绵羊ARQ基因型PRP前体蛋白基因的克隆及原核表达.pdf
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1、中 国 人 兽 共 患 病 学 报 % P基因型: . :前体蛋白基因原核表达重组质粒, 为4 X N的检测及诊断、: . :的结构与功能研究奠 定基础。方法根据8 ) ( 9 / ( W中绵羊: . :基因全序列和表达载体T N 4 ! Z /载体的多克隆位点设计了绵羊: . :前体蛋白基因 引物, 以绵羊基因组? A为模板,: % ;扩增绵羊: . :前体蛋白基因, 通过酶切将些基因克隆到T N 4 ! Z /(b) 载体中, 构建了重 组原核表达质粒T N 4 7 : . :。重组质粒转化E, = ( )K ) ( , R? AU / * / T 0 1 ) SL V: % ;/ ( S
2、 ( * ) . - 0 L ( / ( T 0 ) , ( * / 0 0 / 0 0 ? R D : . :;T . ) R - . * , .;R 0 , ( ( K;) T . ) * * , ( 传染性海绵状脑病(4 . / ( * * * L 0 )X T , ( K 1 , . N ( R ) T !G中国海洋大学生命科学与技术学部 #“J ! “ “ #,! !($) 中 国 人 兽 共 患 病 学 报 % 4 / 5? A聚合酶、S 4 :、 ? A 6 / . W ) .? Q ! “ “ “,? Q 3 “ “ “购自大连宝生物公 司;? A提取试剂盒购自: . , /
3、K /公司;: . : %核心 蛋白单 克 隆 抗 体 ($ % #) 本 室 研 制)二 抗 为/ ( , - * )B K 8( / L)7 E; :, 购自加拿大X / K /公司的基因提取试剂盒说明 书进行, 获得 的 基 因 组? A测定浓度后Y! “_ 冻存) !G : % ;扩增绵羊: . :基因 根据8 ) ( 9 / ( W中 已知的绵羊完整: . :基因全序列(8 ) ( 9 / ( W/ R R ) * 7 * , ( , GO J “ ! C ) , 利用: . ) .T . ) ) . G “软件 设计扩增绵羊: . :编码基因 ; ( C C 3 L T) 的上下游
4、 : % ;引物, 注意上下游引物的位置, 以保证获得完 整的和正确的: . :基因阅读框, 上游引物* 端引入 9 / EB酶切位点, 下游引物* 端引入f 反应体系( “0) 为:3 “ L - 1 1 ) . 0,引 物 ( “ T , 0+0)30,S 4 : ( 3 “ , 0+Q)$0,4 / W / . /? A聚 合 酶“G $0, ? A模板!0,S S E!补至 “0): % ;反应程 序: D _ (;D $_3 (, Z_3 (,C !_3 (, J “个循环;C !_3 “ (;$_保温)3I的琼脂糖凝 胶电泳检测扩增产物, 将: % ;产物切胶回收进行 纯化) !G
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