单底物一步法测定血清脂肪酶及其临床应用.pdf
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1、文章编号: 10012087(2001)03016402 单底物一步法测定血清脂肪酶及其临床应用 沈 瑛1,宋耀虹1,刘 斌2,黄辉明2,吴菊芳3 (1 1 北京协和医院,北京100730;21 友谊医院;31 潞和医院) 摘要:目的 介绍一种脂肪酶(L ipase,L PS)测定的新方法,并探索其临床应用。方法 采用一个大分子有机物 作单底物的一步速率法。结果 该法零级反应长达15 m in以上,线性范围01 500 U?L ,CV 118%718%之间。 与比浊法相比r= 01998。临床观察38例急性胰腺炎,同时测定胰淀粉酶,二酶呈高度相关。结论 本法简单、 准确、 稳定、 可与淀粉酶一
2、起用作急腹症的常规测定。 关键词:脂肪酶;急性胰腺炎;酶法测定 中图分类号: Q 556 文献标识码: A 血清脂肪酶(L ipase,L PS)为急性胰腺炎的重 要诊断指标,由于它的组织来源比 2淀粉酶少,故 诊断的特异性优于淀粉酶。L PS的测定方法有滴定 法,比浊法,荧光光度法和免疫法等。1986年以来 Beckman公司推出四酶偶联法,近又见报道五酶偶 联法1。 这些方法在实际应用中都还存在一些问题, 以致它的测定未能普及。我们介绍一种新方法即单 底物一步速率比色法,并对其性能作初步评价。 材 料 和 方 法 一、反应原理 采用一个人工合成的大分子有 机物1, 22二月桂基2rac2丙
3、三氧基232戊二酸试灵酯 为底物。该底物在碱性环境中, L PS和共脂肪酶 (Colipase)作用生成1, 22o2二月桂基甘油和戊二酸 基26 甲基试卤灵。后者不稳定,在碱性条件下自发 生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵是一个显色 团,在波长581 nm处有吸收峰,其581 nm= 57194 mmol . cm(T ris2HCl pH 712),因此可通过测定颜色 生成的速率定量测定L PS的活性。 单位定义:在本实验条件下每m in转化1mol 底物的酶量为1个单位。 二、仪器 日立705,Beckman CX7,德国宝灵 曼公司Reflotron反射光度计(干片法)。 三、试剂 1
4、1 胰淀粉酶干片试纸条(德国宝灵 曼公司生产,参考值为 135 U?L)。21L PS测定试剂 盒,德国Centronic公司生产,北京天象人公司提供。 试剂? 缓冲液T ris2HCl pH7125010 mmol?L 脱氧牛磺胆酸 610 mmol?L 试剂 底物(乳剂) 012 mmol?L 共脂肪酶 500 kU?L 校正液 人胰淀粉酶 572 U?L 四、方法 Beckman CX7参数,采用同时双试 剂加样。反应类型带标准Rate,主次波长570?700 nm ,温度37,样本量10 l, 试剂? 为200 l, 试剂 为20 l, 加试剂? 开始后3046s读试剂空白。 第320
5、秒加入样品后于第384秒开始到第488秒读 数,仪器会自动读出 A?m in。 结 果 一、精密度试验 批内重复性,取高低水平脂 肪酶,重复测定20次,低值CV为1183% ,高值CV 为1169%。 批间重复性,取高低水平L PS,分别在10 d共测定20次,低值CV为7184% ,高值CV为 4185%。 二、线性试验 选取高值血清做线性试验,结 果表明,L PS活性在1 500 U?L范围内呈线性。 三、对照试验 与Centronic公司生产的比浊 法试剂盒作对比,选活性在0900 U?L之间样本 56份,用二法测定,结果经统计学处理得回归方程 为: Y(酶 )= 0 19963X(浊)
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- 单底物 一步法 测定 血清 脂肪酶 及其 临床 应用
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