2、 1 0 0 5 8 0 ; 解放军总医院 神经 内科, 北京市1 0 0 5 8 3 通讯作者: 殷红兵, 男, 1 9 6 7 年生, 江西省九江市人, 汉族, 现解放军 总医院在读博士, 主治医师, 从事神经免疫临床与基础研究。 Y H B 3 0 1 y a h o o . c o m . e n 中图分类号: R 7 4 文献标识码: A 文章编号: 1 6 7 1 一 5 9 2 6 ( 2 0 0 5 ) 1 7 一 0 0 3 6 一 0 2 收稿日期: 2 0 0 5 - 0 4 - 0 4 修回日期: 2 0 0 5 - 0 4 - 0 7 ( 0 4 / S N / Y
3、W) C u l t u r e a n d d i f f e r e n t i a t i o n o f p u r e o l i g o d e n d r o c y t e p rec u r s o r s f r o m n e o n a t a l S D r a t : c h a r a c t e r i c s o f i m p r o v e d s e p a r a t i o n a n d p u r i fi c a t i o n t h r o u g h a g i t a t i o n Y in H o n g - b in g , D
4、i n g A i- s h i , W u W e i- p in g , F a n M in g , D e p a rt m e n t o f N e u r o l o g y , F u z h o u G e n e r a l H o s p i t a l o f N a n j i n g M i l i t a ry A r e a C o m m a n d o f C h i n e s e P L A , F u z h o u 3 5 0 0 2 5 , F u j i a n P r o v i n c e , C h i n a ; I n s t i t
5、u t e o f B a s i c M e d i c i n e , C h i n e s e P L A A c a d e m y o f M i l - i t a r y M e d i c i n e , B e ij i n g 1 0 0 5 8 0 , C h i n a ; D e p a rt m e n t o f N e u r o l o g y , G e n e r a l H o s p i t a l o f C h i n e s e P L A , B e i j i n g 1 0 0 8 5 3 , C h i n a C o r r e s
6、p o n d e n c e t o : Y i n H o n g - b in g * , S t u d y i n g f o r d o c t o r a t e , A t t e n d i n g p h y s ic i a n , D e p a rt m e n t o f N e u r o l o g y , F u z h o u G e n e r a l H o s p i t a l o f N a n j i n g M i l i t a ry C o m m a n d A r e a 叮C h i n e s e P L A , F u z h o
7、 u 3 5 0 0 2 5 , F u j i a n P r o v i n c e , C h i n a Y H B 3 0 1 y a h o o . c o m . e n R e c e i v e d : 2 0 0 5 一 0 4一 0 4 A c c e p t e d : 2 0 0 5一 0 4 一 0 7 Ab s t r a c t A I M: T o o b s e r v e t h e r e g u l a r i t y o f t h e p r o l i f e r a t i o n a n d d i ff e r e n t i a t i
8、o n o f o l i g o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r c e l l s i n v i t r o , a n d s t u d y t h e e x p e r i m e n t a l m e t h o d s t o o b t a i n h i g h - p u r i t y o l i g o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r s c e l l s . ME T H O D S : T h e e x p e r i m e n t w a s f i n i s h
9、 e d i n t h e I n s t i t u t e o f B a s i c M e d i c i n e , C h i n e s e P L A A c a d e m y o f M i l i t a ry M e d i c i n e f r o m M a r c h 1 “ t o A u g u s t 1 “ 2 0 0 4 . C o rt e x o f n e w n e o n a t a l S D r a t w a s o b t a i n e d a n d c u l t u r e d i n v i t r o . O l i g
10、 o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r s , w h i c h g r e w o n t h e s u r f a c e o f a s t r o c y t e s m o n o l a y e r , w e r e s e p a r a t e d b y i m p r o v e d a g i t a t i o n m e t h o d , a n d w e r e f u rt h e r p u r if i e d b y d if f e r e n t i a l a d h e i o n . O l i
11、g o d e n d r o c y t e p r e c u r s o r c e l l s w e re c u l - t u r e d i n s e r u m - f re e m e d i u m a n d s e r u m m e d i u m , r e s p e c t iv e l y . O l i g o d e n d r o - c y t e l i n e a g e c e l l s w e r e i d e n t i f i e d b y d i ff e r e n t c e l l s u rf a c e m a r k
12、 e r s w i t h i m - m u n o h i s t o c h e m i s t ry . R E S U L T S : T h e o l i g o d e n d r o c y t e l i n e a g e c e l l s w i t h 9 5 % p u r i t y i n d i f f e r e n t d e v e l o p m e n t a l s t a g e s o r t y p e 2 a s t r o c y t e w e r e o b t a i n e d . O l i g o d e n d r o
13、c y t e p r o g e n i t o r c e l l s w e r e i d e n t i f i e d b y A 2 B 5 a n d 0 4 a n t i b o d i e s , i m m a t u r e o l i g o d e n d r o c y t e , m a t u r e o l i g o d e n d r o c y t e a n d t y p e 2 a s t r o c y t e w e r e i d e n t ifi e d b y 0 4 a n d 0 1 a n t i b o d i e s ,
14、m a j o r b a s i c p ro t e i n . C O N C L U S I O N : I m p r o v e d s e p a r a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n t h ro u g h a g i t a t i o n i s s u i t a b l e a n d e f f e c t i v e to o b t a i n o l i g o d e n d r o c y t e l i n e a g e c e l l s . 质细胞, 它包绕神经纤维的轴突而形成髓鞘, 对轴突正 常快速电
15、传导等功能具有重要作用 ,其起源于少突胶 质前体细胞 。长期 以来 ,认 为少突胶质细胞 的主要功 能就是形成中枢系统的髓鞘 、 营养和保护轴突 , 但近年 的研究发现少突胶质细胞还有为 中枢神经系统提供神 经营养因子和生长因子 、表达轴突生长抑制分子等其 他作用 1 - 3 1 。在临床上 , 少突胶质细胞与多发性硬化 、 脑和脊髓损伤 、炎性脱髓鞘及某些遗传代谢性疾病等 中枢神经系统疾病关系密切 。因此 ,有必要深人研究 少突胶质细胞生物学。体外培养的少突胶质细胞系与 其在体特性极其相关 4 , 5 1 , 通过体外培养研究可以了解 到少突胶质细胞系的存活 、 增殖 、 分化 以及发育过程
16、 中 细胞的生物化学变化等, 同时加深理解生长因子、 转录 因子对 细胞 系 的调节 以及基 因的表 达 。更 为重要 的 是,可将经过体外培养大量增殖的少突胶质细胞系细 胞移植人脱髓鞘 的中枢神经系统,形成髓鞘和促进髓 鞘再生。这些实验均需要大量不同发育阶段的少突胶 质细胞, 因此, 纯化少突胶质细胞系细胞是开展这些实 验 的重要前提 。 1材 料 和 方 法 设计 : 以动物为观察对象 , 单一样本研究。 单位 : 解放军总医院神经 内科 。 Y in H B , D in g A S , W u W P , F a n M . C u lt u r e a n d d iff e r e
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