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1、中国康复医学杂志,2006年,第21卷,第3期Chi ese ()* +, (- .eh+/i,i0+0i( 1e2i3i e, Mar. 2006+,-./ 20+ 1-.3 ! 基础研究 ! 移植胚胎干细胞的衍生细胞修复小鼠脊髓损伤的 行为学观察 武明鑫 1 杨建华 2 王裕 3 李战春 1 王立强 1 张新 1 摘要目的:观察胚胎干细胞的衍生细胞移植对小鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。 方法:将小鼠胚胎干细胞体外 诱导分化为胚胎干细胞的衍生细胞后,制作小鼠脊髓半切损伤模型+在实验组注射胚胎干细胞的衍生细胞到脊髓半 切小鼠的损伤脊髓周围。 实验对照组按照同样方法注入等量磷酸盐缓冲液。 移植后
2、2、2、3周观察小鼠脊髓神经功能 恢复情况4555评分6。 结果:实验组较实验对照组死亡数下降(实验组2只,实验对照组7只),并有明显的神经功能 恢复(各时相点555评分及斜板试验临界角度两组间比较4!8.006。 结论:在脊髓损伤小鼠体内移植胚胎干细胞的衍 生细胞可改善受损的脊髓神经功能和提高生存率。 关键词脊髓损伤; 胚胎干细胞; 动物行为学; 移植; 小鼠 中图分类号9:6;0/2 :2022242886?83828783 An observation on improving fun tional out ome following embryoni stem ells transpl
3、antation to injured spinal ord in mouse through utilizing ethology/Win,?AA Bianhua,WAA ?u et alC/Dhinese Bournal of Eehabilitation =edi ineFGHHIFGJKLM:GHN-GHO Abstra tPbje tive:- -ABCrDC EFC aGGCHEI-J -J JCKr-.-LIHa. GKJHEI-Ja. rCH-DCrM -G EraJBN.aJEaEI-J -G COArM-JIH BECO HCB PQR HC? E- IJSKrCT BNI
4、Ja. H-rT IJ aTK.E O-KBC/=ethod: UaAC.CT VW XIEF UaHYZ OarCT LCJC -G O-KBC QR HC XaB HK.EKrCT aJT IJTKHCT E- TIGGCrCJEIaEC AM BNCHIa.ICT GaHE-rB IJ DIEr- QR HCYTCrIDCT HCB XCrC N.aJECT IJE- DCrECAra. HaJa. ar-KJT IJSKrCT BNIJa. H-rT O-TC FC GKJHEI-Ja. -KEH-OC OCaBKrCOCJEB XCrC NCrG-rOCT KBIJL EFC O-T
5、IGICT 555 BH-rC aE 2+ 2+ aJT 3 XCCB aGECr EraJBN.aJEaEI-J.Eesult:=J -ADI-KB TCHrCaBC -G O-rEa.IEM aJT a BEaEIBEIHaM BILJIGIHaJE IONr-DCOCJE IJ JCKr-.-LIHa. GKJHEI-J -KEH-OC XaB J-ECT IJ O-KBC -G QR HC EraJBN.aJEaEI-J Lr-KN. Don lusion: QR HC EraJBN.aJEaEI-J Lr-KN XaB BKNCrI-r E- H-JEr-. Lr-KN IJ JCK
6、ra. GKJHEI-J rCH-DCrM aJT O-r“ Ea.IEM. Author!s addressrEF-NCTIHB _CNarEOCJE,FC IrBE a-BNIEa. -G bI.IJ cJIDCrBIEM,dFaJLHFKJ,038820 Qey wordsBNIJa. H-rT IJSKrM;COArM-JIH BECO HCBeCEF-.-LM;EraJBN.aJEaEI-JeO-KBC 胚胎干细胞(COArM-JIH BECO HCB,QR)是一种 高度未分化的全能细胞, 具有发育成各种类型细胞 的潜能f近几年已成为生命医学领域的研究热点之 一。 在一定条件下,QR
7、细胞可诱导分化成为神经前 体细胞和有生理功能的神经细胞, 当移植到健全或 损伤的中枢神经系统后,可以与宿主细胞有效整合, 修复重建损伤的神经组织g0h。这将为损伤脊髓的修复 治疗带来新的途径及希望。为此,本实验研究设计采 用胚胎干细胞移植的方法, 探索其对脊髓损伤修复 的作用。 J材料与方法 JCJ材料 d;7i5U6b小鼠共36 只, 63周龄, 雌雄不限, 平均体重282;LP中科院上海实验动物中心提供?, 小鼠胚胎干细胞株R3P上海市发育生物学研究中心 提供?。 主要细胞培养试剂: 高糖_MQM、2Y巯基乙醇 (5MQ)、小鼠白血病抑制因子(Uj)、丝裂霉素d、胎 牛血清(5R)、贴壁诱
8、导培养液(上海市发育生物学 研究中心)、QM: 高糖_MQMk18l 5Rk0l miR、 QRM: 高糖_MQMk0;l 5Rk0/;l miRk0l非必需 氨基酸k0000ciO. Ujk5MQ、 全反式维甲酸:= 4RILOa?。 二甲基甲酰胺4_M?(北京鼎国生物技术发 展中心)。 主要实验仪器:细胞培养箱(aQ:= HC)、洁净 工作台(=j: Qda)苏净集团安泰公司制造、倒置 显微镜 (dn28 .MONKB)、 高速离心机(dCJErIGKLC ;318:)QNNCJT-rG、自制毛细玻璃针。 1吉林大学第一医院骨科,长春市,138821 2佳木斯医学院附属医院骨科 3上海发育
9、工程实验室 作者简介:武明鑫,男,主治医师,博士 收稿日期:288;Y8?, 细胞用诱导培养液A2;MBC 0/45D重悬细胞并 种于培养皿, 避光36在47892培养箱中培养4 天,以此诱导得到类胚体E2?离心1J5?K用含有J:47胎 牛血清的H?内注完,逐层缝合切口各层;实验对 照组则用同样方法注射等量磷酸盐缓冲液。 1.4术后动物行为学观察 实验小鼠在处理后2 周、 X 周、 N周时对受试鼠 进行分级为20级的 ?T FQa.DR3S与斜板试验, 同时观察小鼠的饮食、活动、存活、排便、排尿、切口 愈合情况。M,这与其 他同类实验研究在体外培养诱导方法不同, 从实验 结果看到, 注入经该
10、方法诱导培养的胚胎干细胞的 衍生细胞的脊髓损伤小鼠, 术后神经功能较实验对 照组明显恢复,?Aa.染色观察经体外诱导分化的 胚胎干细胞衍生细胞见类胚体周边生长出纤维状细 胞,排列紧密。这些结果从一方面证实胚胎干细胞株 7建系是成功的,应用本实验的诱导方法可在体外 将胚胎干细胞向神经前体细胞诱导分化。 本研究中发现实验组模型小鼠比对照组后肢的 负重有较好的恢复, 可以说明脊髓神经组织连续性 得到一定的恢复,传导通路得到部分或全部恢复,这 对临床上多见的不可逆脊髓中枢神经系统损伤的修 复具有重要意义。 在本实验研究中发现实验组小鼠 神经功能明显恢复,并和对照组有明显差异,因植入 的衍生细胞距离损伤
11、部位0BC,表明植入外源性= 细胞的衍生细胞能在损伤区环境中存活, 至少迁移 0BC到损伤脊髓区域,这从结构上来讲,重建了神经 元及胶质细胞,并具有神经功能,恢复了神经组织连 续性。 同时也说明=细胞完全适应损伤后的脊髓 环境, 在该环境中的炎性因子并未造成=细胞的 损伤,这与MBD-Ea.F的实验结果相似G5H。 胚胎干细胞的衍生细胞迁移机制目前还不十分 清楚, 但可以推断胚胎干细胞的衍生细胞迁移机制 与微环境有关,包括神经细胞黏附分子I142MJ 、细 胞外基质等G9H,在我们实验中,由神经功能的恢复表 现可以推断出:植入经诱导的胚胎干细胞,在脊髓损 伤的环境对其未造成较大影响, 反而这种
12、损伤的微 环境可能除产生某种细胞因子刺激=细胞的迁移 外,同时也能帮助其存活,并按微环境的诱导,分化 成为终末细胞。 这也可能与脊髓损伤后立即中和髓 磷脂类抑制分子的作用, 则轴突的再生便会先于胶 质瘢痕出现有关G6:H。 同时国外也有报道,KLM等G7H在 应用胚胎干细胞体外培养神经细胞的方法的同时, 将分化的细胞转移到特殊的培养基中可大量得到少 突胶质细胞,移植入先天性髓鞘缺失的成鼠中,发现 少突胶质细胞不但可迁移且与宿主整合, 而且产生 新的髓鞘并使宿主的轴索髓鞘再生, 提示胚胎干细 胞在这种特殊的微环境下, 能克服一些抑制轴突的 生长因子,促进髓鞘形成。 参考文献 G0H4.arNO
13、DKP Q-RaESS-E 43P TLUOrVW QP OV a.6 XOEOra.LWOF Y-VOE# VLa. -Z aFM.V EOMra. SVOC BOS GQH6BLOEBO,2000,2770660 06636 G2H杨迎暴,朴英杰6脊髓损伤模型的建立及其评价标准GQH6中华创伤 杂志,2002,07:0776 G3H3aSS- DMP 3OaVVLO M,3rOSEaRaE Q46 XraFOF RLSV-.-ALBa. aEF .-B-C-V-r -MVB-COS aZVOr SYLEa. B-rF B-EVMSL-E MSLEA VRO 1 OLARV Fr-Y FO_
14、LBO _OrSMS VraESOBVL-E GQH/ =Y 1Mr-.,0886,038 255296/ G5HMB D-Ea.F QTP KLM ?aP bM POV a./ MLBNOc d VraESY.aEVOF OCUrc-ELB SVOC BOS SMr_L_OP FLZZOrOEVLaVO aEF Yr-C-VO rOB-_Orc LE LEeMrOF raV SYLEa. B-rFGQH/ 1aV MOFP 0888P9I02f050005026 G9HTM TP T-EA dP 4ROE QgP OV a.6 DLrOBVL-Ea. AMLFaEBO -Z EOM# r-E
15、a. CLAraVL-E LE VRO -.ZaBV-rc ScSVOC Uc VRO B-EBOEVraVL-E -Z VRO SOBrOVOF Yr-VOLE S.LVGQH6 1aVMrOP0888P5003303366 G6H3ORar h,MLWME- dP 1OMCaEE 6 iMVVLEA VRO SYLEa. B-rF V-# AOVROr aAaLEGQH6 1OMr-EP2000P26 I2f 2802836 G:HgMaEA DT,MB dOrraBROr K,3raME i=,OV a.62 VROraYOMVLB _aB# BLEO aYYr-aBR V- SVLCM.aVO a-E rOAOEOraVL-E LE VRO aFM.V CaC# Ca.LaE SYLEa. B-rFGQH6 1OMr-EP0888P25I3f63865:6 G7HKLM P bM P VOarV jQP OV a.6 =CUrc-ELB SVOC BOS FLZZOrOE# VLaVO LEV- -.LA-FOEFr-BcVOS aEF CcO.LEaVO LE BM.VMrO aEF aZVOr SYLEa. B-rF VraESY.aEVaVL-E GQH6ir-B 1aV. 2BaF BL 2P 2000P 8:I11f612661316 208
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