大鼠中缝核群星形胶质细胞对睡眠剥夺的反应及其与神经元的关系.pdf
《大鼠中缝核群星形胶质细胞对睡眠剥夺的反应及其与神经元的关系.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《大鼠中缝核群星形胶质细胞对睡眠剥夺的反应及其与神经元的关系.pdf(4页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、壁壁遁盘查趔! 笙旦箜! 鲞笙! 塑堕也塑堡! 塑i 鱼塑趔鱼! 塑! 型塑! ! :2 丛! : 大鼠中缝核群星形胶质细胞对睡眠剥夺的 反应及其与神经元的关系 王晓东,王凯,宿长军,饶志仁 作者单位:1 0 0 0 1 7 北京,解放军3 0 5 医院内四科( 王晓东、王凯) ;7 1 0 0 3 8 西安,第四军医大学唐鄙医院神经内科( 宿长军) ;第四军医 大学神经科学研究所( 饶志仁) 通讯作者:王晓东,E - m a i l :d a x i o n 9 7 5 g n m i l t o m 【摘要】目的探索大鼠脑干中缝核群星形胶质细胞对睡眠剥夺( s D ) 的反应及其与神经元的
2、关 系。方法采用小平台水环境法建立大鼠S D 模型,分为睡眠剥夺1 2h ( S D ) 组,睡眠剥夺1 2h 恢复睡眠 3h ( S R ) 组及大平台对照( 1 ) 组和正常单独饲养( c c ) 组,每组3 只。用免疫组化的方法观察c 胁和胶原 纤维酸性蛋白( G F A P ) 在脑干中缝核群的表达,及其与5 。羟色胺( 5 H T ) 阳性神经元的关系。结果G F A P 在中缝核群尤其是中缝背核表达明显增多,睡眠恢复后表达明显减少,其变化趋势及部位与c 胁基因 表达相一致。在中缝背核形成3 种形式的复合体样结构:( 1 ) c f o s ( + ) 、5 一H r ( + ) 、
3、G F A P ( + ) ;( 2 ) 5 H T ( + ) 、G F A P ( + ) 、c f o s ( 一) ;( 3 ) 5 t i T ( 一) 、G F A P ( + ) 、c f o s ( + ) 。结论G F A P 对睡眠剥夺和恢复睡眠的 影响反应敏感,与神经元反应趋势一致,提示星形胶质细胞和神经元可能共同参与睡眠调节。 【关键词】c 蛋白;胶原纤维酸性蛋白;免疫组织化学;睡眠剥夺;大鼠 【中图分类号】R3 3 8 6 3 【文献标识码】A 【文章编号】1 6 7 1 6 4 5 0 ( 2 0 0 8 ) 0 6 0 3 4 4 0 3 R e s p o n
4、s eo ft h er a t sa s t r o e y t ei nr a p h en u c l e u st os l e e pd e p d v a f i o na n di t sr e l a t i o n s h i p 谢t l ln e u r o l 毽 W A N G X i a o - d o n g ,W A N GK a i ,S UC 地咖,e t0 1 D e p a r t m e n to f N e u r o l o g y ,3 0 5H o s p i t a lo f P L A ,B e i j i n g 1 0 0 0 1 7
5、, C h i n a 【A b s t r a c t 】O b j e c t i v e T oi n v e s t i g a t et h er e s p o n s eo fa s t r o c y t ei nr a p h en u c l e u st os l e e pd e p r i v a t i o n ,a sw e l l 幽i t sr e l a t i o n s h i pw i t hn e u r o n s M e t h o d sT w og r o u po fS p r a g u eD a w l e yr a t sw e r
6、es l e e pd e p r i v e db yh o u s i n gt h e mo n t h es m a l lp l a t f o r m so v e rw a t e rf o r1 2 h A f t e rt h a to n eg r o u pc a ns l e e p3 h C o n t r o lg r o u pw e r eh o u s e di nt h en o r m a le a g e o ro nt h el a r g ep l a t f o r mo v e rw a t e r T h ee x p r e s s i o
7、no fc - l o s 、G F A Pa n d5 - H Tp o s i t i v er e a c t i o ni nt h er a p h en u c l e u s w e r es t u d i e dw i t ht r i p l em e t h o dc o m b i n i n ga n t iG F A P c f e sa n d5 一H Ti m m u n o c y t o c h e m i s t r ys t a i n i n g R e s u l t s S l e e p d e p r i v a t i o nr e s u
8、l t e di na ni n c r e a s i n ge x p r e s s i o no fc f o sa n dG F A Pp o s i t i v es t a i n i n g i nt h er a p h en u c l e u s T h em a i n f i e l dw e r ed o r s a lr a p h en u c l e u s A f t e rs l e e pr e c o v e r y ,t h ee x p r e s s i o no fc - f u sa n dG F A Pp o s i t i v e s t
9、 a i n i n gd e c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y T h ec h a n g eo fG F A Pp o s i t i v ea s t r o c y t ei ss i m i l a rt oc f o sp o s i t i v en e u r o u s M a n yo fc f o sa n d5 一H Ts i n g l e l a b e l e dn e u r o n s o rc f o sa n d5 一H Td o u b l el a b e l e dn e l n m n 8i nt h
10、 ed o r s a lr a p h en u c l e u ss u r r o u n d e db yG F A Pp o s i t i v e p r o c e s s e sw e r ef o u n da n df o r m e dt h r e ek i n d so fc o m p l e x - l i k es t r u e t u n C o n c l u s i o n I t si n d i c a t e dt h a ta s t r e c y t ei s s e n s i t i v et os l e e pd e p r i v
11、a t i o na n ds l e e pr e c o v e r y I ts u g g e s t e dt h a ta s t r o c y t e sa n dn e u F o n $ m i g h tb ei n v o l v e di nt h er e g u l a f i o no fs l e e pt o g e t h e r 【K e yw o r d s 】c f o sp r o t e i n ;G F A P ;I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ;S l e e pd e p r i v a t
12、i o n ;R a t s 睡眠剥夺( s l e e pd e p r i v a t i o n ,S D ) 是指由各种原因 引起的睡眠丢失状态,并引起情绪、学习记忆、免疫 功能等一系列改变。S D 作为一种有效的研究睡眠 机制的手段,而被国内外学者采用。近年来研究发 现神经元与星形胶质细胞( a s t r o c y t e ,A S ) 之间具有双 向信息交流,彼此相互作用。A S 是神经胶质细胞 中数量最多的一种,在脑中分布广泛。目前已知胶 原纤维酸性蛋白( g l i a lf i b r i l l a r ya c i d i cp r o t e i n ,G F A
13、P ) 是成年机体内的一种特异性骨架蛋白,可以对各种 刺激发生反应,表现为G F A P 表达上调和下调,证实 A S 参与睡眠调节【2 “J 。本研究通过S D 及S D 后恢 复睡眠,c l o s 、G F A P 和5 H T 三重标记的方法观察中 万方数据 墅蕉题苤查! 堂芏鱼旦筮2 鲞笙塑坐逝! 趔剑垒:咝2 蛸! 堕:! : 缝核群G F A P 表达的变化及其与神经元的关系,以 探讨星形胶质细胞与神经元在睡眠中的作用。 1 材料与方法 1 1 动物及分组 成年雄性健康上海产S p r a g u e D a w l e y 大鼠1 2 只,体质量( 2 0 0 1 0 ) g
14、,由第四军医 大学实验动物中心提供。采用随机数字表法,每只 大鼠分配2 位随机数,从小到大排序,每3 只1 组, 对应分配到s D 组、睡眠恢复( s l e e pr e c o v e r y ,S R ) 组、 大平台实验对照( t a n kc o n t r o l ,T C ) 组和正常单独饲 养( n o r m a lc a g e ,c c ) 组。s D 组、s R 组和T C 组实验自 7 :0 0 开始到1 9 :0 0 ,其中S R 组在睡眠剥夺1 2h 后放 入笼中恢复睡眠3h 。C C 组单独饲养于笼中,同时 进行实验。 1 2S D 模型的建立采用小平台水环境法
15、( f l o w e r p o t ) 5 建立大鼠S D 模型,制作3 0 0c m 3 0 0c m 3 0 0c m 的鼠箱,其中有一直径为6 5c m ,高8 0c m 的平台,在平台周边注满水,水温保持在2 0 左右, 水面距平台面约1 0c m 。鼠在平台上可自行饮食饮 水,但是大鼠无法入睡,一旦入睡就会掉入水中。 S D 组和S R 组采用此模型。在大鼠活动空问内持续 4 0W 目光灯照射( 8 :0 0 2 0 :0 0 ) ,室内温度控制在 1 8 。2 2 。实验前,让鼠熟悉适应环境1 周。大平 台模型中问平台直径1 6c m ,其余条件同上。T C 组 大鼠除了可以自
16、行饮食饮水也可以自然睡眠。T C 组主要为了排除睡眠剥夺以外环境因素对大鼠的影 响。C C 组单独饲养于笼中,其余条件同上,作为自 然对照。 1 3 脑组织标本采集所有组大鼠实验后立即腹 腔注射戊巴比妥钠( 5 0m g k g ) 麻醉,开胸经升主动 脉灌注生理盐水1 0 0m l ,以快速冲洗全身组织血液, 随后灌注4 多聚甲醛( 4 ,0 1m o l L ,P B S 配制, p H7 4 ) 5 0 0m l ,先快后慢,灌流1 5h 以上,注毕取 全脑置于2 0 蔗糖磷酸缓冲液( p H7 4 ,4 ) 中,放 置1 2 。2 4h 至组织块沉底。用冰冻切片机做连续 冠状冰冻切片,
17、片厚3 0l a n ,隔5 取1 ,切片收集于 0 0 1m o l LP B S ( p H7 4 ) 中。 1 4 免疫组织化学染色( A B C 法)切片先置入含 3g LT r i t o nX 一1 0 0 的P B S 液浸泡3 0m i n ( 室温) 。切 片分为3 组。第一组抗c 一免疫组化反应:( 1 ) 人 兔抗c f o s 抗体稀释液( 1 :30 0 0S a n t aC r u z ) ,孵育4 8 h ( 4 ) ;( 2 ) 生物素标记的羊抗兔I g G ( 1 :5 0 0S i g m a ) ,孵育2h ( 室温) ;( 3 ) 生物素一卵白素一H
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 大鼠 中缝 群星 胶质 细胞 睡眠 剥夺 反应 及其 神经元 关系
链接地址:https://www.31doc.com/p-3714077.html