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1、 实验研 究 、 文章编号 1 0 0 7 一 0 8 9 3 ( 2 0 0 7 ) 0 4 一 0 2 0 1 一 0 3 维胃方对实验性大鼠胃溃疡治疗机理的研究 苏尚贤刘晓伟,张晓洁刘 剑文,杨真晖, ( 1 . 南方医科大学中医药学院2 0 0 3 级研究生,广东 广州 5 1 0 5 1 5 ; 2 . 南方医科大学中医药学院中医诊断学教研室,厂东 广州 5 1 0 5 1 5 ) 摘要 目的: 通过乙酸致大鼠胃溃疡模型, 研究维胃方防治慢性胃溃疡机理。方法:制备乙酸致大鼠胃溃疡模型, 观察维胃方对该模型治疗后胃大体标木和胃溃疡周围胃液p H值、溃疡面积、病理组织切片;采用放射免疫法
2、测定大鼠 血 清中的胃泌素。结果:服用雷尼替丁和4胃方后,从胃孔膜大体观察及切片观察,实验性溃疡大 鼠胃粼膜愈合情况良好, 用药组溃疡面积明显小于自愈组 ( P 0 . 0 5 ),说明药物能够有效促进溃疡面的愈合;其中维胃方中剂量组馈疡面积小十 雷尼桥丁 ( P 0 .0 5 ) o维胃方各剂量组的p H值旱剂量依赖的正相关趋势。与自愈组及模型组比较,维胃方各组血清 G AS 含量旱升高的趋势,其机制可能是通过血清GAS 刺激胃肠砧膜和胰腺组织的蛋白质、RN A和DN A的合成增加的营 养作用,减少乳膜攻击因子和增强胃豁膜保护治疗胃溃疡。 关键词 维胃方;胃溃疡;治疗机理 中图分类号 1 R
3、 - 3 3 2 : R5 7 3 .1 f 立献标识码 A 材料与方法 1 . 1 材料 1 . 1 . 1 实验动物雄性 S P F级 Wi s t a r 大鼠 5 6 只,体质量1 8 02 2 0 g ,大鼠 及饲料 购自 南方医科大 学实验动物中心 ( 动物合格证号: 粤检证字第 2 0 0 5 AO 4 8号),室温 2 22 6 安静环境下饲养,喂 以固定的平衡饲料。 1 . 1 . 2 药品维胃方:由三七、白友、获 等1蒲公英组成,购于南力医科大学附属南方医 院中药房 ,经药用植物与鉴定教研室专家验证合 格,制成低、中、高 3种剂量水剂,分别含生药 0 .3 7 5 g /
4、m L , 0 .7 5 g / m L , 1 .5 g / m L( 以 临 床用 药剂 量 按体表面积转换成动物等效剂量,低、中、高3 种 剂量分别为临 床剂量的1 / 2 倍、1 倍、2 倍),高 压 灭 菌, 4 冰箱保存备用。雷尼替丁水悬液:每 粒 1 5 0 m g ,山 西太原药业有限公司 ( 批号: 0 6 0 5 0 1 ), 用蒸馏水将雷尼替丁配制成水悬液,含生药 3 mg / mL . 1 . 1 .3 试剂与仪器促胃液素 ( G A S )放射免 疫试剂盒:北京北方生 物技术研究所,批号:0 6 1 0 2 0 B E C K MA N控温高速离心机,L e i c
5、a R M 2 1 3 5切片 机, O l y m p u s 光学显微镜,上海日 环厂S N 6 9 5 B型放 射免疫y计数器。 1 . 2方法 1 . 2 . 1模 型 制 作 乙 酸胃 溃 疡 模 型: 参 照T a k a g 等In 乙酸致大鼠胃溃疡造模方法,并加以改造。大鼠 造模前 2 4 h ,禁食不禁水。大鼠经腹腔注射 1 0 %水 合氯醛 1 mL 深度麻醉。腹部剃毛、消毒,于剑突下 腹中线打开腹腔,手术切口长约2 c m, 暴露出胃, 在胃 前壁浆膜面窦体交界处同一 部分 ( 避开血管) 用浸有 1 0 0 %乙酸, 直径为5 m m的圆形滤纸接触2 次,每次3 0 s
6、 .然后还纳胃体,逐层缝合切口,保护 切口。 1 . 2 . 2 动物分组及血清、血浆制备根据完全 随机法分为 7组,每组 8只:A正常组,自由饮 水,进食;B模型组,乙酸致大鼠胃溃疡,自山饮 收稿日 期2 0 0 7 - 0 5 - 1 5 基金项目 国家自然科学基金资助项目 ( 3 0 2 7 1 5 6 7 ) 2 01 万方数据 水,进食; c自 愈组,乙酸致大鼠胃溃疡,自 由饮 水, 进食; D雷尼替丁组, 乙酸致大鼠胃 溃疡,第4 天开始灌胃雷尼替丁水悬液2 m L ,共7 d ,每日1 次;E 维胃方各剂量组 E , 维胃 方低剂量组、E : 维 胃 方中 剂量组、 E 3 维胃
7、 方高剂 量组), 乙酸致 大鼠胃 溃疡, 第4 天分别 灌胃 低、 中、高 剂量 维胃 方2 m l , 共7 d , 每日1 次。除 模型组在第4 天, 其余各组均 在第 I 1 天 麻醉后取材 大鼠 经腹 腔注射 1 0 %水合氯醛0 .0 3 5 m g / k g ,深 度麻醉,仰卧位四肢固定,皮肤常规消毒,在剑突下 偏左剪开腹腔,暴露胃部。分离腹主动脉,用头皮 针采血, 用普通负压管接取 血液3 - 4 m l ,3 0 0 0 r / m in 离 心2 0 m i n ,分离 血清一 2 0 0C冻存备用 1 .2 . 3观 察 指 标 胃 的 大 体 观 察、 胃 液州 值
8、溃疡面积、病理切片观察、血清胃泌素。由鼠胃 责 门滴取少量胃 液于p H试纸, 测定p H值。向胃内 注 入 1 0 %中性福尔马林溶液 1 0 m l ,固定3 0 m i n 后沿 胃大弯剪开,展平, 观察胃 i 膜大体标本。溃疡面 积检测:测量溃 疡的长径 ( D L ) 和短径 ( D S ), 计 算溃疡的 面积,按公式S = 1 / 4 X D L X D S X二 ,二 取 3 . 1 4 0病理切片观察:取部分胃 溃疡周围 腺组 织常规 脱水、石蜡包埋、切片、苏木精一 伊红染色作病理组 织学检杳。测定血清胃泌素:放射免疫 1 3 统计学分析 采用 S P S S 1 0 . 0
9、软件分析处理,数据以 x 士, 表 示,采用 F检验。 部分愈合良 好,仅见个别小溃疡。 2 2 光学显微镜下观察 ( 4 0 倍) 正常动物组:胃溃疡周围组织各层光整完 好。手术模型组:部分翻膜中断,溃疡可深及肌 层,溃疡表面覆盖炎症细胞,肌层变薄,甚至断 裂, 纤维蛋白 坏死,浆膜层部分断裂。 手术对照 组:部分钻膜中断,达及勃膜肌层,勃膜下层炎症 细胞浸润,部分小动脉血管内皮肿胀、增生,可见 血栓,肌层变薄部分断裂,部分浆膜断裂。雷尼 替丁组:少量勃膜中断,达及腺体区,面积较小, 勃膜下层炎症浸润,部分小动脉血管内皮肿胀、增 生, 可见血栓, 肌层变薄,小部分浆膜断裂。 维 胃力组:低剂
10、量组与高剂量组:2 组 与雷尼替丁组差 别不大;中剂量组:茹膜基本完整,豁膜下层仅见 少量炎症细胞浸润。肌层变薄肉芽组织增生,排 列较整齐,小部分浆膜断裂。 2 . 3 维胃 方对实 验性胃 溃疡大鼠溃 疡面积的 影响 结果见表 l a 表1 各组溃疡面积的比较( S / mm, x 士 ) 组 别溃疡 面积 0 1 - 6 3 4 士 1 . 7 6 0“ 2 .6 0 士0 . 9 8 0 0 3 .3 9 土1 . 1 3 0 .7 6 士0 . 3 0 0 0 0 2 名 2 士0 . 9 8 0 0八n己OnC乃n西C八 与自愈组相比 替丁组幸 日 比:#P AP0 . 0 5 ,
11、LAP0 . 0 1 :与雷尼 0 . 0 5 , # # P 0 .0 1 2结果 2 . 1 胃 的大 体标本观察 正常对照组:胃熟膜光整完好。 手术模型 组: 溃疡病灶溃疡表现明显,部分溃疡穿孔。 手 术对照组:愈合不 良,仍可见明显溃疡面。雷尼 替丁组:溃疡愈 合较好,部分可见溃疡面,少量可 见炎性渗出物,部分溃疡已完全愈合,但该组织较 粗糙,颜色较周围正常组织白。维胃方:低剂量 和高剂量组:低剂量组大部分可以 找到溃疡面, 但 面积较小,部分可见充血点及炎性渗出物, 个别已 愈合。高剂量组愈 合效果较雷尼替丁 好。大部分胃 勃膜愈合接近,有个别愈合不良。中剂量组;绝大 2 . 4 维
12、胃方对实 验性胃溃 疡大鼠不同 组胃 液p H 值,血清G A S含量的影响 结果见表 2 表2 各组胃衡 H 值,血清G A S 含量的比 较 ( P B / n g L 组 织 p H 俏 G A S 2 7 . 3 2 土 1 9 名1 +-+一+一+一+一 人、内、QJ.土,、 2 .6 4 士0 .5 6 * 3 .2 9 士 0 . 3 0 2 .9 9 士 0 . 4 4 2 .7 3 士0 32 “ 2 .5 8 士 0 36 “ 2 .7 1 士0 . 4 0 2 .7 9 士 0 乃 I 1 8 I 8 1 6 2 3 2 4 .9 4 土 On只的八0八n乃八八0口 与正
13、常组相 比:*P 0 . 0 5 ,* 水 P0 . 01 : 4 . 8 2 3 . 0 1 5 . 6 5 8 . 5 0 4 . 0 7 6 . 9 6 与模型 组相比:# P 0 . 0 5 , # #P 0 . 0 1 , 2 02 万方数据 讨论 胃溃疡属中医 “ 胃院痛”、 “ 痞证”、 “ 吐 酸”范畴。中医辨证多属寒热虚实夹杂,气血失 和 气机阻 滞、升降失调是其共同特征P I 。 本方由白 友、三七、获等.蒲公英组成,其中白友收敛止 血、消肿生肌, 促进溃疡愈合又 不致阻滞气机;蒲 公英味苦性寒具有清热解毒消痈作用;三七性温, 能活血化疲,消 肿定痛, 现代药理研究发现三七
14、具 有抗炎、镇静的 作用,两药合用寒热同施, 辛开苦 降,通降气机,散结消肿;合获等补脾和胃,降逆 渗湿安神,同作护本之用;本方组方严谨,寒热并 用,活血行气,畅通气机,疗效独特,临床经验证 明该方对胃溃疡有很好的疗效 实验性大鼠胃溃疡 自愈率较高,往往影响药物 疗效的观察,本实验采用的冰醋酸法是胃溃疡造模 方法可靠、 具育自 愈率 差、周期短、可重复性强和 成功率高等特点习 。 大鼠 造模手 术后第4 天, 解剖 模型组大鼠胃组织,发现溃疡病灶与溃疡边缘有明 显分界,溃疡面覆盖黄苔,边缘充血水肿,表现为 典型的胃 溃疡特征。经7 d 药物治疗后的结果,用 药各组与自 愈组比 较差别有统计学意
15、义 ( p 0 .0 1 或P 0 .0 5 )。 制酸剂在临床上是治疗胃 溃疡的 常用药物,本 实验以 雷尼替丁作为药物对照组, 探讨维胃 方治 疗 实 验性胃 溃疡作用机理具有可比 性。 从胃 勃膜大休 观 察 及切 片观察结果维胃方中剂 量织溃疡面积明显小 于 雷 尼替丁 组 ( P 0 .0 5 )。说明了 在本实验中维胃 方 中剂量治疗慢性胃 溃疡的疗效尤佳。用药组和正常 组胃液p H值明显比 模型组低 ( P 0 .0 5 )。这可能 与 机体自 身的代偿机制有关。模型组第4 天麻醉后 取材,而 其余各组均在第1 1 天 麻醉后取材。模型组 取材期间可能 正处于机体自 身的代偿期,
16、 机体主要 发挥自 身的保护机制,此时检测胃液p H值可能代偿 性的短暂性升高,故有此实验结果。再者,实验结 果 亦 表 明 , 维胃 方 各 剂 量 组p H 值 呈 剂 量 依 赖的 正 相 关趋势,说明提高胃液p H值,降低胃 茹膜攻击因 素,可能亦是维胃方抗应激性胃溃疡作用机制之一。 胃泌素早 在 1 9 0 5 年被E d k in s 所发现。胃泌素能 促 进胃 酸和胃 蛋白 酶原分泌, 故与 消化性馈疡的形成 有 密切联系。 G A S 的 主要 作用为: 直接 刺激壁细 胞 产生胃酸和刺激嗜铬样细胞产生组胺,然后通过与组 胺及乙酞胆碱的协同作用产生胃酸:营养作用,能 刺激胃 肠
17、勤膜和胰腺组织的 蛋白 质、 R N A 和D N A的 合成增加。因此,检测胃溃疡大鼠 血清中G A S 含量 变化能反映胃 豁膜的功能闻 。胃泌素这一指标在本实 验的结果,刚 能与导 致胃 溃疡的作用机制具 有多样性 有关。消化性溃疡足 一 多病因疾病,归纳病因不外是 胃 酸、胃蛋白 酶和幽门 螺杆菌 等攻 击因子 增加、 豁膜 屏障、豁膜血流、 前列腺素等防御因子减弱N 所以 维胃 方治疗胃 溃疡的作用机制可能还与其他囚素有 关,而不仅取决于胃泌素这一环节。但实验数据显 示: 与自 愈组 及模型组比 较, 维胃 方各组血清G A S 含 量呈升高的 趋势,所以维胃方 对胃 溃疡治疗机理可
18、能 通过血清 G A S 刺激胃肠熟膜和胰腺组织的蛋白质、 R N A 和D N A的 合成增加的营养作用,减少私 膜攻击 因子和增强胃薪膜保护的保护机理而发挥抗溃疡作 用,相关机制还有待进一步研究证实。 参考文献) 川 T a k a 乡长O k a b c S , S a zi ld R . A n e w m e t h o d f o r th e p ro d u c ti o n o f c h r o n i c g a s t r i c u l c e r in r a t s a n d t h e e ff e c t o f s e v e r a l d r u g
19、s o n i ts h e al in g ( J ) . J p n J P h a r m a c o l , 1 9 6 9 , 1 9 :4 1 8 ; 2 )彭国林, 李兆中. 制酸剂在应激性溃疡预防中的应用 U) . 中华 医学杂志, 2 0 0 2 , 8 2 ( 1 4 ) : 1 0 0 2 - 1 0 0 4 : 3 )王奕珊, 陈奕昭 何成龙, 等. 胃灵顺粒对大鼠乙酸胃溃疡 愈合质量的影响( J ) . 中国中西医结合消化杂志, 2 0 0 2 , 1 0 ( 6 ) :3 4 2 - 3 4 7 . 4 )李 红涛 , 吴开 春, 李彩宁, 等. 血 清胃 泌素对老年人慢性萎 缩性胃 炎的诊断( J ) . 中华老年医学杂志, 2 0 0 4 , 2 3 ( 4 ) :2 3 8 5 姚洪森, 张健, 陈中渠, 等. 消化 性溃 疡进展川. 武警医学, 2 0 0 5 , 1 6 ( 5 ) :3 7 8 -3 7 9 6 刘晓伟, 张红梅, 曲宏 达. 左金丸对应激性胃溃 疡胃翁膜 攻击因素的干预中医 药学报 J ) . 2 0 0 4 , 3 2 ( 5 ) : 1 8 - 1 9 2 03 万方数据
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