空肠弯曲菌保存方法的比较.pdf
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1、第 12 卷 第4期 口岸卫生控制 实验研臾 空肠弯曲菌保存方法的比较 案 军 祝长青 蒋 原 金伟宵 江苏出 入境检脸检疫局( 南 京, 21(X 犯 1) 摘要 空 肠弯曲菌 是近年来 在全球范围内 被广泛重 视的人畜共患 病病原菌,该菌培养条件苛刘, 菌 株不易 保存。为了 解决保存难这一难题, 此实 脸对七种通常用于空肠育曲菌保存的方法, 进行了 详 细的比较和研究。 结果表明温度在 一0 适合于菌株的长期保存, 温度在2 一 8 保存时间 较短, 但 操作简 便, 适用于菌株的哲时保存。 关键词空肠育曲菌保存复苏 中图分类号R 一 33文献标识码B 空肠弯曲菌是近年来在全球范围内 广
2、泛重视的 人畜共患病病原菌, 在人类能够导致急性肠炎与食 物中毒, 是引起人类腹泻的 重要病原菌之一。 人类感 染主要是由于食用或接触了空肠弯曲菌污染的食 品、 引用水等。 空肠弯曲菌为微需氧菌, 生长需要特定的环境。 通常在微需氧 ( 5 % 氧气、 85% 氮气、 1 摆 汤 二氧化碳) 、 4 2 士 1 环境下, 可存活4 s d , 最后因培养基表面干 燥而导致菌体干燥死亡。 若在微需氧、 4 2 月 条件下 培养24h 后, 连同 微需氧罐一并放人4 冰箱中, 也 只能保存5 一 7 山 这给菌种保存工作带来了很大困 难。为了解决这一难题, 选取了七种方法进行了比 较, 结果发现温
3、度对空肠弯曲菌的保存影响较大。 1 实验材料 1 . 1 培养基与试剂 M 记币 edC a ln p 刃 obacterBI 。 记 -Fr ees elec tive 耘ar B ase(C c D A) 、 哥 伦比 亚 琼脂、 布氏 肉 汤、 磁 珠、 A p l (梅里 埃) 、 脱纤维羊血、 FBP ( F e rT 0 u , su 而e o 2 5 叭, ,di um M e ta b is u 场 te025 昨, S x liu m巧 TU vate 叭5 泌) 、 B F p B 肉 汤( 腼c e uaB ro th es F B P ) 、 B F p B 潮旨 (
4、B n lc ella A g a r FBP)脚旨 牛 奶、 甘油。 1 .2 菌株 用于试验的空肠弯曲菌共3 株,菌号为: A 冗C 3 3 5 向、 A T C C 2 942 8 、 A T C C 3 3 2 9 1 。 2 方法 2 . 1冻存管冻 存 2. L I 方法 1 将哥伦比 亚平板上的纯化菌株用2 d灭菌过的脱脂牛奶冲 洗, 无菌条件下每2 园冻存 管中 分装l d, 分别于一 ZD 和一0 冰箱中 保存。 2. L 2方法211挑取6 环在B FBP肉汤中培养24b 的菌株到B FBP 琼脂上, 继续微需氧、 42士 1 条件下 培养24h 后, 用4 d含有15%
5、甘油的布氏肉汤洗平 板, 无菌条件下每Z d冻存管中分装 1 耐,分别 于一 ZD 和一 70 冰箱中保存。 2. 2 冻干 方法3 将哥伦比 亚平板上的纯化菌株用Z d 灭菌过的脱脂牛奶冲洗, 无菌条件下转人4 d灭菌 过的青霉素瓶中, 冻干机冻干、 封口 后, 分别于一 20 和刀 。 冰箱中 保存。 2 . 3 磁珠 方法4 对需要保存的菌株进行必要的纯化, 挑 取生长旺盛时期的菌落, 接人菌株保藏管中, 通常需 要 接 人4 7环, 然 后 拧 上 盖 子, 充 分 剧 烈 震 荡, 烤着 用 无菌吸管将溶液吸走, 尽可能吸干并立即放人一0 和一0 冰箱中 保存。复苏时, 只需将小珠在
6、平板上 滚动或置肉汤中 培养。 2 .4 28 冷藏 2 .41 方法驯将配制好的20 耐布氏肉汤与脱纤 维绵羊血(1:1) , 且含有0. 05% F B p 的增菌液, 存放在 带旋口的灭菌管中。 并分别接种标准菌株于管内, 于 4 2 微需氧培养24b 后取出, 用石蜡封住表面, 旋 紧盖子于2 一 8 保存。 2. 4. 2 方法6 先将布氏琼脂( 1 5 % 琼脂) 分装在带 旋口 的试管中, 再将B F P B肉汤中培养一夜的菌株 万方数据 口岸卫生控制第 1 2 卷 第4 期 接种于琼脂表面, 盖上盖子不要旋紧, 培养( 培养条 件同上) 后取出, 旋紧盖子2 一 8 保存。 Z
7、 j 室温保存法 方法7 将菌株接种于半固体布氏琼脂上, 培 养( 培养条件同上) 后, 在微需氧条件下室温( 20 一 3 0) 保存。 3 菌种复苏及结果 3 . 1 菌种复苏 1 、 2 乃、 4 号方法每种菌株各保存1 80管( 或瓶) , 各放一半于一 2 0和一 70 冰箱中保存。如 1 号方 法:先将A 咒C3 3 5 印 9 0管、 A T C C 2 9 4 2 89 0 管、 A 宪C 332 919 0 管放一 20 冰箱中 保存, 再将剩下的 A TCC3 3 5 印 叩 管、 A TCC 2 9 4 2 8卯 管、 A TCC 3 3 2 9 1 9 0 管放一0 冰
8、箱中保存。以此类推后2 、 3 、 4 号方 法也如此。 每次复苏时不同方法、 温度和菌株各复苏 10管。 5 、 6 、 7 号 方法每种方法各保存1 00株, 每次 复 苏时每种方法每种菌株各复苏10管。 3. 2 菌种存活 情况 采用不同方法、培养基和保存温度对空肠弯曲 菌进行保存, 其存活情况详见表1 、 20 衰1 来用1 、 2 、 3 、 4 号方法保存的蔺株存活愉况 方. 法 保存条件 一 ( ) 存活率( %) 犯阴1093631003叩 47100239386姗1393 5710047盯93姗如100 730067970000曰00 9700豹0000008000 3 0d
9、 l oo 1 oo 1 oo 1 oo 1 oo l oo 1 oo 1 加 9O dl 2 0d1 5 0d1 90 d2 3 0d270d3 的 d 1 001 00 1 001 00 000000000000 000000009700 0000000000000000 -20-70-20-70-20-70-20那 号号号号 ,几2飞份4 表2 采用5 、 6 、 7 号方法保存的菌株存活情况 方法 保存条件 ( ) 存活率( %) 21d3 0d45 J6 575 d如 d1 笛 d 月口飞1 1710一 4330一 53幻。 67707 768620 On陀J几j OQ钾、 98龙
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