糖尿病大鼠及局灶缺血再灌注模型的探讨.pdf
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1、主 国实用神 经疾病杂志2 0 0 5 年3 月第1 1 卷 第3 期 c h i n e s e j o u r nal o f P ra c t ica l N e rvou : 压s ea s e , M a r. z o o s , v o l . 1 1 N o . 3 参考文献 V t toT, Bori s T, D t l 3 a nT, etaL L y 幻som a 】 即s t e i n e P r o t eas e s : Pact s a n do p 卯rt u n i t i e : J . TbeE m bO J , 2 0 0 1 , 2 0 1 7 )
2、: 46 2 9 一 4 6 3 3 - 陈永杰, 陈奎生 . MA T-1 、 n m 23一 H l 蛋白表达与肝癌转移的关系 J l . 山东医药, 2 0 0 7 , 4 7 ( 2 2 ) : 5 2 一 5 3 , A n n aM 压p ade r s k a , A l l e nP ra n k fa t e r. A ni n t ra c el l 吐 a rfo rm o f cat h e p s i nBc ont ri b u t e : toin vas i v enes。 i n ca n c e r J . Can c e r R e s , 2 0 0 1
3、, 6 1 ( 8 ) : 3 4 9 3 一 3 5 0 0 . 4 G o 叱Q , C h a n sJ, Bajkow s k i A S , etal. C hara ct e ri Za t i o n o f t h e cat h e P s i n Bg e n ea n dm u l t i p l e mR N A Si nh u ma nt i s s u e s: E v i - d e n c e fo r a l t e rn a t i v e s p l id n g o f c a t h e p s i n B p r e m R N A J , D NC
4、 众UBi o l , 1 9 9 3 , 1 2 ( 4 ) : 2 p 9 一 3 0 9 5 H a l a n g kW, L e r c hMM , Bra ndt 一 N ede l e ,B, e t al .R o l e o f ca- t h e p s inB访I n t ra cel l u l a r t r y p s i n o g e n c u t e 匹n c reat it i s J . J C l i n l n v e s t , a c t i v a t i o na n dt h e o n set o f a - 2 0 0 0 , 1 0
5、6 ( 6 ) : 7 7 3 一 7 8 1 . ( 收稿 2 0 0 8 一 0 1 刃6 ) 一.J,J ,翻丹西 -IJL.J 糖尿病大鼠及局灶缺血再灌注模型的探讨 王宪远” 尹帅领2) 孙乐羽3 1) 郑州大学第二附属医院病理科郑州 450052 2)郑州市中心医院神经内科郑州 4500003)郑州大学第五附属医 院千四科郑州4 5 0 0 0 0 【 摘要】 目的 探讨一种比较简易的糖尿病大鼠 局灶性脑缺血/ 再灌注模型制备方法并比较分析影响模型制备成功的因素. 方法 7 0 只体质量为180 2 209 的雄性S D大鼠禁食12h 后, 于腹腔内一次性注射链脉霉素60m g /
6、k g , 选择体质量为2 803 209 血糖水平 16. 7 2 5 . 6 m mol/ L的成模实验性慢性糖尿病大鼠制作脑缺血再灌注模型; 另选择55只体质量为28。 3 20 9 的同种同 月龄雄性大鼠制作单纯脑缺血再灌注模型作为对照; 采用Zea L o nga 线栓改进法, 从rCB F 、 神经功能缺陷评分以及梗死灶体积等三 个方面进行对比研究。 比较2 组大鼠模型制备成功率并分析2 组大鼠模型制备失败及死亡原因。结果脑缺血再灌注模型制备: 单纯脑缺血再灌注组大鼠神经功能评分低于糖尿病脑缺血再灌注组( 尸 1 6 . 7 m m ol / L糖尿病模型复制成功, 饲养 6 一7
7、 周, 每2 周测 1 次血糖和体质量, 血糖)25. 7m mol / L 者隔日注射长效胰岛素 1 Z U, 以防止大鼠出现酮症 酸中毒。( 2)局灶性短暂脑缺血模型的制备: 线栓法制 作大脑中动脉闭塞( MC A O ) 及再灌注模型。大鼠用 10%水合氯醛按0 . 3 m l / 1 o 0 9 腹腔注射麻醉, 仰卧于 手术台上, 颈正中切口, 分离左侧颈总动脉( C C A) 、 颈 内动脉( I C A ) 及颈外动脉( E C A ) , 结扎左 C C A后结扎 E C A及其分支, 结扎并剪断翼愕动脉, 在I C A近心端 放置动脉夹, 于C C A分叉处3 一s m m处剪
8、一小口, 用 直径0 . 250 . 28 m m的鱼线前端沾取少量的硅胶, 经 小口缓慢插入, 深度为( 23士0 . 5) m m至大脑中动脉 ( MC A) , 以阻塞左侧的 MC A, 此时可感到明显阻力, 扎紧颈 C C A远心端。术中肛温用灯泡保暖维持肛温 (37 士0 . 5 ) 。 再灌注时只需将栓线抽出 ICA即可。 万方数据 5 2 中国实用神经疾病杂志2 0 0 8 年3 月第1 1 卷第3 期C h i n e s e J o u r n a l o f P r a c t i c a l N e r v o u s D i s e a s e s Ma r.2 o o
9、 8 , V o l . l l N o . 3 1 . 3 判断方法及标准(1) 手术后神经功能的变化: 根据L o n g a 等川报告的神经功能缺损5 分制标准, 于 缺血再灌注24 h内进行神经功能评分, 1 3分为模 型制作成功aj.0 分: 无神经系统功能缺损症状, 活动 正常; 1 分: 对侧前爪不能完全伸展; 2 分: 爬行时出现 向 非 手 术 侧 转 圈 ( 追 尾 现 象 ; “ 分 : 行 走 嘴 身 体向 偏 瘫 侧倾倒; 4 分: 不能自发行走, 意识丧失。 义 2)大脑皮质 局部血流量( r C B F ) 测定: 根据氢清除原理, 用组织血 流仪( L S m
10、型, 北京神经外科研究所研制j 分别在缺血 Zh 再灌注后 6h 、 1 2h 、 2 4h 、 4 8h 测定左额顶叶皮层 的r C B F 。 (3) 组织形态学观察: 断头取脑后, 用组织 切片机自 前脑额极起切取 6 片冠状切片, 层厚 Zm m, 取第 6 片置于2 %2 , 3 , 5 三苯氯化四氮哇( T T C ) 溶液 中, 在 37下染色 30 m in。其余脑组织切片置于 1 0 %甲醛固定液中固定, 取第4 片切片制成石蜡切片, 并行 HE染色, 于光学显微镜下观察大鼠脑组织发生 缺血后的组织病理学变化。 1 , 4 统计学分析方法用 S P S S10. 0软件对数据
11、进 行处理, 所测数据以均数标准差仕士, ) 表示, 组间比较 采用t 检验, 尸 3 50 9时, 颅 内血管增粗, 难以完全阻断大脑中动脉血流; 体质量 24o 9 可能发生栓线难以插人血管的问题4j。目前认 为, 制备脑缺血再灌注大鼠模型以选择体质量为2 50 330 9 大鼠 为宜 sJ。 鉴于大鼠体质量对脑缺血再灌 注实验成功与否的重要影响, 故对初始实验大鼠即尚 未制备糖尿病模型之前大鼠的体质量筛选要求较高, 但各家报道的选择标准亦有所不同, 本实验发现, 体质 量在2 80一3 209 的大鼠模型成功率较高。而在制备 慢性糖尿病动物模型前人组的大鼠体质量过轻, 在实 万方数据 中
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