糖尿病大鼠肾组织Nephrin mRNA与Podocin mRNA表达的研究.pdf
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1、第2 5 卷第6 期河北职工医学院学报 V o L2 5N o 6 2 0O8 年1 2 月J o u m a lo fH e b e iM e d i c a lC o l l e g ef o rC o n t i n u i n gE d u c a t i o n D e c 2 0 0 8 糖尿病大鼠肾组织 研究 基础医学 N e p h r i nm R N A 与P o d o c i nm R N A表达的 王咏梅- ,刘占全- 。樊文萍2 ,张瑞芳,俞广程4 ,李英s ( 1 河北大学附属医院肾内科,河北保定0 7 1 0 0 0 ;2 清苑县人民医院,河北清苑;3 河北大学
2、附属医院感染科,河北保定 0 7 1 0 0 0 ;4 河北大学附属医院检验科,河北保定0 7 1 0 0 0 ;5 河北医科大学第三医院肾内科,河北石家庄0 5 0 0 0 0 ) 摘要:目的观察糖尿病大鼠肾组织中n e p h d nm R N A 、p o d o c i nm R N A 蛋白表达与分布,探讨n e p n 和p o d o c i n 分子在糖尿病 肾病蛋白尿中的可能作用。方法采用健康雄性s p 聊弘e D 洲l e y 大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组,第4 、8 周任取6 只大鼠,收 集血、尿标本测定生化指标。大鼠。肾组织分别作组织学、超微结构、应用逆转录一聚合酶
3、链反应( R T P C R ) 观察n e p h 咖m R N A 、 p o d o c i nm R N A 在肾组织中的表达。结果在4 周、8 周,糖尿病组血糖、肌酐清除率、尿白蛋白排泄率较正常对照组均有不同程 度的升高。糖尿病组大鼠肾组织鹏p h r i nm R N A 和P o d o c i nm R N A 和蛋白表达较正常对照组明显降低。尿白蛋白排泄率与 n e p h r i n 、p o d o c i n 表达量呈负相关,n e p h r i n 与p o d o c i n 表达量呈正相关。结论糖尿病大鼠肾小球上皮细胞足突n e p h r i n 、p o d
4、 o c i n 蛋白表达的减少可能是糖尿病肾病蛋白尿发生的机制之一。 关键词:糖尿病肾病;N e p n ;P o d o c i n ;糖尿病大鼠;蛋白尿 中图分类号:R 一3 3 2文献标志码:A文章编号:1 0 0 8 6 6 9 2 【2 0 0 8 ) 嘶- 0 0 0 1 加3 T h e 睬p r 嘟i 仰o fp r o t e i na n dm R N A o fn e p h r i I la n dp o d o c i no fm a b e U cg l o m e m l o p a t h yi nS T Z i n d u c e d d i a b e t
5、 i cr a t s W a n gY o n g m e i ,“uZ h a n q u a n ,F a nW e n p i n ge ta 1 ( D e p 硎脚m 矿帅 r 0 抛y ,kA 历Z i m e d 日。印i 删矿肌6 e i 如e 瑙渺,胁6 P i 占击n g0 7 1 0 0 0 ,吼i 眦) A b s t m c t : o b j e c t i V e T oi n v e s t 培a t et h e c h a n g e s o ft h e e x p r e s s i o n o f n e p h r i n a n dp o d o
6、 c i no f d i a b e t i c g l o m e m l o p a t h yi nS T Z i n d u c e dd i a b e t i cI a t sa n dt h ep o s s i b l eI D l eo fp o d o c i ni np r o t e i n u r i a M e t h o d sH e a l t h y m a l eS p r a g u e d a w l e yn n sw e r eI a n d o m l yd i V i d e dt o2g m u p s :n o n n a lc o n n
7、 0 lg r o u pa n dd i a b e t i cg r o u p A t4a n d 8w e e k sa f t e rt h eo n s e to fd i a b e t e s ,b l o o dg l u c o s e( B G ) ,s c r e a t i n i n ec l e 猢c er a t e( C c r ) ,2 4u r i n a r ya l b u m i n e x c r e t i o nr a t e( U A E R ) w e r em e 鹊u r e d ,T h er e n a lc o r t i c a
8、 lt i s s u e sw e r eo b t a i n e da n d u s e df o rH Es t a i n i n g , e l e c t m nm i c r o s e o p y T h ee x p r e s s i o no fp r o t e i na n dm R N A “n e p h r i na n dp o d o c i ni nr e n a lc o r t i c e sw e r es e m i q u a n t i t a t i v e l ym e 鹊u r e dw i t hR T P C R R e s I
9、l l t s A t4a n d8w e e k s ,b I o o dd u c o s e( B G ) ,s c r e a t i n i n ec l e a r a n c e r a t e ( C c r ) ,2 4 面n a r ya l b u m i ne x c r e t i o nm t e ( U A E R ) w e r eh i g h e ri nd i a b e t i cg m u pt h 锄i nn o 咖a lc o n t m lg m u p ( P 1 6 7m m o 讥作为糖尿病 大鼠成模标准。 1 2 检测指标在实验第4 、8
10、 周末,留取血尿标本测 定血糖、血尿素氮、肌酐、尿肌酐、2 4 h 尿蛋白量、并 计算肌酐清除率。留取肾组织应用R T P C R 检测 n e p h r i nm R N A 、p o d o c i nm R N A 的表达。 1 3 试剂主要试剂和药物:链脲佐菌素( 美国 s i g m a 公司) ,T r i z o l 试剂( 美国I n v i t m g e n 公司) p o d o c i n P C R 引物,n e p 肺n P C R 引物( 上海生工生 物技术公司) 。 1 4 R T P C R 检测肾皮质n e p h r i nm R N A 、p o d
11、o c i n m R N A 的表达n e p h r i n 上游引物序列为:5 一c t ga c t g g gc t g 姐gc c tt c t 一3 下游引物序列为:5 一a a ga g c a c ag g ca g ca g gg g 一3 ;p o d o c t i n 上游引物序列为:5 一 g c ag c ca c g 殍a 殍ga a t 昏一3 ,下游引物序列为:5 一 c a gg a ag c ag a t 殍cc c a 殍一3 ;以B a c t i n 用作内参 照,大鼠p a c t i n 上游引物序列为:57 一g c ca t gt a c
12、昏a g c ca t cc a 一3 ,下游引物序列为:5 一g a ac c ge t ca t t g c cg a ta g 一3 ,以目的产物与p a c t i n 的积分光密度 比值表示m R N A 相对含量。 1 5 统计学处理所有计量资料用均数标准差 ( z s ) 表示,组间比较采用方差分析。s P S S1 1 0 软件 进行数据处理。 2 结果 2 1 各组大鼠血糖、肾重体重、2 4h 尿微量白蛋白 排泄量和C c r 的变化实验后4 、8 周D M 组大鼠血 糖值均高于同期N 组大鼠( P 均 0 0 5 ) ;D M 组肾重 体重明显高于N 组大鼠( P 0 0
13、5 ) ,D M 组大鼠C c r 逐 渐升高,4 周后明显高于N 组( P 0 0 5 ) 。D M 组2 4 小 时尿微量白蛋白排泄量较N 组增多( P 0 0 1 ) 。 一2 一 表l 各组大鼠血糖、肾萤体重、C c r 、2 4 小时尿微量白蛋白排 泄量变化( 互蜘) 与N 组比较I P O 0 5 2 2 各组大鼠肾脏p o d o c i nm R N A 、n e p h d nm R N A 的表达( 表2 ) 大鼠肾脏p o d o c i nm R N A 、n e p h n m R N A 以B a c t i n 作为内参物调整后进行半定量分 析。糖尿病组大鼠肾脏p
14、 o d o c i nm R N A 、n e p h r i n m R N A 表达显著低于正常对照组( P 0 0 5 ) 。 表2 两组间、n e p h r i n 、p o d o c i n 蛋白表达的相对量( 二蜘) 与对照组比较:P O 0 5 2 3 尿白蛋白排泄率与p o d o c i n 、n e p h r i n 表达量相 关性相关分析发现:尿白蛋白排泄率与p o d o c i n 、 n e p h 曲表达量呈负相关( 鼻一0 。6 2 4P 0 0 0 1 ) p o d o c i n 与n e p h r i n 表达量呈正相关( r = - 0 6
15、5 2 P O 0 0 1 ) 。提示随着p o d o c i n 、n e p h r i n 表达量的减少, 尿白蛋白排泄增多。 3 讨论 糖尿病肾病蛋白尿发生、发展与肾小球滤过屏 障的结构和功能改变有着密切的关系。肾小球滤过 屏障自内而外分为三层:多孔的血管内皮细胞、网状 结构的肾小球基底膜以及位于外侧的足细胞层。足 细胞象梳子一样将毛细血管围住,和连接足突的裂 孔膜一起形成了连续的被子覆盖在毛细血管襻外【l J 。 足细胞足突间有2 0 5 0n m 宽度的裂孔,由极薄的 裂孔膜相连,其超微结构似“拉链样”的结构,含有 4n m 1 4n m 的微孔,略小于白蛋白的大小,因此认 为裂
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