抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其特性鉴定.pdf
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1、论著文章编号: 1007 -8738 (2006) 02 -0221 -02 抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其特性鉴定 唐 旭,于 辉,金晓航,吕葆真,黄威权*(第四军医大学基础部组织学与胚胎学教研室,陕西 西安 710032 = ) 收稿日期: 2005 -03 -09; 修回日期: 2005 -05 -30 作者简介:唐 旭 (1970 - ) ,男,四川广元人,硕士生. *Corresponding author,Tel: (029) 84774512 摘 要 目的:制备抗豚鼠气单胞菌 (Aeromonas caviae) 单 克隆抗体 (mAb) 并进行鉴定。方法:用灭活
2、的豚鼠气单胞菌 全菌免疫 BALB/ c 小鼠,采用杂交瘤技术制备 mAb。用间接 ELISA 法对 mAb 的效价及其与其他细菌的交叉反应性进行鉴 定;用免疫组化染色法对 mAb 的免疫反应性进行鉴定。结 果:获得 7 株能稳定分泌抗豚鼠气单胞菌 mAb 的杂交瘤细胞 株,分别命名为 0E10、1A2、1C4、1F1、1F10、1H8 和 2A1。 经测定杂交瘤细胞培养上清及腹水 mAb 的效价,分别为10 -1 10 -2 和 10 -3 10 -5。mAb 的 Ig 亚类鉴定表明,1F1 为 IgG1,1C4、 1F10 和1H8 为 IgG2a, 2A1 为 IgG2b, 0E10 和
3、1A2 为 IgG3。交叉反应试验显示,各株 mAb 均具有较好的特异 性。免疫组化染色结果表明,mAb 能和豚鼠气单胞菌特异性 结合。结论:成功地制备分泌抗豚鼠气单胞菌 mAb 的杂交瘤 细胞株,为该菌的快速检测及免疫学研究奠定了基础。 关键词 豚鼠气单胞菌;单克隆抗体;杂交瘤 中图分类号 R392. 11 文献标识码 B 豚鼠气单胞菌是我国养殖淡水鱼类及海产品中 最常见的致病性弧菌之一 1 -3,也是我国沿海地区 人群中最常见的致病性弧菌 4。随着研究的深入, 其病原学意义日益受到重视。但抗豚鼠气单胞菌的 单克隆抗体 (mAb) 及多克隆抗体 (pAb) 的制备,在 国内外均未见报道。为此
4、,我们制备了抗豚鼠气单 胞菌的 mAb 及 pAb,并重点对 mAb 的特性进行了鉴 定,为建立该菌的快速检测方法及免疫学研究提供 了条件。 1 材料和方法 1. 1 材料 实验所用豚鼠气单胞菌、温和气单胞菌及嗜水气 单胞菌标准菌株,均由福建省淡水水产研究所提供。溶藻弧 菌、创伤弧菌、爱德华菌及鳗弧菌标准菌株,均购自北京生 物制品研究所。以上各菌均由第四军医大学附属西京医院检 验科全自动细菌生化鉴定仪鉴定证实。小鼠骨髓瘤细胞 Sp2/ 0,系第四军医大学细胞生物学教研室惠赠。HRP 标记的羊 抗鼠 IgG 抗体购自华美生物工程公司。系列兔抗鼠 Ig 亚类抗 体购自北京邦定生物医学公司。生物素化
5、的抗鼠 IgG 抗体及 SABC 复合物系 Vector 公司产品。 1. 2 方法 1.2. 1 兔抗豚鼠气单胞菌 pAb 的制备 将豚鼠气单胞菌扩 增,用100 mL/ L 福尔马林固定24 h 灭活,以无菌生理盐水洗 涤两次后混悬,用血球计数板计数后置 4冰箱保存。使用 前,将灭活的豚鼠气单胞菌菌液中的菌体,用无菌生理盐水 调整为 1 1012个/ L,按总量 0. 5 mL 分别以皮下、肌肉多点 注射免疫体质量为 2 kg 的雄性新西兰纯种兔,以后每隔 15 d 免疫 1 次。第 4 次免疫后取血,用间接 ELISA 法检测抗豚鼠 气单胞菌抗体的效价,然后颈动脉插管取血,以 3 000
6、 r/ min 离心 20 min,取上清置 -20冰箱保存备用。 1. 2. 2 抗豚鼠气单胞菌 mAb 的制备 将灭活的豚鼠气单胞 菌菌液中的菌体用无菌生理盐水调整为 1 1011个/ L,以每只 0. 5 mL 经腹腔注射免疫 8 周龄的雌性 BALB/ c 小鼠。初次免 疫后 7、 14、28 d,同法分别追加免疫 1 次,经检测血清效价 后第 31 天融合。常规方法制备抗豚鼠气单胞菌 mAb 杂交瘤 细胞株。 1. 2. 3 mAb 的特性鉴定 mAb 的效价测定、Ig 亚类的鉴定 及特异性鉴定,均采用间接 ELISA 法。mAb 与豚鼠气单胞菌 的反应性,采用免疫组化染色法。将豚鼠
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- 豚鼠 气单胞菌 单克隆抗体 杂交瘤 细胞株 建立 及其 特性 鉴定
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