应用氧化酶法对高糖高脂动物模型肝糖原含量的测定.pdf
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1、2 0 0 9 年1 月 第1 9 卷第1 期 中国比较医学杂志 C H I N E S EJ O U R N A LO FC O M P A R A T I V EM E D I C I N E J a n u a r y ,2 0 0 9 V 0 1 1 9N o 1 应用氧化酶法对高糖高脂动物模型 肝糖原含量的测定 柳占彪,张少卓,李玉红,王茜 ( 天津中医药大学中医药研究院,天津3 0 0 1 9 3 ) 庐e 口s 畸) $ 研究报告$ Q m 、e # 、盼e R 、出 【摘要】目的建立氧化酶法检测肝糖原的方法。方法采用碱中和与缓冲液相配合调节水解液p H 至中 性,然后用氧化酶法
2、检测肝糖原含量。结果用1 0t t L6m o l ,LN a O H 加入等量肝糖原水解液后,再加入4m Lp H 7 2 磷酸盐缓冲液,可使糖原水解液p H 值调为7 2 ,用于氧化酶法测定糖含量。结论该法操作简便易行,结果稳定、 重复性好。 【关键词】肝糖原;氧化酶法;模型,动物 【中图分类号】R 3 3【文献标识码】A【文章编号】1 6 7 1 7 8 5 6 ( 2 0 0 9 ) 0 1 0 0 3 4 - 0 3 C o n t e n tD e t e r m i n a t i o no nH e p a t i cG l y c o g e no fA n i m a lM
3、 o d e l o nH i g hG l u c o s ea n dF a tb yO x i d a s eM e t h o d L I UZ h a n - b i a o ,Z H A N GS h a o - z h u o ,L IY u - m n g ,W A N GX i ( R e s e a r c hI n s t i t u t eo fT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n e ,T i 明j i nU n i v e r s i t yo fT r a d i t i o n a lC h i n e
4、s eM e d i c i n e ,T i a n j i n3 0 0 1 9 3 ,C h i n a ) 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oe s t a b l i s ho x i d a s em e t h o do nd e t e r m i n a t i o no fh e p a t i cg l y c o g e n M e t h o d s E m p l o ya l k a l i n e u t r a l i z a t i o na n db u f f e rs o l u t i o nt or e
5、s u l a t et h ep Ho fd i g e s ta n dc a u f ei tb en e u t r a l ,d e t e r m i n et h ec o n t e n to fh e p a t i cg l y c o g e nb y o x i d n s em e t h o d R e s u l t sA d d1 0t , Lo f6m o l LN a O Ht ot a l e sd o s e so fh e p a t i cg l y c o g e nd i g e s t ,t h e na d d4m Lo fb u f f e
6、 r p h o s p h a t e ( p H 7 2 ) t ol e tt h ep Ho fh e p a t i cg l y c o g e nd i g e s tb e7 2 ,i ti se m p l o y e dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to fh e p a t i cg l y c o g e nb y o x i d a s em e t h o d C o n c l u s i o n sT h i sm e t h o di se a s yt oo p e r a t ea n ds t a b l e
7、,i t sr e p r o d u c i b i l i t yi sg o o d 【K e yw o r d s 】H e p a t i cg l y c o g e n ;Q x i d a s em e t h o d ;M o d e l ,a n i m a l 肝糖原是糖尿病、高脂血症等疾病的重要观测 指标之一。目前检测肝糖原的常用方法为蒽酮 法。然而应用此方法进行检测时,因受试剂、温 度、标准曲线回归系数低、方法稳定性差等因素的影 响,结果重现性不好,而且使用试剂多,溶液配制和 操作过程复杂。为此,本文采用碱中和与缓冲液相 配合调节水解液p H 至中性,然后用氧化酶法检
8、测 糖尿病大鼠和高脂血症家兔肝糖原含量,现将结果 报道如下。 l 材料和方法 1 1 试验材料 1 1 1 动物:W i s t a r 大鼠,体重1 5 0g 左右,雌性,购 自天津市医学放射研究所,动物许可证号:S C X K ( 津) 2 0 0 5 0 0 0 1 ;大耳自家兔,体重2 5k g 左右,雄 性,购自中国医学科学院实验动物研究所,动物合格 证号:S C X K ( 京) 2 0 0 5 0 0 1 3 。 1 1 2 药品及试剂:四氧嘧啶:英国B D H 有限公司 进口( 批号:8 2 0 1 7 ) 。葡萄糖试剂盒:中生北控生物 科技股份有限公司产品( 批号0 7 1
9、0 4 1 ) 。甘油三酯试 剂盒:中生北控生物科技股份有限公司产品( 批号 0 7 1 2 1 1 ) 。3 0 K O H ;6m o l LH C I ;6m o l LN a O H ;p H 7 2 磷酸盐缓冲溶液;无水乙醇;精密p H ( 5 9 ) 试 【通讯作者】柳占彪( 1 9 6 0 一) ,副研究员硕士,主要从事新药开发研究。E - m a i l :6 3 4 2 5 6 7 4 7 q q m 万方数据 中国比较医学杂志2 0 0 9 年1 月第1 9 卷第1 期C h i nJC o m pM e d ,J a n u a r y2 0 0 9 ,V 0 1 1 9
10、 N o I 3 5 纸等。 1 1 3 仪器设备:M i c r o l a b 3 0 0 型半自动生化分析 仪;水浴锅;天平;加样器等。 1 2 方法 1 2 1四氧嘧啶性高血糖模型:选择4 5 只雌性 W i s t a r 大鼠,体重1 8 0 2 0 0g ,参考徐叔云糖尿病造 模方法睢】,用四氧嘧啶1 7 0m g k g 剂量,腹腔注射,每 日一次,连续2 日注射,在第3 日测定血糖值,以空 腹血糖 1 1m m o l L 为成功模型。选该标准的成功 模型鼠3 0 只纳入实验。另选择雌性大鼠3 0 只作为 正常对照。分别在造模后第4 天、第7 天、第1 4 天 剖杀1 1 3
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- 应用 氧化酶 高糖高脂 动物 模型 肝糖 含量 测定
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