细胞免疫在异种胰岛移植排斥反应中的作用.pdf
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1、 6 7 2C h i -,. e I o u ma l o f C o a l l a d , - Me d i u n e J u l y 2 0 0 3 . V o 1 . 6 , N o . 7 文童编号1 0 0 7 一9 5 6 4 ( 2 0 0 3 ) 0 7 一 0 6 7 2 一0 2 细胞免疫在异种胰岛移植排斥反应中的作用 0 6 7 0 0 0 河北省承德市, 承德医学院附属医院儿外科王计辰李长东. 王秀琴刘 岩 关挂词 细胞免疚 异体移枝: 排斥 反应; 特尿病小戒 猪肤岛 中图分类号 H一 3 3 2文献标识码A 报然胰岛移植作为治疗 型糖尿病的一种手段已获成 功
2、川, 但不 能长期维 持其 效果 主 要 是移植后排斥反应。为了 更深人的了解T细胞亚群在胰岛异种移植中的作用, 我们把 成年猪胰岛分离纯化后移植给经链服佐菌素( S T Z ) 诱发的糖 尿病小鼠 , 探讨细胞免疫在排斥反应中的作用。 1 材料与方法 1 . 1 实验动物昆明系小鼠1 9 -2 坛, 由( 吉林大学动物部 提供) , 成年杂种猪( 长春市郊区屠宰厂提供) 。 1 . 2 主 要试剂S T Z ( 购于s ig m a 公司) 。抗小鼠C D 4 , C D 8 单克隆抗体 ( 北京大学基础医学院免疫系单克隆抗体研究 室) 。胶原酶( 由吉林大学地方病研究所生化教研室提供) 。
3、 1 . 3 搪 尿病摸ty 的制备fz l雌性昆明系小鼠 , 体重1 8 一 2 1 g 注药前 尿糖阴性, 血糖正常, 腹腔内一次性注人S T Z 2 2 0 - g / k g , 2 - 3 d 后出现糖尿病症状, 衷现多饮、 多食、 多尿。第三天 开始剪尾测定血株及枪查尿糖, 连续2 次血糖高于2 0 m m o l l 1 . , 并待续 1 0 d以上。 1 . ; 猪胰岛细胞的 分离纯化切取猪胰腺, 放人含小牛血清 的 冷H a n k s 液中 , 快速返回实验室。剔除胰腺脂肪、 浆膜、 胰 管及血管, 剪成0 . 2 - x 0 . 2 - 碎片, 加人0 . 5 -1 /
4、 1的胶原 酶在3 7 水温中 反应1 5 . i . , 加人2 倍的H a n k s 液终止反应, 离心后将消化过的组织制成悬液, 经F ic o ll 密度梯度离心纯 化收集胰岛细胞。将腆岛悬液制成1 5 0 0 个/ m l ,注射于小 鼠 腹腔 对照 组注射l m l H a n k s 液, 移植后自 由进水, 进食, 分 笼饲养。 1 . 5 T细胞亚群测定 取移植有效后, 排斥反应发生早期及 晚 期血2 0 0 讨 , 用美国山血er公司的流式细胞仪计数, 获取 5 0 0 。 个琳巴 细胞的百分率。 1 . 6 实验分组搪尿病空白对照组 1 6 只, 移植对照组 1 7 只
5、, 猪胰岛细胞移植组3 8 只。 1 . 7 统计方法所有数据均以( x1 s ) 表示, 组间两个样本 均数差异用 检骏比较 P 0 . 0 5 为有差异。 2 结果 2 . 1 猪腆岛 细胞的活率及收获量猪龄 8 一1 0 个月, 经用 v i 型胶原酶消化, F i- 1 1 密度梯度离心胰岛的收获盘 ( 2 1 6 7 0 . 8 3 士 1 1 8 8 . 1 1 ) 个 / 9 胰腺。经双硫赊染色后在光学 显徽镜下见胰岛为棕红色 经台盼兰染色绝大部分染色阴性。 胰岛细胞存活率为( 8 5 . 8 3 1 2 . 0 4 ) %0 2 . 2 移植对照组及胰岛移植组移植前后血搪的变化
6、 见表 t o 2 . 3 移植后移植物功能存活时间及平均功能存活时间移 植后从第三天开始, 小鼠 血糖即明显下降, 移植物存活fi l 效时 间5 一1 2 d , 平均功能存活时间( 7 . 1 0 士 1 . 8 7 ) d 移植后3 d 取 血测定移植有效后细胞免疫指标。5 1 1 发生排斥反应8 只, 7 d 发生排斥反应1 2 只, 9 d 发生排斥反应 9 只, l i d 发生排斤反 应 7 只, 1 2 d 发生排斥反应 2 只。 2 . 4 各组间T细胞亚群的变化见表2 e 表 1 移植前后血梢变化吸 二t s . -1 / L ) 组别 移植对照组 胰岛移植组 移植前血糖
7、 2 5. 9 2土2. 8 8 2 4. 9 2生2. 0 8 移植后血糖 2 6. 1 9步3. 0 5 5. 7 7士1. 3 8 l73S 胶岛移植有效后与移植前血锗比 较. P 0以 表2 各组间T细胞亚群的变化( x士 : , %) 小鼠分组n C D 4CD日 C D 4 / C D R 移植有效小鼠 移植对照小鼠 排斥早期 排斥晚期 : 4 3. 9 n生6 9 O1 9. 4 0土1 . 7 1 2. 2 6 9 9土3. 8 4 7 8土6. 6 7一 : 21巧 4 3. 4 9士3. 8 9 9 5 7. 8 4士6 . 0 6 1 2 5 3 . 9 1 士6 . 6
8、 7 2 3 . 9 8士2 . 8 0 2 . 2 5 排斥反应发生早期 C D 4 + 细胞与移植有效比较, 尸 0 . 0 1 , 排斥反应发生晚期。 M . C D 8 + 细胞与移植有效比较, P 0 . 0 1 , 排斥早期为排斥3 d 测定, 排斥晚期为排斥 1 0 d 测 定 3 讨论 胰岛同种移植和异种移植的排斥反应都有细胞免疫和体 液免疫的参与, 但反应程度与持续时间及参与成分有差别, 异 种 移 植 的 排 斤 反 应 更 为 强 烈 。 F r ie d m e n 3 1 将 猪 胰岛 移 植 给 重 组免疫活性缺陷小鼠纠正高血糖状态达5 周, 在移植前应用 体外刺激
9、的人外周血单核细胞, 观察到人的C D 4 渗人到移植 物周围. 将人的C F A T细胞预先输入更易引起急性细胞排 斥。 J a n 14 1 将猪胰岛移 植给正 常及r 一 干扰家缺陷的 糖尿病小 鼠, 证明 异种移植的破坏发生在移植后1 周内, 伴随强烈的细 胞浸润, 包括巨噬细胞, C D 4 细胞和嗜酸细胞。 只有少量 c m, 细胞。 R i v e r a n J 5 1 用N O D小鼠 和B a L h / l 小鼠的脾细胞 在体外观察对猪胰岛细胞的反应, 当C D 4 细胞被阻断后, 脾 细 胞就不再增殖。M a r c h e t t i e l 在猪小鼠 胰岛 移植实验
10、中 , 胰 岛细胞在3 7 1 v 培养 l d , 其发生排斥反应的平均时间为9 d , 而 使用1 周C D 4 抗体组的平均时间为4 3 d . 观察显示小鼠 外周血在发生排斥反应早期C D 4 T细胞 有明显升高, 随着排斥反应的加重, C D 8 十 T细胞也明显升高, 说明在胰岛异种移植中细胞免疫起主要作用且作用迅速。 C I A和c m 分子能增强T C R一 C D 3 复合体对M H C抗原的 结合力, 它们是信息传导的辅助因子。C D 8 - T细胞要求移植 吉林大学第二医院 中国煤炭工.比 送学杂志2 0 0 3年7月第6卷第7期 物表达M H ( 1 类抗原并需C D
11、4 T细胞辅助, 由于一般移植 物中多数细胞大童表达的 链 MH C I 类抗原, 月此只要有 C l k l 细胞辅助 C D S 细胞无疑是效应阶段中 最主要的, 以细 胞介导的特异性细胞毒方式直接毁坏移植物的效应细胞。而 C FA 细胞要求移植物表达MH C I I 类抗原, 并通过多种途径 发挥效1 ,; . 4 参考文献 I ) S g n i m , 一 S P . G e n e t ic a ll y m o d i f ie d a n im a l o r g a n , f o r h n : n a : : plan-n-1. Wo r d j s u r g , 1
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- 细胞 免疫 胰岛 移植 排斥 反应 中的 作用
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