移植大鼠生精干细胞到裸鼠生精小管实验系统的建立.pdf
《移植大鼠生精干细胞到裸鼠生精小管实验系统的建立.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《移植大鼠生精干细胞到裸鼠生精小管实验系统的建立.pdf(4页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、中国男科学杂志2 0 0 9 年第2 3 卷第2 期9 移植大鼠生精干细胞到裸鼠生精小管实验 系统的建立 崔光辉张超郭新秦洁桂耀庭蔡志明 北京大学深圳医院男性生殖实验室( 深圳5 1 8 0 3 6 ) 摘要目的建立移植大鼠生精干细胞到裸鼠生精小管的实验系统。方法采用一次腹腔注射b u s u l f a n 3 0 m g k g 以消除裸鼠生精小管内源性生精细胞,制备生精1 二细胞移植受体小鼠;采用l a m i n i n 粘附的方法分离 大鼠生精干细胞;应用生精小管直接注射和输出管注射的方法移植分离到的大鼠生精干细胞进入受体裸鼠的生 精小管内。结果b u s u l f a n 腹腔注
2、射4 周后受体裸鼠生精小管中的精子发生明显得到抑制。大鼠生精干细胞移 植2 3 个月后在受体裸鼠的生精小管中发现了大鼠的长型精子细胞。结论 成功建立了移植大鼠生精干细胞到 受体裸鼠生精小管的试验系统。 关键词干细胞移植:细精管 中图分类号R - 3 3 1 E x p e r i m e n ts t u d yo nt r a n s p l a n t i n gr a ts p e r m a t o g o n i a ls t e mc e l l i n t on u d em o u s es e m i n i f e r o u st u b u l e s C u iG u
3、 a n g h u i ,Z h a n gC h a o ,G u oX i n ,Q i nJ i e ,G u iY a o t i n g ,C a iZ h i m i n g + L a b o r a t o r yo f M a l eR e p r o d u c t i o n ,S h e n z h e nH o s p i t a l , P e k i n gU n i v e r s i t y , S h e n z h e n5 1 8 0 3 6 , G u a n g d o n gC h i n a A b s t r a c t0 b j e c t
4、 i v eT oe s t a b l i s hae x p e r i m e n t a ls y s t e mo ft r a n s p l a n t i n gr a ts p e r m a t o g o n i a ls t e mc e l li n t om o u $ e s e m i n i f e r o u sm b d e s M e t h o d s R e c i p i e n tn u d em i c eW g T et r e a t e dw i t h3 0 m g k gb u s u l f a n ( i p ) t oe l i
5、 m i n a t ee n d o g e n o u sg e r m c e l l s R a ts p e r m a t o g o n i a ls t e mc e i l sw c l ei s o l a t e db yL a m i n i na d h e r e n c ep r o e m :l u r e m 忙i s o l a t e dr a ts p e r m a t o g o n i a ls t e mc e l l s w e t r a n s p l a n t e di n t os e m i n i f e r o u st u b
6、 u l e so fr e c i p i e n tn u d em i c eb yd i r e c ti n j e c t i o na n de f f e r e n t 刎e c t i o n R e s u l t s F o u r w e e k sa f t e rt r e a t m e n to fb u s u l f a n e n d o g e n o u sg e r mc e l l sW e l ef o u n dt ob ed e c r e a s ei ns e m i n i f e r o u st u b u l e so fr e
7、 c i p i e n tn u d e m i c e T w ot ot h r e em o n t h sa f t e rt r a n s p l a n t a t i o no fr a ts p e r m a t o g o n i a ls t e mc e l l s ,r a te l o n g a t e ds p e r m a t i d sW C l eo b e r s e r v e di n t h es e m i n i f e r o u st u b u l e so fr e c i p i e n tn u d em i c e C o
8、n c l u s i o nA e x p e r i m e n t a ls y s t e mo ft r a n s p l a n d n gr a ts p e r m a t o g o n i a ls t e m c e l li n t os e m i n i f e r o u st u b u l e so fn u d em i c ew a sb u i l tu ps u c c e s s f u l l y K e yw o r d s s t e me e l lt r a n s p l a n t a t i o n ;s e m i n i f e
9、 r o u $ t u b u l e s 为了能够研究生精干细胞的功能,B r i n s t e r 等于 1 9 9 3 年建立了生精干细胞移植技术,即从具备生殖 能力的动物睾丸生精小管中提取生精干细胞移植到不 具备生殖能力的动物睾丸生精小管内,从而使后者 重新获得生殖能力。 生精干细胞移植技术的个重要发展是能够使冷 冻保存的生精干细胞在受体动物睾丸内重建精子发 生。A v a r b o c k 等的实验表明无论来自于性成熟前还 是成体小鼠的冷冻生精干细胞均能够在移植后于受体 小鼠睾丸生精小管内进行精子发生,冷冻保存的方 通讯作者,c g h l 9 6 8 t o m C O r
10、n 式与其它体细胞在体外冷冻保存的方式相同。1 。 移植的生精干细胞能够重建精子发生的意义在 于:( 1 ) 冷冻保存濒危物种的生精干细胞,以便 在任何需要的时间利用合适的宿主繁殖所需的此物 种;( 2 ) 肿瘤的化疗和放疗往往会导致成年男性的 精子发生延迟或不可逆的丧失生育能力。如果在进 行放疗和化疗前保存了患者的生精干细胞,那么在 治疗结束后可以把保存的生精干细胞移植给该患者, 以便恢复其生育能力,此方法尤其适用于处于青春 前期的儿童病人。 万方数据 1 0 C h i n e s eJ o u r n a lo fA n d r o l o g yV 0 1 2 3N o 22 0 0
11、9 生精干细胞移植研究取得的另一个惊人结果足发 现了一个物种的睾丸可以支持来自于另一个物种的生 精干细胞在其生精小管内进行精子发生。异种动物 之间的生精干细胞移植给研究者提供了一个研究有关 精子发生过程中最基本问题的机会”1 。 本研究的目的是通过生精小管和输出管显微注射 的方式在本实验室建立移植大鼠生精干细胞到小鼠生 精小管的实验系统,为今后开展的进一步研究工作 奠定基础。 材料与方法 一、材料 ( 一) 实验动物 在本研究中所应用的雄性W i s t a r 大鼠和雄性裸鼠 均由中I JJ 大学实验动物中心提供。 ( 二) 试剂 型胶原酶、胰蛋白酶、B u s u l f a n 、L a
12、 m i n i n 均购自美国S i g m a 公司;D N a s eI 为洛阳华美公司 产品:显微注射仪及显微注射毛细管为日本索尼公 司产品。 二、方法 ( 一) 实验动物的饲养 六周龄的健康雄性W i s t a r 大鼠饲养于1 2 :1 2 h 昼 夜周期循环的恒温恒湿的环境中,自由进食标准饲 料和自来水。裸鼠饲养于无菌的1 2 :1 2 h 昼夜周期循 环的恒温恒湿的环境中,自由进食经灭菌处理的标 准饲料和自来水。 ( 二) 大鼠生精干细胞的分离 实验大鼠在进行深度麻醉后处死,取出睾丸放 入无菌培养皿中;睾丸在去除白膜后用小镊子撕碎 生精小管,随后加入1 0 倍体积的含l m
13、g m lI V 型胶 原酶的无钙镁的P B S ,于3 7 消化生精小管中的细 胞3 0 m i n ,不断振摇培养皿以加速细胞的分离;P B S 离心清洗消化物2 次,每次1 0 0 0 r p mX5 m i n ;加入 1 0 倍体积的含l m m o l LE D T A ,0 2 5 胰蛋白酶和 7 0 0u g m lD N a s eI 的P B S 继续消化细胞2 0 m i n ,使 用吸管不断吸吹被消化的组织,以利于细胞之间的 解离;用6 0u m 孔径的尼龙网过滤细胞悬液以除去 细胞团块;以每次1 0 0 0 r p mX5 m i n 离一1 1 , 清洗细胞2 次,
14、P B S 重悬细胞;细胞悬液加入包被有l a m i n i n 的 6 孔培养板内,1 m l 孔,3 7 孵育l h ;P B S 冲洗3 次,洗去未能粘附的细胞,粘附的细胞用0 2 5 胰 蛋白酶和l m m o l LE D T A 消化1 0 m i n ,培养板中加 入D M E M ,使用吸管反复吹打粘附的细胞,离一I i , 收 集细胞每次1 0 0 0 r p m 5 m i n ;细胞用含1 0 小牛血 清的D M E M 调整浓度到5 1 0 7 1 m l ,细胞悬液与适 量的0 4 台盼蓝溶液混合后进行生精小管和输出管 内显微注射,显微注射前细胞悬液于4 保存”“1
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 移植 大鼠 精干 细胞 到裸鼠生精小管 实验 系统 建立
链接地址:https://www.31doc.com/p-3721674.html