红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠TGF-β及Ⅰ型胶原表达的影响.pdf
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1、第2 6 卷第3 期 2 0 0 9 年6 月 医学研究与教育 M e d i c a lR e s e a r c ha n d E d u c a t i o n V o L2 6N o 3 J u n 2 0 0 9 红花黄色素对实验性肾问质纤维化大鼠T G F 一卢及I 型胶原 表达的影响 高燕1 ,陈航,贾海红1 ,袁爱军- ,袁鲁亮2 。王茹欣1 ( 1 河北大学附属医院,河北保定0 7 1 0 0 0 ;2 6 6 1 6 5 部队医院,河北保定0 7 1 0 0 0 ) 摘要:目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠T G F 一口及I 型胶原表达的影响,并探讨其肾脏保护机制
2、。方法 4 5 只雄性S D 大鼠,随机分为假手术组( A 组) 、单侧输尿管梗阻( U n i l a t e r a lu r e t e r a lo b s t r u c t i o n ;U U O ) 组( B 组) 、U U O + 红花黄色 素治疗组( C 组) ,各1 5 只。C 组红花黄色素5m s k g d ,造模术前1 天开始腹腔注射给药,各组术后1 0 d 处死大鼠,处死后取术 侧肾组织行H E 、M a s s o n 染色,转化生长因子( T r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - - f l ;T G F
3、- f 1 ) ,I 型胶原( C o l l a g e nI ,C o lI ) 免疫组化检 测、结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果B 组、c 组可见明显肾间质纤维化的病理改变。c 组与B 组相比,肾间质 纤维化病变程度较轻。免疫组化结果提示:c 组与B 组相比T G F J B l 、C o lI 表达减少( P 如O Io 结论注射用红花黄色素对 大鼠肾问质纤维化有保护作用,这种作用可能是通过抑制T G F 一届的表达,减少I 型胶原合成的作用实现的。 关键词:红花黄色素;肾间质纤维化;1 F - 口;I 型胶原 中图分类号:R 一3 3 2文献标志码:A文章编号:1 6 7 4
4、 - 4 9 0 X l2 0 0 9 ) - 0 3 0 0 l l _ 0 3 E f f e c t so fS a f f l o wY e l l o wi n j e c t i o no nT G F - 母a n dC o lIi nr a t sw i t hr e n a li n t e r s t i t i a lf i b r o s i s G a oY a h I , C h e nH a n g I , J i aH a i h o n 9 1 ,e ta 1 ( T h eA f f i l i a t e dH o s p i t a lo f H e b
5、 e iU n i v e r s i t y ,B a o d i n g0 7 1 0 0 0 ,C h i n a ) A b s t r a c t :O b j e c t i v eT oo b s e r v et h ee f f e c t sa n dm e c h a n i s mo fS a f f l o wY e l l o w ( S Y ) o nT G F 一口a n dC o lI i n r a t sw i t hr e n a li n t e r s t i t i a lf i b r o s i s M e t h o d s4 5 m a l
6、 es p r a g u e - d a w l e yr a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o3 g r o u p s :s h a m - o p e r a t e dg r o u p ( A ) t h eU U Om o d e lg r o u p ( B ) a n dt h et r e a t m e n tg r o u pt r e a t e dw i t hS a f f l o w Y e l l o wi n j e c t i o n ( C ) S a f f l o wY e U o wi n
7、j e c t i o n5 m g k g dw a sa d m i n i s t e r e dt or a t st h r o u g ha b d o m i n a lc a v i t y1 d a yb e f o r et h es u r g e r y K i d n e y sw e r ec o l l e c t e da f t e r1 0d a y s H i s t o l o g i c a lc h a n g e sw e r ea l s oo b s e r v e dw i t hH E a n dM a s s o ns t a i n T
8、 G F - f l 、C o l1w e r ee x a m i n e dw i t hi m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n g R e s u l t sM a r k e dr e n a l i n t e r s t i t i a lf i b r o s i sc h a n g e sw e r ef o u n di ng r o u pBa n dg r o u pC T h el e s i o na r e ai nk i d n e y so fg r o u pC s i g n i f i c a
9、 n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h a to fg r o u pB ( P 0 0 1 ) B yu s i n gi m m u n o h i s t o l o g i c a ls t a i n i n g ,t h e p r o t e i nl e v e lo fT G F 一筋a n dC o lI i nBg r o u pw a sv a r i o u s ,i ng r o u pCt h ep r o t e i nl e v e lo fT G F - f l la n dC o l1 w a
10、ss i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a nt h a to fg r o u pB ( P 0 0 1 ) C o n c l u s i o nS a f f l O WY e l l o wc o u l da m e l i o r a t er e n a l i n t e r s t i t i a lf i b r o s i si nr a t s ,w h i c hm i g h tb er e a l i z e db yr e d u c i n gt h ee x p r e s s i o no ft r a n s f o
11、 r m i n gg r o w t hf a c t o r 一3 , a n dr e d u c i n gc o l l a g e nI p r o t e i ns y n t h e s i s K e yw o r d s :S a f f l o wY e H o w ;r e n a li n t e r s t i t i a lf i b r o s i s ;T G F - f l ;C o lI 红花黄色素是红花中多种水溶性有效成分的 混合物,属查尔酮类有效部位群。多年来,研究发现 其具有扩张冠状动脉、抗血栓、抗动脉粥样硬化、降 血脂、耐缺氧等药理作用。本实验通过
12、U U O 建立大 收稿日期:2 0 0 9 - 0 2 2 2 作者简介:高燕( 1 9 7 6 一) ,女,河北保定人,主治医师。 鼠肾间质纤维化模型,观察红花黄色素注射液对 其病理过程的影响,探讨其肾脏保护机制。 1 材料与方法 1 1 实验动物及分组清洁健康雄性S D 大鼠4 5 只( 购自河北医科大学动物实验中心) 体重1 8 0g - 一l l 万方数据 3 期医学研究与教育 第2 6 卷 2 2 0g 。大鼠适应性饲养l 周,随机分为:假手术组 ( A 组) ,U U O 组( B 组) ,U U O + 红花黄色素治疗组 ( C 组) 各1 5 只。 1 2动物模型制备大鼠经2
13、 戊巴比妥 ( 5 0m g k g ) 腹腔注射麻醉后,仰卧同定在手术台 上,腹部皮肤消毒,铺无菌手术巾。左侧腹肾区切口 2c m ,切开腹壁各层,进入腹腔。在左腹壁辨认输尿 管后,分离输尿管,于肾盏处和肾下级处分别结扎 输尿管,但并不离断输尿管,使左侧完全梗阻后逐 层缝合腹壁切口。假手术组开腹后不结扎输尿管, 然后缝合腹腔作为对照I l l 。 1 3 给药方法C 组在术前1 天开始给予红花 黄色素注射液( 浙江永宁药业股份有限公司,) ( 5r a g k s d ,放于适量生理盐水中腹腔注射) 至术 后第9 天,A 组及B 组予等量生理盐水腹腔注射。 实验期间大鼠自由进食水。 1 4
14、标本收集及制备术后第l O 天断头处死大 鼠,处死后切取左肾,冠状位剖开,置于4 多聚甲 醛同定1 2h ,制备石蜡切片。 1 5 检测指标及方法 1 5 1 肾小管间质的病理改变石蜡切片行H E 、 M A S S O N 染色,光镜下观察肾小管间质病变程度, 测量皮质相对间质容积值。 1 5 2 免疫组织化学检测 1 5 2 1 试剂鼠抗C o lI 多克隆抗体、鼠抗C O X 一 2 多克隆抗体、鼠抗T G F 一崩多克隆抗体、S P 免疫 组化试剂盒( 均购自北京中山生物有限公司) 1 5 2 2 方法载玻片A P E S 防脱片处理,石蜡切 片脱蜡入水,3 甲醛一双氧水,消除内源性过
15、氧化 物酶的活性( I 型胶原标本组用l 胰酶室温消化 4 5m i n ) 。1 0 山羊血清封闭,室温3 0m i n ,封闭非 特异性结合位点。加入一抗:兔抗鼠I 型胶原( 稀释 度1 :5 0 ) ;兔抗鼠T G F 一口。( 稀释度1 :5 0 ) ,4 孵育过 夜。阴性对照用P B S 代替一抗。加入二抗:生物素 标记的羊抗兔二抗工作液,加入三抗:辣根酶标记 链酶卵白素工作液,3 7 孵育3 0m i n 。D A B 显色 5m i n ( 显微镜下控制显色时间) ,终止显色。苏木素 复染1r a i n ,l 盐酸酒精分化,脱水、透明,封片。 1 5 3 图象分析、结果判定 1
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