结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别价值探讨.pdf
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1、参;滁_ - 巷。 结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别价值探讨 陈俊林1 ,顾欣荣2 ,顾德林1 ,施军卫1 ,王小平2 ( 1 南通市肺科医院呼吸内科,江苏南通2 2 6 0 0 3 ;2 南通市疾病预防控制中心,江苏南通2 2 6 0 0 6 ) 中图分类号:R - 3 3 1文献标识码:A文章编号:1 0 0 6 - 2 0 8 4 ( 2 0 0 9 ) 1 8 - 2 8 4 7 - 0 2 摘要:目的探讨结核分枝杆菌胶体金法对分枝杆菌菌型快速鉴别的价值。方法 采用结核分 枝杆菌胶体金法诊断试剂和传统菌型鉴定实验方法。对1 3 1 株分枝杆菌临床分离株进行鉴别并进行 比较。结
2、果采用胶体金法快速鉴定试剂,2 3 株非结核分枝杆菌临床分离株检测结果全部阴性,1 0 8 株结核分枝杆菌临床分离株有1 0 7 株阳性,该试剂快速鉴定结核分枝杆菌敏感度为9 9 1 ,特异度 为1 0 0 。肢体金法植出结核分枝杆菌所需时间平均为9 9d ,传统方法所需时闻平均为2 8 2d ,二 者间差异有统计学意义( P 0 0 5 ) 。结论结核分枝杆菌胶体金法快速诊断试剂盒鉴别结核分枝 杆菌与非结核分枝杆菌。方法简便、快速,是分枝杆菌菌型鉴别的有效方法。 关键词: 免疫色谱法;单克隆抗体;快速诊断;M P B 6 4 T h eV a l u eo fC o l l o i d a
3、lG o l dM e t h o di nR a p i dI d e n 衄c a t i o no fM y c o b a c t e r i n mS t r a i n sC H E NJ u n 1 讥,c u X i n m n 9 2 ,G U D e l i n l ,S i l lJ u n “ e i l ,W A N GX i a o - # n 9 2 ( 1 D e p a r t m e n to f R e s p i r a t o r y M e d i c i n e , N a n t o n gP u l m o n o l o g i cH o s
4、 p i t a l ,N a n t o n g2 2 6 0 0 3 ,C h n a ;2 N a n t o n gC e r 地r f o r 历$ “ C o n t r o la n dP r e v e n - t i o n ,N a n t o n g2 2 6 0 0 6 ,C h i n a ) A 呐t H c t :o b j e c t i v eT od i s c u s st h ev a l u eo fc o l l o i d a lg o l dm e t h o di nr a p i di d e n t i f i c a t i o no f
5、M y e o b a c - t e r i u ms t r a i n s M e t h o d sAt o t a lo f131c l i n i c a li s o l a t e so fm y c o b a e t e r i u mt u b e r c u l o s i sw e r et e s t e db yc o l l o i d a lg o l dd i a g n o s t i cr e a g e n t sa n dc o m p a r e dw i t ht r a d i t i o n a le x p e r i m e n t a
6、lm e t h o d s R e s u l t s2 3c l i n i c a li s o - l a t e so fn o n - M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i sw e r ea l ln e g a t i v eb yc o l l o i d a lg o l dr e a g e n tt e s tr e s u l t s ,a n d1 0 7w e r e p o s i t i v ea m o n g1 0 8c l i n i c a li s o l a t e so fM y c o b
7、 a c t e r i u mt u b e r c u l e s i su s i n gc o l l o i d a lg o l dr e a g e n tr a p i di d e n t i f i - c a t i o n T h es e n s i t i v i t yr a p i di d e n t i f i c a t i o no fM y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i sW a g9 9 1 ( 1 c r 7 1 0 8 ) ,w h i l es p e c i f i c i t yw a
8、 s1 0 0 ( 2 3 2 3 ) T h ea v e r a g et i m ew 9 9dt op i c k so u tt h eM y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i se o m p a r e db yc o l l o i d a lg o l dd i a g n o s t i cr e a g e n t s 。w h i c hw a ss i g n i f i c a n t l ys h o r t e rt h a nt h a tb yt r a d i t i o n a lm e t h o d
9、 s w i t ha v e r a g et i m eo f2 8 2d a y s C o n c l u s i o nC o l l o i d a lg o l dm e t h o di ss i m p l ea n dr a p i di ni d e n t i f i c a t i o no f M y c o b a c t e r i u mt u b e r c u l o s i s ,w h i c hi s8 I Ie f f e c t i v ew a yt oi d e n t i f ym y c o b a c t e r i u ms l r
10、m n s K e yw o r d s :I m m u n ec h r o m a t o g r a p h y ;M o n e c l o n a la n t i b o d y ;R a p i dd i a g n o s i s ;M P B 6 4 结核病的控制关键在于早发现和早治疗,临床 非结核分枝杆菌肺病的发病率有逐年提高的趋势, 而非结核分枝杆菌的药敏结果往往和结核分枝杆菌 复合群有很大的区别J 。在结核的确诊中,必须进 行患者痰的结核菌的培养鉴定。传统分枝杆菌菌型 鉴别耗时长、操作复杂。特异性的核酸探针检测鉴 定方法需要昂贵的设备和试剂,难以在日常的检查 中推广。
11、本实验利用结核分枝杆菌分泌的M P B 6 4 特 异性蛋白旧1 对结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌进行 鉴别。 1 材料与方法 1 1 实验对象南通市肺科医院菌株库中1 3 1 株 分枝杆菌临床分离株。 1 2 试剂抗酸染液和改良酸性罗氏培养基为本 院实验室参照全国结核病细菌学检验规程自配,结 核分枝杆菌标准菌株H 3 7 R v ( 中国菌种保存中心) 作 为质控参考株,7 H 9 液体培养基及结核菌胶体金检 基金项目:江苏省预防医学科研课题( Y 2 0 0 7 3 4 ) 测试剂盒( 杭州创新生物检 控技术有限公司提供) ,7 H 9 液体培养基( 批号为 0 6 1 2 1 5 、0 7
12、 0 5 2 4 ) ;结核菌胶 体金检测试剂盒( 批号 0 7 0 5 0 1 、0 6 11 0 4 ) 。 1 3 实验方法 1 3 1 分枝杆菌涂片和培 养检查按照卫生部制定的 结核病诊断细菌学检验规 程1 有关规定进行。将痰 标本用4 N a O H 处理后, 吸取0 1m L 均匀地接种于 改良酸性罗氏培养基斜面; 碱处理后再行中和离心接种 于7 H 9 液体培养基中,放人 3 7 孵箱中进行培养,并且 每隔5d 观察一次生长情况,肉眼观察培养基底层有 颗粒状沉淀或浑浊时,涂片染色检查见抗酸杆菌后, 方可报告分枝杆菌培养阳性。 1 3 2 传统菌种鉴定实验结核分枝杆菌菌群 与非结核
13、分枝杆菌菌群鉴定实验:分枝杆菌菌株经 对硝基苯甲酸( P N B ,5 0 0 斗g m L ) 培养基生长、耐热 触酶实验,区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。 分枝杆菌菌种鉴定实验:按照中国防痨协会制定 的结核病诊断细菌学检验规程旧。的方法进行。 1 3 3 分枝杆菌胶体金法快速诊断实验 经7 H 9 液体培养基培养后( 5 1 5d ) ,吸取2 0 0 汕7 H 9 液体 培养上清液加入结核菌胶体金检测试剂盒的检测孑L 中,1 5r a i n 后观察结果。结果判定:检测区和控制区 均出现紫红色条带为阳性结果,在控制区出现紫红 色条带,在检测区未出现为阴性结果。控制区未出 现任何条带需重
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