糖尿病大鼠肾组织VEGF和TGF-β1的动态表达及意义.pdf
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1、江西医药 2 008 年第4 3 卷 第 1 期1 3 在c T nl持续阳性期间发生再梗, 此时C K 一 M B 就具 有更好的 敏感性; 在配合h s 一 C R P 、 C K 一 M B 的 密切监 测下, 一旦出现C Thl 即可确诊, 使得A M I 的患者能 尽早地得到治疗, 特别是在4 h 之内, 这对于降低A - Ml 患者的 致残率和 死亡率是非常必要的。 综上所述, 将h s- c RP、 c K 一 M B 和c T nl浓度一 起作为A M I 早期诊断的指标具有很好的临床应用 价值, 三者相互补充, 可 将诊断与治疗提前到4h以 内, 并能 作为A M I 的预
2、后监测及疗效观察的 指标。 4参考文献 IR os 。R .A rt e ri osc l e 朋1 5一An i nfla n l m 以 t o ry d isease.NE ngl JM ed, 1 999 , 3 4(): 1 1 5 2凡d k e rP M ,H e i n e k e n sC H , B u ri n gJ E 辫 al . C- 此 a c t l ve p 瓜e i n即d o t 卜 e r mar k e .ofi nn别 m n 坦 t i oninthe p 祀 d l ct i on试c azdi ov ascul ardi s- easei n
3、womeo . NE n glJ M ed, 2 0( X) , 3 42:8 6 3 3 张立, 焦连亭.C反应蛋白与急性冠状动脉综合征. 国外医学临床生 物化学与检验学分册. 2 佣3 , 24( 5 ) 二 2 印 4 M c d o n o u gh几A 耽llD K ,V anE y k J E . T ro 卯n i 讨d e , 司 at i onand co- vale ni印m p 1 ex fo rma t i on acc 0 n lp a n ies m y ocar di 日i sc h enu 创 比 伴而- s i on i nj u ry . C i oR es
4、, 1 9 99, 4 8 : 9 5 丛玉隆, 王丁, 张秀珍, 等. 当代检骏分析技术与临床. 第1 版. 北京: 中国科学技术出版社. 2 加2 .3 0 3 6 S u l e i man M S ,切c c h etti V ,C a p u toM ,etal .S h ort p 吧 n 记s ofre gi on ali s c h a e m l a and re 碑rfusi on p rD , o k e二 1 ,of加poni nl 俪mthe 恤- manh e a rt s . C l i nC h i mA c ta, 1 9 99, 2 8 (4 ) : 252
5、 7 播柏申 . 心脏标志物的临床 应用. 中 华检验医学杂志, 2 005 , 2 8 (l ) : 1 24 ( 收稿日 期2 (X)7 一 1 0-2 2修回日 期2 (X)8 刁1 - 0 7 ) 糖 尿病大鼠肾 组织v E G F 和T G F 一 阻的 动 态表达 及意义 周青 王冬芽2 郭兵3 张国 忠飞 江西省井冈山大学医学院 病理教研室;2普外科, 吉安, 343 砚X x ; 3 贵州省贵阳医学院 病生教研 室, 贵阳, 55以 则) 摘要目 的动态观察链脉佐菌素(S 兀) 诱导的 糖尿病大鼠肾 组织中 血管内 皮生长因子( v E G F)及转化生长因子p l( TGF
6、一 印) 的 表达情况, 探讨它们在糖尿病肾 病( D N ) 发生发展中的 作用及其相互关系。 方法实验动物随机分为5 组, 依病程长短分为: ( 1 )A 组( 2 周组) ; ( 2 ) B 组( 4 周组) ; ( 3 ) C 组( 8 周组) ; ( 4 ) D组( 1 6 周组) ; ( 5 ) E 组( 抖周组 ) , 每组分别设有正常对照组( N 组) 和糖尿病组 mM组) 。 注射S T z 法复制糖尿病大鼠 模型; 免疫组织化学方法检测肾组织v E G F 、 T G F 一 p l 及纤连蛋白( FN) 的表达; 以5 染色光 镜观察肾小球系膜、 肾小管基底膜变化及细胞外
7、基质沉积情况等的 形态学改变; 生化方法测定血糖、 血肌醉及24h 尿蛋白 量。 结 果( 1)正常对照组大鼠肾 组织v E G F 和兀F-田均有少量表达, 而糖尿病大鼠肾 组织两者的表达均显著高于正常对照组。( 2) 糖尿病16周时肾 组织v E G F 表 达与TGF 一 印呈正 相关。 ( 3 ) 随糖尿 病进展, 细胞外基质纤连蛋白(F N ) 在肾 小管及肾 小 球表达 增多, 2 4 h 尿蛋白 也增多, 并且v E G F 、 TGF 一 即两者都分别和FN、 24b 尿蛋白 呈正相关性。 结论糖尿病肾 病大鼠肾 组织中v E G F 及TGF 一 即参与了 早晚 期蛋白 尿及
8、肾 脏肥 大硬 化的 发 生, 并且v E G F 和TGF 一 印相互作用, 共同 促进了 肾 病的 发生 发展。 关键词糖尿病; 肾 组织; 血管内 皮生长因子; 转化生长因子田 中图分类号: R 一 332 T 知 e d 抑 团 耐c e x P r 欣 始 i on a n d con t e n t ofV E G Fa n d T G F 一 p l 恤t b e re n ait i SS ueof山 a beti c rats z hou Q i n g l, wang Don gyaz,G uoB i n 乙et川(1D 印耐mentofp at ho 纵 盯 JI I唱
9、罗 Zn 邵 无 傲un滋: 妙Z D e 尸 耐me瓜of邵 ne 耐: “ 卿)子 夕毗dhD 3 p i 耐 ofji 飞 刃 山 刁乎 人 朋 un姚。 奴粼叹 洲了 之理 叉 ; JD 叩 叫ment ofp 以 从 明 如勿 及 哟、 ui Y Qn gmedic以co 拢 群 , 面 Y 田 砚9 u i 刀 切 巧 乃伙 火 娜 , chi na) Abs 角 叱 t 侧沙c 吞 veTo i n v e s t i g ate the e x p re s s i onOfV asc以 arE n doth e l i alG 功 wt卜 F a c to r 伴E G 玛
10、a n d T r ans fo n n l 叱G ro wi h F a c for B e ta l 汀 C F 一 日 1 )i n th e re n alti s su e ofS T z 一 i n duc e d di a l 犯 t ic rats ,and toex p l o oth e ir o le s a n d th e o latio n s h i p i n th e ds v e l o p meniofd i a - bet i c ne p 腼p a th y 滋 e 踢 协 山 8 6S Drat8 w ere r a n d o IYily d i
11、v i de din to5 脚u p s : 脚u pA (2wee k s) , 脚u pB (4wee k s) , 脚u p C( 8 w e e k s) , 脚u P D( 1 6 w e e k s)and 脚u p E (2 4 w e e k s ) E ac h gr o u p i nc lu d e d n o m la l c o n trol 目 旧 u p an d d i a be ti c m od e l 脚u p .仆e d ia l犯 ti c m ode lsw e 二i ndu c edbyi nj e c t i 鳍S T Z t h 功 u gh
12、v e nac aud al i s Tbe ex p re s s i onofV E G F ,T G F 一 p l a l ld FN in re 耐 t i s s u e we二as se s se d b y l m mun o h is toch e 而s try.The morP h o l o gi c alc h a n 罗 s ofre nal ti s s u e i n c l u d i n g th e c h a n 邵of b ase membra nein th e re n altubu l e an d E C Mwerec h e c k edth
13、ro u ghm i c ro sc o p y byPAS s ta in in g B l oc 刁gl u c ose , bl oc dc 二 at i n i neand 24 h o u rsurinep rote in we二a n a ly sed b y c h emi c almeth o d s 五 es u 如 ( 1 ) V E C F a ll d T G F 一 日 l w e 二sl i gh 街e x p re s sed i n th e re I1 alti s su e Ofn orm alc o n 如l rats a n d th e e 却 re
14、s s io n oftheminre nal t is s u e Ofd i a be ti c g ro u 声was inc, ased 二 m aJ 击 ab ly c o m p ari鸣w i thth ose ofp ro 卯 t i onaln o rmalc o n 闹 目 旧 u p s . ( 2 ) The ex p re s s ionofV E G r and TGF 一 p l w e re卯s i t iv e lyc o rr e la t i v e i n wee k l 6 . ( 3 ) W i thd e v e loPmen t ofd i a
15、be t icne 户ro p at h y , th e e x p re s s io n ofFN ino n altu b u l e s and 24u ri nep rote i n werei nc re a Sed 孚 a d u ally and h adbo t b Posit iv e o la ti o n w i thV E G F 助 d 兀F 一 p l , s pe c - t i v e l y .conc 绍 勿 .v E G r a n d TGF 一 日 l take p 斌 i n th e oc c u 耽n c e ofth e ea ri i e
16、 r an d la t e r 而c ro albu m i n una and re n alh y pe 枷 p h y ; V E G F and TG卜p l i n te ract a n d 卿moteth e d e v e lO p mentofth e di a b e ti c ne p h r 0 p at h y i n c o m mon 孟 妙, 口 刊 扮d i a bet e s ; re n alt i s s u e ; V E G F ; T G F 一 日 1 万方数据 1 4 江西医药 2 008 年 第4 3 卷 第 1 期 糖尿病肾 病(d 1
17、曲 e t i C n e p h ro p a t h i e s ,D N ) 是糖尿 病最严重和 最常见的慢性并发症之一, 其发病机制 复杂, 目 前尚 未完全阐明。 在高血糖、 氧化应激等多 种 损伤因 素作用下, 糖尿病肾 脏发生一系列病理改 变, 其中 各种细胞因 子在肾 纤维化发生发展中的 作 用已日 益受到重视。血管内皮生长因子(v as cu l ar e n d o t h e l i a l 脚wt h fa c t o r , v E c 玛又叫血管通透性因 子。 近来研究发现 , v E G F 可能是糖尿 病肾 病早期蛋 白 尿产生和肾 小球、 肾 小管肥大的 重要
18、 原因之一, 并 且强效致纤维化因子转化生长因子 一 p l(t rans fo rm- i n g g r o w t h fa c t o r b e t a 一 1 ,咒F 一 p l ) 参与 调节组织细 胞 V E G F 的 表达。 然而v E c r 和T c r 一 p l 在糖尿病肾 病中的相互关系目 前国内 外研究不多。本实验拟观 察糖尿病肾病大鼠2 一2 4 周间, v E c F 、 T c r 一 p l 和 纤连蛋白(fi b ro n ec t i n, F N ) 在肾组织的动态表达, 探 讨它们在D N 发展中的作用及相互关系。 , 研究对象与方法 1 . 1
19、 实验动物与分组: 雄性S D 大鼠7 0 只, 体重1 7 0 一2 009 , 由 上海实验动物中 心提供。 实 验动物随 机分 为5 组, 依病程长短分为( 1 ) A组(2周组) ; ( 2 )B组 ( 4 周组) ; ( 3 ) c 组( 5 周组) ; ( 4 ) n组( 1 6 周组) ; ( 5 ) E 组( 2 4 周组) 。 每组分别 设有正常对照组和 糖尿病组。 其中正常 对照组6 只, 用N 表示; 糖尿病组8 只, 用 D M表示。均给予普通颗粒饲料, 饮自 来水。 1 .2 糖尿病模型的制备: 大鼠 在动物室饲养1 周后, 在乙 醚 麻醉 下, 注 射溶于p H 4
20、. 5 、 0. ol m ol 几的 无菌 柠 檬酸 一 柠 檬酸 钠缓冲 液的S T Z , 用量为55 m 吵9 , 于 注 射后4 8 h 尾静脉空腹采血测血糖 ( B ae r 公司Gl u - co m et e r4型血糖仪测定) ,凡血糖值大于或等于 16.7 m mo讥 的大鼠作为糖尿病大鼠。正常对照组在 乙醚 麻醉下, 尾静脉注射 无菌柠檬酸 一 柠檬酸钠缓冲 液。 1 .3大鼠的血、 尿及肾组织收集: 分别于糖尿病模型 复制成功后2 周、 4 周、 8 周、 16周、 24周处死各组大 鼠 。 处死前ld代谢笼收集24h 尿液, 记录 尿量。 处死 前禁食6 一s h ,
21、 麻醉后称重, 小心剥离股动脉并暴 露, 股动脉穿 刺采集血液, 于一 20 保存。 打开大鼠 腹 腔, 取下肾 脏, 去掉包膜及周围 脂肪组织, 称重, 肾 脏 均匀切为l m m 左右厚度的薄片, 于4 % 的中 性甲 醛 溶液固定后转移到P B S 溶液中保存供制作石蜡切 片用。 1 .4 免疫组织化学: 3 林 m厚肾组织石蜡切片, s A B c 法常规二甲苯脱蜡,梯度酒精水化。用 3 %的 H 必 2 1 O m in封闭 非特异性内 源性过氧化物酶, 微波 修复 抗 原, P B s 缓冲 液漂 洗, 正常山 羊血清 封闭室 温 放置4 o m i n ; 分别加人兔抗鼠v E
22、c F 、 T G r 一 p l 、 F N 一 抗4 过 夜, P B s 液 做阴 性 对照; 加生 物素 标记的 二 抗室 温 孵育40m in ; 滴加 链酶 亲和素 一 生物素 一 辣根 过氧化物酶( S A B c ) 室温放置4 0 m in , D A B显色, 苏 木 素 复 染。 v E G F 和T G F 一 p l 免 疫 组化 表 达程 度 计 算方法为 在高 倍镜( 4 00倍) 下计数10个视野的免 疫染色阳 性细胞数, 取均值; F N 免疫组化染色在显 微镜测微尺(0 .5网 形目 镜尺) 下计数十字交叉点与 F N阳 性染色表达 重合的点数, 计数10个
23、视野( 4 00 倍) , 取均 值。 1 . 5 形态学观察法: 以5 染色光镜观察肾小管基底膜 变化及细胞外基质沉积情况等的形态学改变。 1 .6 生化指标的 检测: 用氧化酶( G O D 一 P A P)法测血 葡萄糖, 碱性苦味酸 法测血肌醉, 考马斯亮蓝法测尿 蛋白, 均 按试剂盒 说明 书操作。 1 .7 统 计学处 理: 用s Pss l3 .0 统计软 件处 理数据, 计 量资料用 灯) 表示; 两组间资料显著差异性用 检 验表示; 用直线相关分析各指标的相 关性。 2结果 2 . 1 大鼠一般状况: S T Z 诱导的糖尿病大鼠模型复制 成功后, 糖尿病大鼠逐渐出现多饮、
24、多尿、 多食、 消瘦 等现象。 正常对照组则无 此变化, 体重明 显增加。 2. 2肾重(K 叨、 体重(B 助及肾重体重比(K w lB 哪的 变化: 正常组大鼠 从2 一24周体重明显增加, 而糖尿 病组大鼠 随着 病程的 进展, 体重未见明显 增加, 甚至 有所下降, 且与同时间正常对照组大鼠 相比 有显著 差异 (P0 .0 1 ) 。 见表1 。 2. 3 血尿生化指标( 血糖、 血肌配和2 4 h 尿蛋白) 的 检测: 大鼠 在注射S T Z 4 8h后, 血糖即明显高于正常 对照组( P0. o l), 且在整个实验过程中, 血糖持续在 高水平; 血肌醉和24h 尿蛋白 量糖尿病
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- 糖尿病 大鼠 组织 VEGF TGF 动态 表达 意义
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