纤溶酶原激活物抑制因子1基因启动子区4G和5G多态基因型分布及其与多囊卵巢综合征的相关性研究.pdf
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1、基金项目: 国家自然科学基金资助项目 (39300136; 30270512) 作者单位: 250021 济南, 山东大学山东省立医院生殖医学中心 赵君利 (现在银川, 宁夏医学院附属医院妇产科 750004) 、 陈子江、 赵跃然、 赵力新、 唐蓉、 马增香 , 科研中心 (王来成) 通信作者: 陈子江, 250021 济南, 山东大学山东省立医院生殖医学中心 论著 纤溶酶原激活物抑制因子 1 基因启动子区 4G 和 5G 多态基因型分布及其与多囊 卵巢综合征的相关性研究 赵君利 陈子江 赵跃然 赵力新 王来成 唐蓉 马增香 【摘要】 目的 探讨纤溶酶原激活物抑制因子 1 (PAI-1) 基
2、因启动子区 4G 及 5G 的多态基因型 分布, 及其与多囊卵巢综合征 (PCOS) 发病的关系。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态 性技术, 检测 101 例 PCOS 患者 (PCOS 组) 与 42 例因男性或单纯输卵管因素不孕患者 (对照组) PAI-1 基因启动子区 4G 基因型及 5G 多态基因型分布, 测定并计算两组患者的体重指数、 胰岛素抵抗指数、 胰岛素敏感指数及自然流产数等临床指标。根据体重指数将 PCOS 患者分为肥胖者 (48 例) 与非肥 胖者 (53 例) 。结果 PCOS 组 PAI-1 基因启动子区 4G 基因型频率为 57% (58/101) , 对照
3、组为 38% (16/42) ; PCOS 组5G 基因型频率为43% (43/101) , 对照组为62% (26/42) 。两组4G 及5G 基因型频 率分别比较, 差异均有统计学意义 (P 0. 05) 。根据 体重指数 (BMI) 25 kg/ m2为非肥胖, 25 kg/ m2 为肥胖的标准, PCOS 组患者中, 肥胖患者 48 例, 非 肥胖患者 53 例。肥胖患者的年龄为 (28 4) 岁, 不 孕时间为 (4 3) 年; 非肥胖患者的年龄为 (29 4) 岁、 不孕时间为 (4 2) 年, 两者上述指标比较, 差异 均无统计学意义 (P 0. 05) 。PCOS 组已婚未妊娠
4、 者 74 例, 曾妊娠者 27 例。27 例中, 自然妊娠或助 孕治疗妊娠后自然流产 14 例 (自然流产 1 次者 9 例、 2 次者 3 例、 3 次者 2 例) 。 二、 方法 1. 生殖激素及胰岛素等测定: 黄体生成素 (LH) 、 卵泡刺激素 (FSH) 、 睾酮等生殖激素及胰岛 素测定, 采用化学发光法 ( 化学发光仪为美国 Beckman Access Health 公司产品) , 进行同批试剂盒 测定。血糖采用葡萄糖氧化酶法测定。 2. BMI 及腰臀比等测定: BMI 为体重 (kg) / 身 高 (m2) ; 腰臀比 (WHR) 为腰围 (cm) / 臀围 (cm) 。
5、应用稳态模式评估法 (homastasis model assessment, Homa) 计算胰岛素抵抗指数 (Homa-IR ) , Homa-IR 为 空腹血糖 (mmol/ L) 空腹胰岛素 (mIU/ L) / 22. 5 4; 胰岛素敏感指数 (ISI)为 1/ 空腹血糖 (mmol/ L) 空腹胰岛素 (mIU/ L) 。 3. 基因多态性检测:DNA 采用山东省立医院 中心实验室全血 DNA 提取试剂盒提取。基因多态 性检测:(1) 目的片段扩增: PCR 上游引物序列为: 5-CACAGAGAGAGTCTGGcCACGT-3 (其中 c 为非 配对碱基) ; 下游引物 序 列
6、 为: 5-CAGCCACGTG ATTGTCTAGGT-35(上海博亚生物技术有限公司 合成) ;(2) PCR 反应体系:PCR 反应体系共 25 l, 其中基因组 DNA 100 ng, 10 缓冲液2. 5 l,MgCl2 1. 5 mmol/ L, 脱氧核苷三磷酸 (dNTPs) 0. 2 mmol/ L , 上、 下引物各 0. 5 mol/ L, 耐热 DNA 聚合酶(上海 博亚生物技术有限公司产品)1. 25 U 。 (3) 循环条 件: 预变性 945 min; 循环指标为 9430 s、 57 30 s、 72 30 s, 共35 个循环, 应用 ABI-9700 PCR
7、扩 增仪 (美国 Applied Biosystems 公司产品) 行目的基 因扩增。行 1% 琼脂 糖 凝 胶 电 泳, 经 溴 化 乙 锭 (ethidium bromide, EB) 染色检测 PCR 产物。 (4) PAI-1 基因 PCR 产物分析: PCR 产物经 DNA 回收试 剂盒纯化, Bsl限制性内切酶消化, 12% 中性聚丙 烯酰胺凝胶电泳分型, 于室温下电泳 2. 5 h (电压 100 V) ,EB 染色15 min, 应用 Alphaimager 2000 图像 分析仪 (美国 Applied Biosystems 公司产品) 进行结果 分析, PAI-1 基因 P
8、CR 产物为142 bp, 经 Bsl酶切后 形成 3 种基因型: 96 bp 及46 bp 条带, 即为4G/4G 基 因型; 74 bp、 46 bp 条带, 即为 5G/5G 基因型; 96 bp、 74 bp、 46 bp 条带, 即为4G/5G 基因型, 见图1。 925中华妇产科杂志 2005 年 8 月第 40 卷第 8 期 Chin J Obstet Gynecol,August 2005,Vol. 40,No. 8 表 1 PCOS 组肥胖与非肥胖患者临床指标比较 (-x s) 类别例数BMI(kg/ m2)WHR腰围 (cm)Homa-IRISI 非肥胖患者5321. 8
9、2. 00. 81 0. 1474 141. 6 1. 30. 043 0. 027 肥胖患者4829. 3 3. 00. 87 0. 0692 102. 1 1. 20. 028 0. 017 t 值14. 436*2. 5146. 8842. 0543. 138* P 值0.05) 。肥胖患者 BMI、 WHR、 腰围、 Homa-IR 均明显高于非肥胖患者, ISI 明显低于非肥胖患者, 两者上述指标比较, 差异均有统 计学意义 (P 0.05) , 见表1。 三、 两组患者 PAI-1 基因启动子区4G 及5G 多态 基因型分布 由于 5G/5G 基因型出现例数较少, 故本研究将 4G
10、/5G 与5G/5G 两种基因型合并为5G 基因型进行分 析, 4G/4G 基因型作为 4G 基因型进行分析。本研究 143 例汉族妇女检测结果显示, PAI-1 基因启动子区4G 等位基因频率为 0.675,5G 等位基因频率为 0.325。 4G 基因型出现74 例, 4G 基因型频率为52%; 5G 基因 型出现69 例, 5G 基因型频率为48% (其中4G/5G 基因 型出现45 例, 基因型频率为 31%; 5G/5G 基因型出现 24 例, 基因型频率为17%) 。其中 PCOS 组4G 基因型 频率为 57% (58/101) , 对照组为38% (16/42) ; 5G 基因
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- 纤溶酶原 激活 抑制 因子 基因 启动 子区 基因型 分布 及其 卵巢 综合征 相关性 研究
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