《结直肠癌循环肿瘤细胞的检测方法及研究进展.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《结直肠癌循环肿瘤细胞的检测方法及研究进展.pdf(3页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、1 3 5 综述与讲座 结直肠癌循环肿瘤细胞的检测 方法及研究进展 朱自 满李世拥 关键词l 结直肠癌; 循环肿瘤细胞 【 中图分类号 R 7 3 5 文献标识码 A 文章编号 1 0 0 5 - 6 4 8 3 ( 2 0 0 8 ) 0 2 -0 1 3 5 -0 3 结直肠癌是我国常见的消化道恶 性肿瘤, 手术后的局部复发和远处转移 是影响5 年生存率的重要原因。越来越 多的研究认为存在于外周血、 骨髓、 腹腔 内、 淋巴结中的癌细胞是结直肠癌术后 局部复发和远处转移的重要因素, 检测 结直肠癌循环肿瘤细胞并探讨其临床意 义是当 前研究的热点之一川。本文综 述了各种常用的结直肠癌循环肿瘤
2、细胞 检测技术的基本原理及主要步骤。 一、 结直肠癌循环肿瘤细胞的检测 及其临床意义 1 8 6 9 年, A s h w o r t h 发现血液中的血 细胞同尸检发现的肿瘤细胞相似, 首次 提出循环肿瘤细胞( c i r c u l a t i n g t u m o r c e l l s , C T C ) 概念。随着免疫化学和分子 病理学技术引人肿瘤学, 尤其是P C R技 术的 诞生, 2 0 世纪8 0 年代以来出现了 大量关于 结直肠癌等实体 瘤循环肿瘤细 胞检测的报道。 目 前结直肠癌的临床分期主要是 T N M和D u k e s 分期标准, 它们都不包括 外周循环中肿瘤细
3、胞。一般认为, 结直 肠癌在转移的形成过程中, 肿瘤细胞在 到达远处器官之前必先在血液中循环, 虽然并非所有循环中的癌细胞均能存 活, 但循环性癌细胞阳性与肿瘤患者的 复发和不良预后密切相关。因此, 检测 结直肠癌患者的循环肿瘤细胞的状态, 可以作为现有的肿瘤临床分期方法的补 充, 从而精确肿瘤分期, 更准确判断预 后。检测结直肠癌患者循环肿瘤细胞的 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 4 7 1 7 0 0 ) 作者单位: 1 0 0 7 0 0 军普通外科中心 北京军区总医院全 状态可以区别部分早期患者, 采取针对 性的治疗措施。 二、 结直肠癌循环肿瘤细胞的检测 方法 结直
4、肠癌循环肿瘤细胞的检测方法 众多, 根据检测原理可分两大类: 细胞计 量术, 基于核昔酸的检测方法。前者包 括各种免疫细胞化学技术、 免疫一 磁珠 分离技术、 流式细胞术、 基于癌细胞大小 的分离方法等; 后者包括多聚酶链反应、 逆转录多聚酶链反应及其各种改进的技 术、 S o u t h e rn b l o t 杂交、 N o rt h e rn b l o t 杂 交、 肤配体筛选的技术等等。如果根据 检测前是否采用免疫磁珠等技术富集血 标本中的肿瘤细胞而将所有的检测方法 分富集和未富集两种。为了 避免使用单 一方法检测的种种弊端, 近年来文献中 多使用两种或多种方法联合检测。 1 .
5、免疫细胞化学方法: 免疫细胞化 学( i m m u n o c y to c h e m is tr y , I C C ) 是利用抗 原与抗体特异性结合的原理, 通过化学 反应使标记抗体的显色剂 ( 荧光素、 酶、 金属离子、 同位素)显色来确定细胞内 抗原的成分( 主要是多肤和蛋白质) , 对 其进行定位、 定性及定量的研究。K o 等川采用全血聚蔗糖离心后, 收集所有 有核细胞于P B S 中重悬后, 取部分标本 于切片上离心2 m in , 干燥后梅一 格一 吉染 色, 同时还进行了抗 C E A的A P A A P 染 色, 结果可从 1 0 个有核细胞中检测到 1 0 3 个人结
6、肠癌细胞I S 1 7 4 T , 敏感度甚 至高于使用 R T - P C R的对照组。I C C 把 免疫反应的特异性、 组织化学的可见性 巧妙地结合起来, 借助显微镜( 包括荧 光显微镜、 电子显微镜) 的显像和放大 作用, 在细胞、 亚细胞水平检测各种抗原 物质( 如蛋白质、 多肚、 酶、 激素、 病原体 以 及受体等) 。然而I C C 需要所检测的 肿瘤细胞抗原较高的表达丰度, 而且镜 下对结果的观察和判读主观性较强, 这 些都限制了I C C 在结直肠癌循环肿瘤细 胞检测中的应用。所以目 前较少单独应 用传统的I C C方法检测结直肠癌外周血 循环肿瘤细胞。 2 . 免疫磁珠分离
7、技术: 免疫磁珠分 离( i m m u n o m a gn e t i c s e p a r a t i o n , I M S ) 技术 分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接 有磁珠的特异性单抗相结合, 在外加磁 场中通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附 而滞留在磁场中, 无该种表面抗原的细 胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗 结合而没有磁性, 不在磁场中停留, 从而 使细胞得以分离。免疫磁珠法分为正选 法和负选法: 正选法即磁珠结合的细胞 就是所要分离获得的, 细胞负选法即磁 珠结合不需要的细胞, 游离于上清液的 细胞为所需细胞。一般而言, 负选法比 正选法的磁珠用量大。磁珠大小约0 . 1
8、 - 0 . 4 5 m m , 磁珠包被了 生产的高质量 单抗。单独使用一种免疫磁珠可能会造 成白细胞的污染, 联用阴性和阳性两种 磁珠可减少白细胞的污染, 提高肿瘤细 胞的检测率。I M S 检测循环肿瘤细胞的 主要步骤就是在磁性分离器中分离出肿 瘤细胞后, 可以 进行涂片后 H E 染色, 计 算玫瑰花环形成率, 也可以上流式细胞 仪检测, 还可以采用P C R , R T 一 P C R等 方法检测t 3 - 4 1 o I M S 技术可起到富集肿 瘤细胞, 减少非特异性的干扰。而且富 集到的肿瘤细胞, 还可以进一步进行染 色、 核酸分析以及药物敏感试验。免疫 磁珠分离技术的局限性是
9、分离对细胞活 性有一定的影响, 且技术要求较高, 结果 与抗体的特异性密切相关。 万方数据 。1 3 6 3 。 流式细胞术: 流式细胞术( fl o w c y to m e try, , F C M ) 是 通过测量细胞的多种 参量来获取信息的。细胞参数分为结构 参量和功能参量两大类。 结构参量主要 用于描述细胞的化学组分和形态特征; 功能参量主要是描述细胞整体的理化和 生物特性。 流式细胞术检测结直肠癌循 环肿瘤细胞需要将针对肿瘤细胞标志物 的单克隆抗体结合荧光物质如异硫氰酸 荧光素(F I T C )等使肿瘤细胞染色, 然 后用流式细胞仪进行分析, 着色细胞即 被视为阳 性。 C o
10、h e n 等5 l 将结直肠癌患 者外周血I M S 富集后进行流式细胞术检 测, 结果可从每7 . 5 m l 外周血中检出2 个循环肿瘤细胞, 而且外周血中的循环 肿瘤细胞数量与肿瘤分期显著相关。流 式细胞术检测肿瘤细胞优点在于可在免 疫放大检测的同时进行癌细胞的形态定 量测定, 可以提供 D N A倍数性的关系, 可以进行进一步的分子学研究, 而且测 量速度快, 最快可在1 内计测数万个细 胞, 还可进行多 参数测量, 可以 对同一个 细胞做有关物理、 化学特性的多参数测 量。流式细胞术既是细胞分析技术, 又 是精确的分选技术。流式细胞术检测循 环肿瘤细胞的局限性: ( 1 ) 由于筛
11、检细 胞数目的限制, 该技术检测微转移的敏 感性一直受到质疑; ( 2 ) 缺乏规范的操 作方法, 因此, 不同文献报道的流式细胞 术检测循环肿瘤细胞的结果差异很大, 假 阳 性 率 从I %一 8 0 % 不 等 6 - 7 1 。 4 . 基于肤配体的癌细胞检测方法: 基于肤配体的 癌细胞检测方法是A g g a r - w a l 等 a ) 于2 0 0 5 年建立。由 于目 前各种 检测肿瘤外周血循环肿瘤细胞的方法都 是一次采血, 所以样本量有限, 增加检出 肿瘤细胞的难度, 设想如能连续从血中 捕获肿瘤细胞后再进行检测将提高检出 率。此方法不同于一般的检测技术使用 针对肿瘤细胞的
12、单克隆抗体同肿瘤细胞 结合, 而是采用经过筛选后的高亲和力 肤配体与循环肿瘤细胞选择性地结合, 适用于分布有这些肤配体的肿瘤细胞。 在P E C A树脂上合成组合肤库并筛选出 与恶性上皮细胞高度结合力的肤配体。 将肤配体固定在适合的检测装置如静脉 导管的表面而在体内, 也可固定在其他 装置表面而在体内外使用。A gg a r w a l 等 a l 报道了 适合恶性上皮细胞的肤配 体序列: Q M A R I P K R L A R H 。 并在体外模 型中成功检测了 L N C a P , P C一 3 , T S U , M C F 一 7 细胞系。基于肚配体的癌细胞 检测方法的优越性是可
13、持续取样, 因肿 瘤细胞间断释放人血的特点, 所以此方 法更容易捕获到更多的肿瘤细胞, 从而 避免了 其他方法一次取血的缺点。所使 用的特异性肤配体仅有1 2 个氨基酸, 免 疫原性低, 易于合成, 价格低廉, 性质稳 定, 可被固定到类似静脉导管等检测装 置的表面。虽然基于肤配体的癌细胞检 测方法是一种全新的方法, 且具有以上 优越性, 但是此方法操作较繁琐, 而且作 者所使用的肤配体仅在几个肿瘤细胞系 中验证, 目 前仅为实验研究阶段, 距临床 应用还有很长的一段距离, 文献报道所 筛选的肤配体序列是否适合结直肠癌细 胞, 需要进一步研究。 5 . 基于癌细胞大小分离: 基于癌细 胞大小分
14、离( i s o l a t i o n 妙s i z e o f e p i t h e l i a l t u m o r c e l l s , I S E T ) 是由V o n a 等9 2 0 0 0 年提出。I S E T的基本原理就是利用部 分肿瘤的肿瘤细胞体积较血粒细胞大, 使用过滤的方法得到肿瘤细胞, 进行染 色后观察, 还可以对过滤得到的肿瘤细 胞进行其他相关的分子生物学的研究。 I S E T 的基本步骤: 使用带刻度的1 2 孔 滤器, 滤器孔的 底部由直径8 Lm 的圆往 状的小孔组成。取 6 m l 的外周血标本 ( E D T A抗凝) , 使用过滤缓冲液 (
15、0 . 1 7 5 %皂角贰, 0 . 2 % 多 聚 甲醛, 0 . 0 3 7 2 % E D T A和 0 . 1 %牛血清白蛋 白) 按 1 : 1 0稀释, 室温下静置 1 0 m i n 后, 加人到过滤小孔中, 真空泵轻轻地抽 吸过滤。P B S洗过滤膜一次, 取出过滤 膜, 置于空气中干燥, 而后进行 H E染色 或梅一 格 吉染色, 再置于显微镜下观察。 V o n a等9 1 运用 I S E T分别检测了 H e p G 2 , H e p 3 B , M C F 一 7 , H e L a L N C a P 细胞株, 可从 1 m l 全血中检测到1 个上 述肿瘤细胞
16、。对照组以R T - P C R进行检 测, 后者未能检测出来。I S E T的优点: 简单方便, 可同时研究单个循环肿瘤细 胞的形态学、 免疫细胞学及遗传学特征。 I S E T 的局限性: 只适合部分肿瘤, 不适 合那些体积小于2 倍粒细胞大小的肿瘤 细胞, 况且同一患者的循环肿瘤细胞大 小也不一致, 所以很难做到检测出所有 的肿瘤细胞。 6 。 多聚酶链反应: 多聚酶链反应 ( p o l y m e r i s e c h a i n re a c ti o n , P C R ) 是在模 板D N A 、 引物和四种脱氧核搪核昔酸存 在下, 依赖于D N A聚合酶的酶促合成反 应。目
17、 前P C R技术已在临床及基础研 究中 得到了 极其广泛的应用。 P C R 技术 检测结直肠癌循环肿瘤细胞的基本原理 是以结直肠癌细胞的突变基因为标志 物, 从而判断是否存在肿瘤细胞。对于 结直肠痛循环肿瘤细胞, 目前主要的突 变基因是K一 r a s 或户3 基因和A P C 基 因突变。近年来有学者以此为标记物检 测了结直肠癌患者外周血的循环肿瘤细 胞。 H s i e h 等 1o 使用P C R一 S S C P检测 了1 1 8 例结直肠癌患者肿瘤组织和血清 中K 一 ,, p 5 3 基因和A P C 基因突变, 并 对扩增的基因组 D N A直接测序。H i b i 等U U
18、 对4 4 例 结直肠癌患 者进行寡核昔 酸错配检测, 确定了 血清中D N A的遗传 变异特征。其中 1 6 例肿瘤组织内K一 r a s 基因突变, 而其血标本中也检测到了 同 样的突变。1 0 例患者肿瘤组织内p 5 3 基因突变, 而其中7例患者血标本中也 检测到了同样的突变。 结合临床结果显 示 7例患者中 5例处于早期( P二 0 . 0 1 ) 。 在原发瘤有K一 、 或p 5 3 基因 突变的K一 r a s 或必 3 基因患者血清中 K 一 r a s 或p 5 3 基因突变, 在所有的结直 肠癌患者比例为2 3 %。结直肠癌患者 早期病例血清中出现高比 例的p 5 3 基因
19、 突变提示其可能作为检测的标志物。 x a r d i 砂,等 12 1 对结直肠癌K 一 r a g 基 因突变进行 P C R检测, 发现K一 r a g . d o n 1 2 突变是生存率降低和复发率增加 的相关因素。P C R技术检测循环肿瘤细 胞的弊端: 不能区分死亡的肿瘤细胞释 放到循环中的D N A , 由于D N A同R N A 相比 更稳定, 能持续存在于血液中, 因此 检测到D N A标志物提示体内有肿瘤并 不说明 存在有活性的循环肿瘤细胞。 7 . 逆转录多聚酶链反应: 逆转录多 聚酶链反应( r e v e r s e t r a n s c r ip t io n
20、P o 1 Y - m e r a s e c h a i n r e a c t i o n , R T 一 P C R ) 技术以 肿瘤和上皮组织中某种物质的 二 R I B A 为标志物检测结直肠癌循环肿瘤细胞d R T - P C R及其各种改进的技术目 前在 循环肿瘤细胞的检测中应用最广泛, 且 被认为是目 前检测循环肿瘤细胞最有效 的方法。R T一 P C R检测外周血循环肿 万方数据 1 3 7 瘤细胞一般程序: 取外周静脉血5 一 2 0 m l 不等, 如不使用免疫磁珠分离, 可直 接分离其中的有核细胞后提取总R N A 后进行 R T一 P C R , 其他各种改进的 R
21、T 一 P C R方法程序也大致如此。K o p r e s k i 等 13 首次采用R T 一 P C R 方法检测到黑 色 素 患者的血浆中酪氨酸酶的m R N A , 结果证明使用 R T一P C R方法检测外周 血中肿瘤细胞的 m R N A切实可行。近 年来出现了大量的文献以R T一 P C R及 与其相关的技术检测结直肠癌循环肿瘤 细 胞。 常用标志物有h T E R T , C K , C E A , E G F R的m R N A 1 6 一 2 0 , 还有一些较少见 的物质如D P E P I , A p o l i p o p r o t e i n A I 的 m R
22、 N A 。综合不同研究单位的结果表明 采用各种R T 一 P C R及其他各种改进的 R T - P C R方法, 使用不同的标志物, 一 般可从1 0 , 一 1 0 , 个无关细胞中检测出 一个肿瘤细胞。勿容置疑, R T 一 P C R及 其各种改进技术都是高敏感、 高特异性 的方法。然而它们都是以某个肿瘤标志 物的m R N A为标志物, 因此易受到假基 因的干扰、 组织特异性基因在非特异性 基因细胞内的非法转录等造成假阳性的 发生。还有循环肿瘤细胞间断释放人血 以及R N A易被R N A酶降解的特点均可 导致假阴性结果。这需要实验操作中采 取一些相应的预防措施: ( 1 ) 设置
23、阴性 和阳性对照组; ( 2 ) 设置内参对照, 验证 提取的R N A是否完整; ( 3 ) 取血时应弃 去一开始的数毫升标本, 以避免上皮细 胞污染, 因为目 前大多使用仅在上皮表 达的 物质的m R N A作为标志物; ( 4 ) 对 于每个标志物的检测, 要反复摸索出最 佳的P C R 反应条件, 以取得最佳结果。 8 . 多种方法的联合: 由于每种单一 方法都存在无法克服的局限性, 所以目 前检测 结直肠癌循环肿瘤细胞绝大多数 采用联 合多种方法检测。常见的有I M S + R T 一 P C R , I M S +实时 P C R , I M S + 巢 氏R T一 P C R ,
24、 R T一P C R+S o u t h e m b l o t 等 ( 14 - 19 1 。 结 果 表明多 种方 法的 联合可 提高检测的特异性和敏感性。 三、 结语和展望 结直肠癌循环肿瘤细胞对结直肠癌 患者的预后、 复发、 治疗的意义虽然还存 在很多争议, 但是仅就其检测技术而言, 这也是一个具有重要意义的课题。目前 之所以不同研究小组得出的结果差异较 大, 重要的原因之一是检测方法众多, 每 种方法缺乏一个标准的检测流程, 如采 血的时机、 部位、 量、 抗凝方式、 是否富 集、 采用何种方式检测以及从采集标本 到检测的时限、 P C R循环的次数等等, 还 有使用的标志物也不一致
25、。由于肿瘤细 胞的异质性, 单一标志物在不同患者的 表达水平也不一致, 而且, 单一标志物的 特异性也很有限, 最终还是需要联合多 种标志物以及联合采用多种方法检测。 随着人类蛋白质组作图的进展, 会发现 更多的预后意义的上皮标志物, 发展更 好的检测技术, 必将极大地提高结直肠 癌循环肿瘤细胞的检测效果。 参考文献 I ) P a n t e l K , A l i x 一 P a n a b i e r e s C . T h e c l i n i c a l s ig n if ic a n c e o f c ir c u la t in g t u m o r c e ll s J
26、 . N a t C l i n P r a c t O n c o l , 2 0 0 7 , 4 ( 2 ) : 6 2 -6 3 . 2 K o Y , K l i n z M , T o t z k e G , e t a l . L i m i t a t i o n s o f t h e 二 ,t r a n s c r i p t io n - p o l y m e r i s e c h a i n rea c ti o n me t h o d f o r t h e d e t e c t i o n o f c a r c i n o e m b ry o n i c
27、 a n t i g e n - p o s i ti v e t u m o r c e ll s i n p e r i p h e r a l b l o o d J . C l i n C a n c e r R e s , 1 9 9 8 , 4 ( 9 ) : 2 1 4 1 - 2 1 4 6 . 3 D o u a r d R , M o u t e re a u S , S e r r u V , e t a l . m - m u n o b e a d m u lt i p l e x R T - P C R d e t e c t io n o f c a r c i
28、n o e m b ry o n i c g e n e s e x p r e s s i n g c e l l s in t h e b l o o d o f c o l o r e c t a l c a n c e r p a t i e n t s J . C l i n C h e m L a b M e d , 2 0 0 5 , 4 3 ( 2 ) : 1 2 7 - 1 3 2 . 4 L l o y d J M , M c I v e r C M , S t e p h e n s o n S A , e t a l . I d e n t if i c a ti o
29、n o f e a r l y - s t a g e c o l o r e c t a l c a n c e r p a t ie n t s a t r i s k o f re l a p s e p o s t 一r e - s e c t i o n 勿i m m u n o b e a d , t r a n s c r i p t i o n 一P C R a n a l y s i s o f p e r it o n e a l l a v a g e fl u i d f o r m a l i g n a n t c e ll s J . C l i n C a n
30、c e r R e s , 2 0 0 6 , 1 2 ( 2 ) : 4 1 7 4 2 3 . 5 C o h e n S J , A l p a u g h R K , G r o s s S , e t a l . I s o l a - ti o n a n d c h a r a c t e ri z a ti o n o f c i rc u l a t i n g t u m o r c e ll s i n p a t i e n t s w i t h m e t a s t a t i c c o l o r - e c t a l c a n c e r【 J . C
31、l i n C o l o r e c ta l C a n c e r , 2 0 0 6 , 6 ( 2 ) : 1 2 5 - 1 3 2 . 6 B r a u n S , P a n t e l K . M i c r o m e t a s t a ti c b o n e 一i n v o l v e m e n t : d e t e c t i o n a n d p r o g n o s - t i c s i g n i fi c a n c e J . M e d O n c o l , 1 9 9 9 , 1 6 ( 3 ) : 1 5 4 - 1 6 5 . 7
32、M u l le r P , S c h l im o k G . B o n e m a rr o w “ m i c m - m e t a s t a s e s “ o f 喇t h e l i a l t u m o r s : d e t e c t io n a n d c l i n i c a l re l e v a n c e J . J C a n c e r R e s C l i n O n c o l , 2 0 0 0 , 1 2 6 ( 1 1 ) : 6 0 7 -61 8 . 8 A g g a r w a l S , J a n s s e n S ,
33、W a d k i n s R M , e t a l . A c o m b i n a t o r ia l a p p r o a c h t o t h e s e l e c t i v e c a p t u r e o f c i r c u l a t i n g m a l i g n a n t e p it h e l i a l cell s b y p e p t i d e l i g a n d s J . B i o m a t e r i a l s , 2 0 0 5 , 2 6 ( 3 0 ) : 印7 7 -6 0 8 6 . 9 V o n a G ,
34、 S a b il e 人 , L o u h a M , e t a l . I s o l a t i o n b y 二 o f e p i t h e li a l t u m o r c e l l s : ., m e t h o d f o r t h e i m m u n o m o r p h o l o g i c a l a n d m o l e c u l a r c h a r a c t e r iz a t i o n o f c i r c u l a t i n g tu - m o r c e ll s J 3 . A m J P a t h o l ,
35、 2 0 0 0 , 1 5 6 ( 1 ) : 5 7 -63 . 1 0 H s ie h J S , L i n S R , C h a n g M Y , e t a l . A P C , K - r a s , a n d 户3 g e n e m u t a t i o n s i n c o l o r e c t a l c a n c e r p a t i e n t s : c o r re l a t i o n t o c l i n i c o p a t h o- l o g i c f e a t u r e s a n d p o s t o p e r a
36、 t i v e s u r v e i l l a n c e J . A m S u r g , 2 0 0 5 , 7 1 ( 4 ) : 3 3 6 - 3 4 3 . I 1 H i b i K , R o b i n s o n C R , B o o k e r S , e t a l . M o- l e c u l a r d e t e c t i o n o f g e n e t ic a l t e r a t i o n s i n t h e s e r u mc o l o r e c t a l c a n ce r p a t i e n t s J . C
37、 a n ce r R e s , 1 9 9 8 , 5 8 ( 7 ) : 1 4 0 5 - 1 4 0 7 . 1 2 H a r d i n g h a m J E , H e w e tt P J , S a g e R E , e t a l . M o l e c u l a r d e t e c t i o n o f b l o o d - b o rn e e p i - t h e l i a l ce l l s in c o l o r e c t a l c a n c e r p a t i e n t s a n d i n p a t i e n t s
38、w i t h b e n i g n b o w e l d i s e a s e J . I n t J C a n c e r , 2 0 0 0 , 8 9 ( 1 ) : 8 - 1 3 . 1 3 K o p r e s k i M S , B e n k o F A , K w a k L W, e t a l . D e t e c t i o n o f t u m o r m e s s e n g e r R N A i n t h e s e r u m o f p a ti e n t s w i t h m a l i g n a n t m e l a n o
39、m a J . C l i n C a n c e r 。 , 1 9 9 9 , 5 ( 8 ) : 1 9 6 1 - 1 9 6 5 . 1 4 S o l m i R , D e S a n c t i s P , Z u c c h i n i C , e t a l . S e a r c h f o r e p i t h e l i a l - s p e c ifi c m R N A s i n p e - r ip h e r a l b l o o d o f p a t i e n t s w i t h c o l o n c a n c e r 衍 R T - P
40、 C R【 J . I n t J O n c o l , 2 0 0 4 , 2 5 ( 1 0 ) : 1 0 4 9 - 1 0 5 6 . 1 5 G r a d i l o n e A , G a z z a n i g a P , S i l v e s t r i l , e t a 1 . D e t e c t i o n o f C K 1 9 , C K 2 0 a n d E G F R m R - N A s i n p e r i p h e r a l b l o o d o f c a r c i n o m a p a - b e n t s : c o r
41、re l a t io n w i t h c l i n i c a l s ta g e o f d i s - 二 J . O n c o l R e p , 2 0 0 3 , 1 0 ( 1 ) : 2 1 7 - 2 2 2 . 1 6 V l e m s F A , D ie p s t r a J H , C o rn e l i s s e n I M , e t a l . li m i t a t i o n s o f c y t o k e r a t i n 2 0 R T - P C R t o d e t e c t d i s s e mi n a t e d
42、 t u mo u r c e l l s i n b l o o d a n d b o n e m a r r o w o f p a t i e n t s w i t h c o lo r e c t a l c a n c e r : e x p r e s s i o n i n c o n t ro l s a n d d o w n re g - u l a t i o n i n t u m o u r t i s s u e J . M o l P a t h o l , 2 0 0 2 , 5 5 ( 3 ) : 1 5 6 - 1 6 3 . 1 7 C l a r k
43、 e L E , L e i t z e l K , S m i t h J , e t a l . E p i - d e r m a l g ro w t h f a c t o r re c e p t o r m R N A i n p e - r ip h e r a l b lo o d o f p a t i e n t s w i t h p a n c r e a t i c , l u n g , a n d c o l o n c a r c i n o m a s d e t e c t e d b y R T 一 P C R 1 . I n t J O n c o l
44、 , 2 0 0 3 , 2 2 ( 2 ) : 4 2 5 43 0 . 1 8 D e l a r c a A , P i g n a t a S , C a s a m a s s i m i A , e t a l . D e t e c t i o n o f c i r c u l a t i n g tu m o r c e l l s i n c a r c i n o m a p a t ie n t s勿 a n o v e l e p i d e r m a l g ro w t h f a c t o r re c e p t o rt r a n s c r ip t
45、 i o n 一 P C R a s s a y J . C l i n C a n ce r R e s , 2 0 0 0 , 6 ( 4 ) : 1 4 3 9 - 1 4 4 4 . 1 9 I . e i t z e l K , L i e u B , C u r l e y E , e t a l . D e t e c - t i o n o f c a n c e r ce l l s i n p e r ip h e r a l b l o o d b re a s t c a n c e r p a t i e n t s u s i n g,t r a n - s c r i p t io n 一 p o l y m e r i s e c h a i n re a c t io n f o r e p - i d e r m a l g ro w t h f a c t o r r e c e p t o r J . C l i n C a n c e r R e s , 1 9 9 8 , 4 ( 1 2 ) : 3 0 3 7 - 3 0 4 3 . 作者简介 朱自满( 1 9 7 7一 ) , 男, 在读博士, 主治医师。 ( 收稿日 期: 2 0 0 7 - I 1 - 1 2 ) 万方数据
链接地址:https://www.31doc.com/p-3723716.html