穿膜肽人A20融合蛋白对单核细胞内毒素应答的影响.pdf
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1、基础研究 穿膜肽 ! 人 “#$ 融合蛋白对单核细胞 内毒素应答的影响 吴丽娟% 刘素秀% 蒋建新% 朱佩芳% 康格非 % % 【摘要】 % 目的% 探讨穿膜肽 ! 人 “#$ 融合蛋白 (5 ?4$A(B #(C;(F:$)6K$)6 2$2#,JG$)( J;4F:)$)6 (;:-*./0 -$()%,$),H4B: $67%#8%769:92:2,L=($B: A?4AB ( CCD? EEFEBG H5GB45A HH4I ! (F3B5 “#$ CFJ ?445( DBM DTM D5 认为 “#$ 可能是将来临床治疗炎症性疾病的新措 施 1。但是, (“#$ 存在于细胞质中, 体
2、外制备 (“#$ 如何能够进入到靶细胞内, 一直是困扰生物合成 (“#$ 等多种胞浆功能性蛋白的难题之一。穿膜肽 ! (“#$ 融合蛋白 (DEEFEBG H5GB45A HH4I ! (FJ 3B5 “#$ CF?445, CD7!6 等为国产分析纯试剂。 !- #“ 细胞摄取实验 将 ()“* 细胞悬浮于含体积分数 *J 3!, 的 .“/0 #*12 培养基中, KLM、 体积分数 NJ 的 !A8 收 集细胞, 用含体积分数 *J 3!, 的 .“/0 #*12 培 养液重悬细胞, 调细胞浓度至* Q*RS =6。取8。向小瓶中各加入 R =6 等渗盐水, 8, 洗涤细胞 * 次。重复
3、洗涤 * 次, 重悬细 胞于 * =6 .“/0 # *12 培养基中, 取 * 滴细胞悬液 滴加在 %“:, 玻片上, 轻轻铺开, 微风吹干。 标志肽激光共聚焦定位检查: 用体积分数 *J甲醇室温固定 N =;8, 磷酸盐缓冲液 (“?,) 洗 涤 8,甩掉 阻断缓冲液。加标志肽荧光抗体 (*TN 稀释) , KLM孵育* $, 用 “?, 洗涤K 次, KLM凉干后封片, 激 光共聚焦扫描成像。 !- $“ 胞浆 %8。用 R =6 等渗盐水洗涤细 胞 8, 收集上清, :+0,% 法检测 %) 。 图*+ ()“* 细胞摄取 !“ # $%7 012!3“ # $% 组比较: #! 67
4、5 #“ 讨论 近年来, 研究发现脓毒症 (B1CBDB) 实际上属于一 种 失控性炎症反应, 4 # 菌的-“/、 4 E 菌的肽聚糖 图 :+ !“ # $%+ !“ # $% (NOKK # KDP1 Q1?1CNOQ ;, (-M;) 结合, 在 !R*; 及 SR 的表达, 在预防体内炎症反 应过度、 保护组织细胞免于发生炎症损伤中发挥重 要作用 * #:。现已证实, %中华创伤杂志 ?79) , 一个 (指氨基 末端结构域) 去泛素化保护蛋白免于被蛋白酶体识 别和降解, 另一个 (指羧基末端结构域) 泛素化使蛋 白被蛋白酶体识别和降解。#$% 蛋白同时拥有被完 全分隔开来的这两个功
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