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1、烟酰胺对椎问盘工、型胶原的调控作用 徐蔚蔚1 邵增务1郭兵1杨述华1 俞旭东1 谢卯1 熊蠡茗1 2 1 药物研究 摘要目的:考察烟酰胺对白介素一l p 诱导的体外兔腰椎间盘退变模型中I 、型胶原的保护作用,并初步探讨其机 制。方法:构建兔腰椎间盘组织凝胶培养模型,将其分为正常对照组,烟酰胺对照组( 加入0 5 m g m l 烟酰胺) ,退变组( 加 入1 0 n g m lI L - - 1 1 3 ) 和3 个烟酰胺治疗组( 加入I L 一1 B 的同时,并分别加入0 5 m g m l 。0 2 5 m g m l 和0 0 5 m g m l 烟酰 胺) 。培养3 天及l 周时取各组
2、髓核和纤维环分别行I 、型胶原基因R T P C R 检测,培养2 周时行I 、型胶原、i N 一 0 S 、T G F - - 6 1 及C a s p a s e - - 3 免疫组化检测。结果:R T P C R 显示3 天及1 周时,各治疗组I 、型胶原表达均强于退 变组,烟酰胺的保护作用随浓度增加而增强。I 、型胶原免疫组化显示,各治疗组椎问盘正常结构和胶原含量均优于 退变组,以大剂量烟酰胺治疗组最显著。i N O S 、C a s p a s e - - 3 免疫组化显示,治疗组阳性细胞染色率均低于退变组( P 0 0 1 ) 。T G F - - 8 1 免疫组化显示,治疗组阳性
3、细胞染色率高于退变组( P O 0 1 ) 。结论:烟酰胺能够抑制I L - - 1 6 诱发的椎 间盘I 、型胶原表达及含量的下降,这种保护机制与其抑制i N O S 、C a s p a s e - - 3 表达和维持T G F B 1 表达的作用有关。 关键词 椎间盘;烟酰胺;I 型胶原;型胶原;白细胞介素一1 8 中图分类号 R 一3 3R 6 8 1 5 + 3 文献标识码A 文章编号1 0 0 5 - - 0 2 0 5 ( 2 0 0 8 ) 0 6 0 0 2 1 0 5 R e g u l a t i o no fN i a c i n a m i d eo nI n t e
4、 r v e r t e b r a lD i s cT y p e Ia n d C o l l a g e ni nv i t r o X UW P i w e iS H A 0 Z e n g w u G U o B i n g Y A N GS h u h u Y UX u d o n gX I EM a oX1 0 N GL i m i n g D e p a r t m e n to fO r t h o p a e d i c s ,U n i o nH o s p i t a lA f f i l i a t e dt OT o n g j iM e d i c a lC o
5、l l e g e ,H u a z h o n gU n i v e r s i t yo fS c i e n c ea n d T e c h n o l o g y ,W u h a n4 3 0 0 2 2 ,C h i n a A b s t r a c tO b j e c t i v e :T os t u d yt h ee f f e c to fn i a e i n a m i d eo nt y p eIa n d c o l l a g e n si ni n t e r v e r t e h r a ld i s c ( I V D ) d e g e n e
6、r a t i o ni n d u c e db yi n t e r l e u k i n - - 1 6 ( I L 一1 6 ) i nv i t r oa n dt Oi n v e s t i g a t et h ep o s s i b l em e c h a n i s m M e t h o d s :C h i b a SI V Dc u l t u r e m o d e lw a sa d o p t e di nt h i ss t u d y I V D sf r o ma d u l tJ a p a n e s ew h i t er a b b i t
7、sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o6g r o u p s :n o r m a lc o n t r o l ,n i a c i n a m i d eg r o u p ( O 5 m g m ln i a c i n a m i d e ) ,d e g e n e r a t i o ng r o u p ( 1 0 n g m lI L 1J 3 ) a n dt r e a t m e n tg r o u p ( b o t hI L 一 1 Ba n d0 5 m g m l ,0 2 5 m g m l ,0 。0 5 m
8、 g m ln i a c i n a m i d e ,r e s p e c t i v e l y ) A f t e r3d a y sa n d1w e e ko fc u l t u r e ,t h eI V D sw e r e c o l l e c t e df o rt y p eIa n d c o l l a g e n sr e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( R T P C R ) T w ow e e k sl a t e r ,I V
9、 D s w e r ec o l l e c t e df o ri m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i n i n gf o rt y p eIa n dl Ic o l l a g e n s ,i n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e ( i N O S ) , t r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - - 1 3 1 ( T G F - - 1 3 1 ) a n dc a s p a s e 一3 R e s u
10、 l t s :R T P C Rs h o w e dt h a tt h ee x p r e s s i o n so fb o t h t y p eIa n d c o l l a g e n si nt r e a t m e n tg r o u pw e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a ti nd e g e n e r a t i o ng r o u pa n dt h ee f f e c tw a s s t r o n g e rw i t hd e n s e rd o s e so fn i
11、a c i n a m i d e I m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t a i n i n go ft y p eIa n d c o l l a g e n sd e m o n s t r a t e dt h a t t h es t r u c t u r eo fI V D sa n dc o n t e n t so fc o l l a g e n sw e r eb e t t e rr e v e r s e di nt r e a t m e n tg r o u pa sc o m p a r e dw i t ht h
12、o s ei nd e g e n e r a t i o ng r o u p P o s i t i v e s t a i n i n go fi N O Sa n dc a s p a s e - - 3i nt r e a t m e n tg r o u pW f l Ss i g n i f i c a n t l yl o w e rw h i l eT G F 一口1e v i d e n t l yh i g h e rt h a nt h o s ei nd e g e n e r a t i o ng r o u p ( P O 0 1 ) C o n c l u s
13、i o n :N i a c i n a m i d ec a ne f f e c t i v e l yi n h i b i tt h ed e c r e a s e de x p r e s s i o no ft y p eIa n d c o l l a g e n si nI V Di n d u c e db yI L 一1 口t h r o u g hs u p p r e s s i n gt h ee x p r e s s i o no fi N O Sa n dc a s p a s e - - 3 a n ds u s t a i n i n gt h ee x
14、p r e s s i o no fT G F 一8 1 K e yw o r d sI n t e r v e r t e b r a ld i s cd e g e n e r a t i o nN i a c i n a m i d e ;T y p eIC o l l a g e n ;T y p e c o l l a g e n ;I n t e r l e u k i n - - 1 1 3 胶原是椎间盘基质内的含量最大的蛋白质成分,椎间盘内 基金项目:湖北省自然科学基金资助项目( N o 2 0 0 4 A B A l 9 3 ) 1 华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科(
15、武汉,4 3 0 0 2 2 ) 通讯作者:熊蠡茗 的胶原主要包括I 型和犁胶原,其中髓核以型胶原为主 纤维环以I 型胶原为主。胶原成分质和量的下降是椎问盘退 变早期重要的生化事件,如何维持胶原成分的质和量是椎间盘 退变研究需要解决的重要问题。白细胞介素一1 ( I L 一1 ) 等炎 性因子参与椎间盘退变过程的始终,能够显著影响I 、型胶 万方数据 2 2 原的表达和含量。烟酰胺( N i a c i n a m i d e ) 是具有抗炎作用的维 生素,同时能够促进细胞能量代谢。此前我们报道了烟酰胺能 够明显提升正常及退变椎间盘内聚集蛋白聚糖的质和量1 ,本 研究中我们将进一步考察不同浓度
16、的烟酰胺对于兔椎间盘I 、 型胶原表达及含量的影响,同时考察诱导型一氧化氮合成酶 ( i N O S ) 、转化生长因子一p l ( T G F p 1 ) 、细胞凋亡蛋白酶 ( e a s p a s e - - 3 ) 的表达情况,以探讨烟酰胺的可能作用机制。 1 材料与方法 1 1 椎间盘组织体外培养 椎问盘组织取自1 3 只日本大白兔( 3 4 月龄,体重1 5 2 k g ,雌雄不限,华中科技大学同济医学院实验动物中心提供) 。 耳缘静脉空气注射处死动物后无菌条件下取出L 1 1 6 节段腰 椎,无菌操作台内完整剥离椎间盘( 共7 8 枚椎间盘) 。P B S 清 洗后采用前述方法-
17、 L 行藻酸盐凝胶内椎间盘组织培养。每孔 加入l m l 含2 0 胎牛血清( 三利公司) 的D M E M F 1 2 ( G i b i c o 公司) ( 内加2 5 p g m l 维生素C ,A m r e s c o 公司) ,置于3 7 ,5 C O :条件下培养。自培养当天起在各组培养基内加入不同量 的烟酰胺和I I 。一l 口( P e p r o t e c h 公司) 。每天换液一次。 1 2 标本分组 将椎间盘组织随机分为6 组。每组1 3 个:第一组为正常对 照组,不加入药物;第二组加入0 5 m g m l 烟酰胺作为烟酰胺对 照组;第三组加入1 0 n g m l
18、I L - - 1 B 作为退变组;第四至第六祖 为烟酰胺治疗组,第四组加入0 5 m g m l 烟酰胺和1 0 n g m lI L 一1 1 3 ;第五组加入0 2 5 m g m l 烟酰胺和1 0 n g m l1 I 。一1 B ;第六 组加入0 0 5 m g m l 烟酰胺和1 0 n g m lI L 一1 8 。培养3 天,1 周 时对各组标本行I 、型胶原基因R T P C R 检测,培养2 周时 行I 、型胶原,i N O S 、C a s p a s e - - 3 及T G F B 1 免疫组化检测。 1 3I 、型胶原R T P C R 标本取出后迅速置于一7 0
19、 冻存。检测时每一样本称取 3 0 r a g 纤维环组织,加入T r i z o l ( M o l e c u l a rR e s e a r c hC e n t e r 公 司) l m l ,研磨,按说明书提取总R N A 。取l 且g 总R N A ,采用 F e r m e n t a s 公司逆转录试剂盒,按其说明书进行m R N A 逆转 录。取2 “lc D N A 模板,加入2 0 p m o l 引物( 上海生工生物工程 公司合成) 配制成2 5 1 1 反应体系,在T a qD N A 聚合酶( M B I F e r m e n t a s ) 催化下分别进行I
20、、型胶原及8 一A c t i n 基因 P C R 。I 型胶原上、下游引物:5 一C C TG G CA T A A A GG G A C A C 一3 和5 一C T T C A G G A G T G A G G A G G G T 一3 ,解链 温度5 6 ,3 5 个循环,产物大小4 0 3 b p ( 根据G e n b a n k 序列号 D 4 9 3 9 9 自行设计) 。1 1 型胶原上、下游引物:5 一A C GC T C A A GT C CC T CA A CA 一3 和5 一T C TA T C C A GT A G T C A C C GC T CT 一3 ,解
21、链温度5 5 ,3 5 个循环,产物大小 1 3 1 b p ( 根据O e n b a n k 序列号D 8 3 2 2 8 自行设计) 。p A c t i n 上、 下游引物分别为:5 一T G CT T CT A GG C G G A CT G T T A 一3 和5 一C G TC A CA T G G C AT C T C A CG A 一3 。,解链温度 5 1 ,3 5 个循环,产物大小3 1 4 b p “。P C R 产物( 每5 u l 产物加 入s y b g r e e n1 “1 ) 经2 琼脂糖凝胶电泳,结果由H M l A S 一2 0 0 0 分析仪照相后测算
22、条带积分吸光度,以目的基因与口一A e t i n 条 带吸光度的比值r 作为基因相对表达量。 1 4 椎间盘组织免疫组化 4 甲醛溶液固定标本,常规石腊包埋,制作6 b t m 厚切片, 脱蜡至水,热抗原修复。1 :8 0 稀释的兔抗人I 、型胶原、i N O S 、T G F - 8 1 、C a s p a s e - - 3 多克隆抗体( 博士德公司) 3 7 孵育 3 0 m i n ,采用羊抗兔免疫组化S P 试剂盒( 中杉公司) ,根据其说 明书要求加入二抗等直至苏木素复染,树胶封片。H M I A S 一 2 0 0 0 分析仪照相,每张切片随机观察1 0 个视野。对I 、型胶
23、 原染色作相对光密度分析,计算i N O S 、T G F 一8 l 和C a s p a s e - - 3 染色阳性细胞率( 阳性细胞率一阳性细胞总数细胞总数 1 0 0 ) 。 1 5 统计学分析 I 、型胶原R T P C R 结果作组间独立样本t 检验。对 I 、型胶原染色结果作吸光度分析,结果用j 土s 表示。对 i N O S 、C a s p a s e - - 3 及T G F B 1 染色结果计算各组阳性、阴性 细胞数总和,然后行卡方检验。所有数据采用s p s s l 2 0 软件分 析。 2 结果 2 1 I 、型胶原R T P C R ( 见表1 ) 退变组I 、型胶
24、原表达量与同期同部位正常对照组相比 均显示出较为明显的抑制。而烟酰胺治疗组I 、型胶原表达 较同期同部位退变组相比均有提高,并且随着剂量的加大I 、 型胶原表达增高,甚至略高于正常组。I 型胶原在纤维环内 表达较活跃,随着时间的延长I 型胶原合成轻微减少。型胶 原在髓核内表达较活跃,随着时间的延长型胶原合成明显减 少( 图1 ) 。 表1各组椎问盘I 、型胶原R T P C R 相对表达量( 孑S ) 正常对照组 烟酰胺对照组 退变组 0 5 m g m l 治疗组 0 2 5 m g m l 治疗组 0 0 5 m g m l 治疗组 0 5 4 土0 0 91 0 9 0 1 31 4 6
25、 0 1 70 6 4 0 2 00 5 9 0 1 00 7 6 0 1 31 3 9 0 1 50 4 4 0 1 1 0 6 0 0 1 11 1 8 士0 1 11 5 l 0 1 60 7 1 士0 1 50 5 5 0 1 00 8 0 0 2 01 3 5 0 1 20 5 2 0 1 2 0 2 9 0 1 3 0 4 4 士0 2 3 0 8 0 - - 4 - 0 1 5 0 3 7 - 4 - 0 1 0 0 3 1 士0 1 1 0 3 2 0 2 4 e0 8 7 4 - 0 2 4 e0 1 9 士0 1 3 0 5 4 士0 0 9 A 1 1 4 士0 2 8
26、A1 - 4 7 士0 1 5 A0 6 8 0 1 8 A0 5 6 士0 1 5 A0 6 2 0 1 7 A1 4 0 0 2 4 0 4 3 0 1 5 A 0 3 9 0 1 41 0 0 士0 2 l 1 0 8 0 2 4 0 5 4 士0 1 0 A0 2 5 0 1 3 0 5 8 0 1 8 1 1 3 0 3 00 3 9 0 1 0 0 3 6 0 1 10 9 2 0 1 5 1 0 0 0 1 6 A0 4 4 0 1 40 2 5 0 1 40 4 7 0 1 60 9 7 0 2 80 3 6 0 16 注:同期同部位退变组与正常对照组比较P O 0 5 ;同期
27、同部位3 个烟酰胺治疗组与退变组比较P O 0 5 万方数据 图1 1 各组核、纤维环I 、 型胶原R T P C R 田1 2各组核、纤维环 I 、型胶原R T P C R 2 2 I 、型胶原免疫组化 正常对照组及烟酰胺对照组纤维环结构完整,I 、型胶 原沿板层状结构分布,排列清晰有序,可见较多软骨样细胞,细 胞核形态浑圆饱满;髓核陷窝样结构饱满,胶原纤维分布均匀。 退变组纤维环板层状结构不清晰,I 、型胶原纹路均紊乱,髓 核陷窝样结构变小且不规则,胶原分布欠均匀。烟酰胺治疗组 与退变组相比纤维环板层结构保留较好,胶原纹路连续,髓核 陷窝样结构保留较好( 图2 ) 。各组I 、型胶原光密度
28、详见表 2 。 2 3i N O S 免疫组化 各组椎间盘阳性细胞率分别为1 8 7 ,1 3 5 ,6 0 7 , 2 1 7 ,2 8 7 和3 3 6 。第一、二组纤维环内仅有少量i N O S 阳性染色细胞。两者无明显差异( X 2 = 1 4 8 1 ,P 一0 2 2 4 ) ,而第 三组阳性染色率较第一组明显升高( X 2 = 5 4 5 6 9 ,P = 0 0 0 0 ) ( 图3 1 ) 。各剂量治疗组阳性染色率较退变组均明显下降( X 2 = 4 5 1 9 ,P 一0 0 0 0 ;X 2 = 2 8 1 9 1 ,P = 0 0 0 0 ;X 2 = 1 9 7 3
29、2 ,P = 0 0 0 0 ) ( 图3 2 ) 。 表2 各组椎问盘I 、型胶原光密度值( i - I - 5 ) 注:烟酰胺对照组、退变组与正常对照组比较P 0 0 5 ;3 组烟 酰胺治疗组与退变组比较P 0 0 5 2 4T G F 一8 1 免疫组化 各组阳性细胞率分别为8 0 8 ,8 4 5 ,2 5 2 ,6 8 6 , 6 8 4 和6 1 2 。第一、二组多数细胞染色为阳性,两者无明 显差别( X 2 = 0 5 4 7 ,P = 0 4 5 9 ) 。丽第三组阳性染色率较第一 组明显下降( X 2 = 7 6 5 4 7 ,P = 0 0 0 0 ) ( 图4 1 )
30、。各剂量治疗 组阳性染色率均显著高于第三组( X 2 = 4 6 4 6 5 ,P 2 0 0 0 0 ;X 2 = 4 5 2 3 9 ,P 一0 0 0 0 ;y 2 3 2 1 9 2 ,P = 0 0 0 0 ) ( 图4 2 ) 。 2 5C a s p a s e - - 3 免疫组化 图1 3 各组髓核、纤维环I 、 型胶原R T P C R 2 3 图1 4各组核、纤维环 I 、型胶原R T P C R 各组阳性细胞率分别为6 5 ,5 1 ,2 8 2 ,1 2 3 ,1 2 7 和1 6 8 。第一组及第二组椎间盘仅有少量阳性染色细 胞,两者无明显差别( X 2 = 0 2
31、 2 l ,P 一0 6 3 8 ) 。第三组阳性染色 率达2 8 2 ,较第一组有显著性差异( X 2 = 2 1 4 5 9 ,P = 0 0 0 0 ) ( 图5 1 ) 。各剂量治疗组阳性染色率较第三组均下降,但仅第 四、五组较第三组有显著性差异( X 2 8 4 3 2 ,P = 0 0 0 4 ;X 2 7 6 6 8 ,P = 0 0 0 6 ) ,小剂量治疗组阳性染色率较退变组虽有所 下降,但并无统计学意义( X 2 3 7 1 ,P 一0 0 5 4 ) ( 图5 2 ) 。 3 讨论 椎间盘退变的进程复杂而漫长,一般认为力学因素等外界 因素首先干扰椎间盘细胞的生物学行为,进
32、而引发蛋白聚糖、 胶原等基质成分的品质下降,最终使椎间盘进入难以自行逆转 的退变。炎性因子的作用贯穿这个过程的始终,它们一方面通 过调节基质的合成效率和蛋白酶的活动来影响基质质量,进而 影响细胞的生存环境;另一方面通过细胞因子网络直接干扰细 胞的生长、分化以及凋亡 3 - 5 。如I L 一1 B 不仅可以直接启动凋 亡的胞内过程,还能够使N 0 、T N F ( 肿瘤坏死因子) 等炎性因子 的分泌显著增加,导致椎间盘内合成代谢和分解代谢失衡,引 起基质成分质、量的下降 6 。N 0 在椎间盘退变中扮演着重要 角色:i N O S 引起的N O 含量上升是压力诱发椎间盘退变的首 要机制,N 0
33、 还可以直接抑制蛋白聚糖和型胶原的合成,加剧 a g g r e c a n a s e ( 聚集蛋白聚糖酶) 和M M P s ( 基质金属蛋白酶) 对 胶原和蛋白聚糖的酶解 7 。因此,本研究选用I L 一1 B 来诱发实 验性椎间盘退变。 I 、型胶原是椎问盘组织较有特征性的基质成分,其合 成与降解情况可以反映出细胞和基质的状态 8 。本研究显示, 烟酰胺可以有效减轻I L - - 1 1 3 对I 、型胶原表达的抑制。同时 免疫组化显示烟酰胺对I L - - 1 6 诱导的板层状结构破坏有抑制 作用,从侧面反映胶原的降解也受到了抑制。烟酰胺可以较好 地抵消I L 一1 B 对I 、型胶
34、原表达的抑制,但并不能使胶原的 含量维持在正常水平。这可能是因为I L 一1 8 能够通过多种途 径。尤其是增强酶解的作用,对胶原进行调节。 烟酰胺是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸即辅酶I 的前体,在多个 组织均表现出强大的抗炎作用。,其抗炎机制可能源于其对I L 一1 等炎性因子诱导的P A R P ( 多A D P 核糖聚合酶) 活性的抑 制。P A R P 受抑可以有效降低i N O S 基因的表达,显著减少N O 的合成 9 1 。本研究中我们发现,退变组i N O S 阳性细胞比例 万方数据 2 4 图2 1椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 退变组纤维环I 型胶原染色 圈2 4椎间盘I
35、、型胶原免疫组 化2 0 0 烟酰胺治疗组髓核I 型胶原 染色 图2 7椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 退变组髓核型胶原染色 圈3 2退变组及治疗组纤维环i N O S 免疫组化染色2 0 0 烟酰胺0 5 m g m l 治疗组阳性染色细胞数较退 变组明显减少。阳性染色率为2 1 7 。 C h i n e s eJT r a dM e dT r a u m & O r t h o p , J u n2 0 0 8 , V o l1 6 , N o6 图2 2椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 烟酰胺治疗组纤维环I 型胶 原染色 图2 5椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 退
36、变组纤维环型胶原染色 图2 8椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 烟酰胺治疗组髓核型胶原 染色 圈4 1 退变组及治疗组纤维环T G F - 1 3 1 免疫组化染色2 0 0 退变组椎间 盘内阳性染色细胞较少,阳性染色率 2 5 2 。 图2 3椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 退变组髓核I 型胶原染色 图2 6椎间盘I 、型胶原免疫组 化2 0 0 烟酰胺治疗组纤维环型胶 原染色 图3 1退变组及治疗组纤维环i N O S 免疫组化染色2 0 0 退变组椎间 盘内多数细胞出现阳性染色。阳性染色 率为6 0 7 。 图4 2 退变组及治疗组纤维环T G F B 1 免疫组化染色2
37、0 0 烟酰胺0 5 m g m l 治疗组阳性染色细胞数较退 变组明显增多阳性染色率为6 8 6 。 万方数据 图5 1 退变组及治疗组纤维环C a s p a s e 一3 免疫组化染色2 0 0 退变组椎问盘内阳性染色细胞较多。阳性染色率2 8 2 。 图5 2 退变组及治疗组纤维环C a s p a s e 一3 免疫组化染色 2 0 0 烟酰胺0 5 m g m l 治疗组阳性染色细胞数较退变组有所 减少,阳性染色率为1 2 3 。 约为正常对照组的4 倍,表明I L - - 1 B 对i N O S 具有很强的诱导 作用。而大剂量治疗组阳性细胞率则降至退变组的约1 3 ,与 正常组
38、较为接近。与此同时,我们发现烟酰胺对于椎问盘细胞 T G F - - B 1 的表达表现出较好的保护作用,0 5 m g m l 组阳性细 胞率约为退变组的3 倍。我们此前报道:T G F B 1 在退变椎间 盘内表达下降,而通过提高T G F B 1 含量,则可以改善甚至阻 逆椎间盘退变口。烟酰胺对椎间盘胶原的保护作用可能同时 源于其对i N O S 的抑制作用及对T G F p 1 的保护作用。 凋亡引发的细胞数量下降会直接导致胶原等基质成分合 成不足,是椎问盘退变难以逆转的重要原因。C a s p a s e 是一类 半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶,目前已发现1 4 种,分别参与细 胞凋亡的
39、启动和执行过程,C a s p a s e - - 3 是效应阶段的重要执行 者Dz , 1 3 。本研究中治疗组阳性细胞率较退变组明显下降,表明 烟酰胺对I L - - 1 8 诱导的细胞凋亡具有一定的抑制作用。但烟 酰胺并不能使阳性细胞率降至正常组水平,这可能是因为I L 一 1 8 具有启动多种凋亡途径的能力。 本研究发现,烟酰胺对椎间盘I 、型胶原有良好的保护 2 5 作用,这种作用与其对i N O S 、C a s p a s e - - 3 的抑制及对T G F p 1 的保护作用有关。细胞外基质质量下降,细胞凋亡和炎性因 子分泌增加是椎间盘退变的三个重要机制。本研究中烟酰胺 对这
40、三种机制均表现出的一定抑制作用,结合我们此前的报 道 1 ,可以认为烟酰胺具备进一步开发成为椎间盘退变防治药 物的潜力。目前临床上缺乏高效、毒副作用少、价格低廉且可 长期应用的椎间盘退变防治药物。作为临床应用多年的维生 素类药物,烟酰胺具有安全可靠且价格低廉的优势。对烟酰胺 作进一步实验研究,将有助于我们尽早将其应用于椎间盘退变 的临床治疗,有助于开拓椎问盘退变研究的新思路。 参考文献 E 1 熊晓芊。杨述华,邵增务,等烟酰胺对椎间盘聚集蛋白聚糖的调 控作用 J 中国中医骨伤科杂志,2 0 0 5 ,1 3 ( 5 ) :1 4 2 B E R G L U N DM ,W I I GM ,T
41、O R S T E N S S O NM ,e ta 1 A s s e s s m e n to fm R N Al e v e l s f o rm a t r i xm o l e c u l e sa n dT G F b e t a li n r a b b i t f l e x o ra n dp e r o n e u st e n d o n sr e v e a l sr e g i o n a ld i f f e r e n c e si n s t e a d y - - s t a t ee x p r e s s i o n J JH a n dS u r g ,
42、2 0 0 4 ,2 9 ( 2 ) :1 6 5 1 6 9 3 3 熊晓芊,邵增务,杨述华聚集蛋白聚糖与椎问盘退变的研究进 展 J 中国脊柱脊髓杂志,2 0 0 5 ,1 5 ( 1 ) :5 4 5 6 E 4 3W E I L E RC 。N E R L I C HAG B A C H M E I E RBE ,e ta 1 E x p r e s s i o na n dd i s t r i b u t i o no ft u m o rn e c r o s i sf a c t o ra l p h ai nh u m a nl u r e b a ri n t e r v e
43、 r t e b r a ld i s c s :as t u d yi ns u r g i c a ls p e c i m e na n da u t o p s y c o n t r o l s F J 3 S p i n e ,2 0 0 5 ,3 0 ( 1 ) :4 4 5 3 5 3P O D I C H E T T YVK T h ea g i n gs p i n e ;t h er o l e o fi n f l a m m a t o r y m e d i a t o r si ni n t e r v e r t e b r a ld i s cd e g e
44、n e f a t i o n J C e l lM o lB i o l , 2 0 0 7 ,5 3 ( 5 ) :4 1 8 E 6 3 L EM A I T R ECL ,F R E E M O N TAJ ,H O Y L O N DJA T h er o l e o fi n t e r l e u k i n - 1i nt h ep a t h o g e n e s i so fh u m a ni n t e r v e r t e b r a ld i s c d e g e n e r a t i o n J A r t h r i t i sR e s e a r c
45、 hT h e r a p y ,2 0 0 5 ,7 ( 4 ) :7 3 2 4 5 7 3S H E NB ,M E L R O S EJ ,G H O S HP e ta 1 I n d u c t i o no fm a t r i x m e t a l l o p r o t e i n a s e - - 2a n d 3a c t i v i t yi no v i n en u c l e u sp u l p o s u s c e l l sg r o w ni nt h r e e d i m e n s i o n a la g a r o s eg e lc u
46、l t u r eb yi n t e r l e u k i n l b e t a :ap o t e n t i a lp a t h w a yo fd i s cd e g e n e r a t i o nl - J E u r S p i n eJ ,2 0 0 3 ,1 2 ( 1 ) :6 6 7 5 E 8 L EM A I T R ECL ,P O C K E R TA ,B U T T L ED J ,e ta 1 M a t r i x s y n t h e s i sa n dd e g r a d a t i o ni nh u m a ni n t e r v
47、 e r t e b r a ld i s cd e g e n e r a t i o n - J B i o c h e mS o cT r a n s ,2 0 0 7 ,3 5 ( P t4 ) :6 5 2 5 9 N A M A Z IMR N i c o t i n a m i d e :ap o t e n t i a la d d i t i o nt ot h ea n t i p s o r i a t i cw e a p o n r y , J F A S E BJ 2 0 0 3 ,1 7 ( 1 1 ) :1 3 7 7 1 3 7 9 1 0 3S UCF ,L I UDD ,K A OSJ 。e ta 1 N i c o t i n a m i d ea b r o g a t e sa c u t el u n gi n j u r yc a u s e db yi s c h a e m i a r e p e r f u s i o n J E u rR e s p i r J ,2 0 0 7 。3 0 ( 2 ) :1 9 9 2 0 4 E p u b2 0 0 7M a y1 5 1 1 3Z H A NZ
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