油菜蜂花粉对正常小鼠免疫功能的影响.pdf
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1、4 4实用预防医学2 0 0 5 年2 月第1 2 卷第1 期P r a c t i c a l P r e v e n t iv e Me d ic in e , F e b . 2 0 0 5 , V o l 1 2 , N o . 1 文章编号: 1 0 0 6 一 3 1 1 0 ( 2 0 0 5 ) 0 1 一 0 0 4 4 一 0 3【 论著 】 油菜蜂花粉对正常小鼠免疫功能的影响 张荣标, , 何 聆2 , 陈 润 , 林 健 , 林 蔚 摘要: 目的观察油菜蜂花粉对正常小鼠 免疫功能的影响。 方法 分别经口 给予B a lb / c 小鼠1 6 5 , 3 3 0 , 6
2、6 0 m g / k g B W三个剂量组的 油菜蜂花粉和蒸馏水对照组3 0 d 。 分别测定小鼠 非特异性免疫功能、 细胞免疫功能、 体液免疫功能。 结 果 经 测 试 发 现 油菜 蜂花 粉各 剂 量 组 对 小鼠 脏器 / 体重比 值均 无影响; 6 6 0 m 留 吨B W剂 量组能增强C o n A 诱导的 脾 淋巴 细胞增殖能 力; 3 3 0 , 6 6 0 m g / 吨B W剂量组均能明 显提高迟发型变态反应水平、 促进抗体生成细胞的生成、 升高小鼠 血清溶血素抗体水平、 增强小鼠 碳廓清能力, 并能明显增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力以及增强小鼠N K细 胞活力。
3、结论油菜蜂花粉具有增强小鼠免疫功能作用。 关键词:、油菜蜂花粉; 免疫功能; 影响 中图分类号: R- 3 3 2文献标识码: A T h e E f f e c t o n I n u n u n o l o g i c a l F u n c t i o n b y B e e P o l le n o f B r a s s i c a i n M i ce Z H A N G R o n g 一 b i a o , H E L i n , C H E N R u n , e t a l . ( F u j ia n C e n t e r f o r D i s e a s e C o
4、 n t r o l a n d P r e v e n t i o n , F u z h o u 3 5 0 0 0 1 , C h i n a ) A b s t r a c t : ) 场 e c t i v e T o i n v e s t ig a t e t h e in f lu e n c e o f B e e p o l le n o f B r a s s ic a o n im m u n e f u n c t io n s o f n o r m a l m ice. M e t h o d s日 e e p o lle n o f 日 r a s s ic a
5、 w e r e g iv e n o r a l ly t o B la b / c m ice f o r 3 0 d a y s w it h t h r e e d o s a g e g r o u p s o f 1 6 5 m g / k g , 3 3 0 m g / k g a n d 6 6 0 m g / k g , an d w a t e r w a s u s e d in c o n t r o l g r o u p . T h e f u n c t io n s o f n o n s p e c if ic im m u n it y , cell imm
6、 u n it y a n d h u m o r a l im m u n it y w e r e o b s e r v e d . R e s u l t s T h e r a t io o f s p le e n / b o d y w e ig h t in a l l d o s a g e g r o u p w a s s im ila r . T h e a p p r e c ia t io n a b il it y o f s p le e n ly m p h 一 cell u n d e r t h e d e r iv a t io n o f C o n
7、A in 6 6 0 m g / k g B W d o s a g e g r o u p h a d b e e n im p r o v e d . In b o t h 3 3 0 m g / k g B W g r o u p a n d 6 6 0 m g / k g B W g r o u p , in d e x e s in c lu d in g t h e r e s p o n s e o f d e la y e d h y p e r s e n s it iv it y , t h e p r o d u c t io n o f ant ib o d y 一 p
8、 r o - d u c in g c e l ls , t h e a m o u n t o f s e r u m h e m o ly t ic a n t ib o d y , t h e a b i l it y f o r c le a r a n c e o f c a r b o n , t h e a b i l it y f o r cel i a c m a c r o p h a g e p h a g o c y t o s is t o c h ic k e n r e d b lo o d cel l and t h e a c t iv it y o f N
9、K w e r e in c r e a s e d . C o n c l u s i o n B e e p o l le n o f B r a s s ic a is a b le t o im p r o v e t h e im m u n o lo g ic f u n c t io n o f m ic e . K e y w o r d s : B e e p o l le n o f b r a s s ic a ; Im m u n o lo g ic f u n c t io n ; E ff e c t 油菜蜂花粉( B e e p o ll e n o f b r
10、a s s i c a . B P B C ) 是一种良 好的天 然营养补品, 它具有多种药理作用, 其中许多方面与其增强免 疫功能有关 。 在医 药和食品工业上有着广泛用途。以 往关 于B P B C 免疫调节方面的文献报道较少, 也只从血清溶血素、 碳 廓清和腹腔巨噬细胞吞噬能力等两三个指标来研究B P B C 一 对正 常小鼠 免疫功能的影响 2 1 , 为更深人地了 解B P B C 对正常小鼠 免疫功能的影响, 我们除了测定以上几个指标外, 还通过小鼠 脏器/ 体重比 值、 细胞免疫功能、 体液免疫功能以及N K细胞活 J性 等各方面功能的测定对其免疫调节功能作了较为全面的研 究。现
11、报告如下。 1 材料与方法 1 . 1 B P B C 为褐色粉末, 由 福建农林大学提供, 临用前用蒸馏 水配成混悬液。 1 . 2 实验动物中国 科学院上海实验动物中心提供的清洁级 B A L B / 。 小鼠, 雌性, 体重为1 8 一2 2 g , 合格证号为S C X K ( 沪) 2 0 0 3 一0 0 0 3 0 作者单位: 1 福建省疾病预防控制中心( 福建福州3 5 0 0 0 1 ) ; 2 福 建省卫生厅卫生监督所 作者简介: 张荣标( 1 9 7 3 一) , 男, 福建福州人, 医师, 主要从事食品、 保健 品毒理及功能检测工作。 1 . 3 剂量选择 试验设B P
12、 B C 1 6 5 , 3 3 0 , 6 6 0 m g / 吨B W三个剂 量组及蒸馏水对照组。 1 . 4 给予受试物途径动物按2 . 0 m l / 1 0 0 g B W容积经口 灌胃。 1 . 5 仪器与试剂 1 . 5 . 1 仪器8 m m直径打孔器、 微量血凝试验板、 U n i v e r S a l 一 3 2 R台式中低速离心机、 B i o r a d 5 5 0 酶标仪、 %孔培养板、 F o r - m a 3 1 1 1 C O , 培养箱、 2 0 0目 筛网、 7 2 2 分光光度计、 O l y m p u s I X 7 0 一 S 8 7 一 2 倒
13、置显微镜、 B o n s o T e s 一 2 0 0 0 A电子称等。 1 . 5 . 2 试剂注射用印度墨汁、 刀豆蛋白A ( C o n A ) , M T T , D N F B 、 丙酮、 麻油、 S R B C 、 生理盐水、 鸡红细胞、 羊红细胞、 甲 醇、 G i 。染液、 Y A C : 一1 细胞、 H a n k s 液( p H 7 . 2 一7 . 4 ) , P R - M I 1 6 4 0 完全培养液、 乳酸铿、 碘硝基氯化四氮哩O N T ) 、 吩嗓二 甲 醋硫酸盐( P M S ) , N A D , T ri s 一 I C I 缓冲液( p H 8
14、 . 2 ) , 1 010 N P 4 0 、 台酚兰、 1 m o l/ L 盐酸、 酸性异丙醇等。 1 . 6 方法 1 . 6 . 1 非特异性免疫功能 1 . 6 . 1 . 1 小鼠脏器/ 体重比值( 胸腺指数和脾指数) 取小鼠 4 0 只, 随机分成4 组, 连续灌胃3 0 d 后, 称小鼠重, 并颈椎脱臼 法处死小鼠, 取出脾脏及胸腺, 用滤纸吸干血迹后称重。 万方数据 实用预防医学 2 0 0 5 年2 月 第1 2 卷 第1 期 P r a c t i c a l P r e v e n t iv e M e d ic in e , F e b . 2 0 0 5 , V
15、o l 1 2 , N o . 1 4 5 1 . 6 . 1 . 2 碳廓清实验测定 取小鼠4 0 只, 随机分成4 组, 连续 灌胃3 0 d 后, 称重, 从小鼠 尾部静脉注人稀释的印度墨汁, 注入 墨 汁 后2 , 1 0 m in , 分 别从内毗 静脉丛取血2 0 川 , 并立即 将其加 到2 m l 0 . 1 % N a z M 溶液中。 用7 2 1 分光光度计在6 0 0 nn 处 测光密度值( O D ) , 以N a t C 0 3 溶液作为空白 对照。 将小鼠处死 后解剖动物, 取出肝脏、 脾脏, 用滤纸吸干血迹后称重, 计算吞 噬指数a 【 吞噬指数a = 体重/
16、( 肝重+ 脾重) x 3 在; k = ( O D , 一 O D z ) / ( t 2 一 t , ) 。 1 . 6 . 1 . 3 小鼠 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验( 半体内法) 取小鼠4 0 只, 随机分成4 组, 连续灌胃3 0 d 后, 每鼠腹腔注射 2 0 % 鸡红细胞悬液1 m l 。间隔3 0 m in , 颈椎脱臼处死动物, 将 其仰位固 定于鼠板上, 正中剪开腹壁皮肤, 经腹腔注人生理盐 水2 m l , 转动鼠 板1 m i n a 然后吸出腹腔洗液1 耐, 平均分滴于 2 片载玻片上, 放入垫有湿纱布的搪瓷盒内, 移置3 7 孵箱温 育3 0 m i n .孵毕
17、, 于生理盐水中漂洗, 以除去未贴片细胞。晾 干, 以1 : 1 丙酮甲醇溶液固定, 4 % ( v / v ) G i e m s a 一 磷酸缓冲液染 色3 m in , 再用蒸馏水漂洗晾干。在油镜下阅片计数, 计算吞噬 百分率 吞噬百分率( %) 二 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/ 计数的 巨噬细胞数x 1 0 0 和吞噬指数 吞噬指数= 被吞噬的鸡红细胞 总数/ 计数的巨噬细胞数 。 1 . 6 . 1 . 4 N K细胞活性测定( L D H测定法) 取小鼠4 0 只, 随 机分成4 组, 连续灌胃3 0 d 后, 颈椎脱日法处死, 无菌取脾, 置 于盛有适量无菌H a n k s 液的
18、小平皿中, 用镊子轻轻将脾撕碎, 经2 0 0 目 筛网过滤, 制成单细胞悬液, 试验前2 4 h 将靶细胞传 代培养, 用前以H a n k s 液洗3 次, 用P R MI 1 6 4 0 完全培养液调 整细胞浓度为4 x 1 0 5 个/ m L 。用H a n k s 液洗涤脾细胞悬液2 次, 每次离心1 0 m in ( 1 0 0 0 r / m in ) 。弃上清将细胞浆弹起, 加入 0 . 5 m l 灭菌水2 0 s , 裂解红细胞后再加人0 . 5 m l 2 倍H a n k s 液 及8 m lH a n k s 液, 离心1 0 m in ( 1 0 0 0 r /
19、m in ) , 1 m l 完全培养液 重悬, 用 1 %冰醋酸稀释后计数, 台酚兰染色计数活细胞数( 应 在9 5 % 以上) , 调整细胞浓度为2 x 1 0 7 个/ M L 。取靶细胞和效 应细胞各1 0 0 风 ( 效靶比 为5 0 : 1 ) , 加人%孔培养板中; 靶细胞 自 然释放孔加靶细胞和培养液各1 0 0 闪 、 靶细胞最大释放孔加 靶细胞和1 9 6 N P 4 0 各1 0 0 讨 , 上述各项均设三个平行孔, 于3 7 C , 5 % C O , 培养箱中培养4h , 然后将培养板离心( 1 5 0 0 r / m in ) 5 m i n , 每孔吸 取上清液1
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