《GB-17009-1997.pdf》由会员分享,可在线阅读,更多相关《GB-17009-1997.pdf(8页珍藏版)》请在三一文库上搜索。
1、G B 1 7 0 0 9 - 1 9 9 7 前言 风疹是由风疹病毒引起的急性呼吸道传染病, 呈世界性分布 在我国归属于法定丙类传染病, 一年 四季均可发生, 以冬春季发病为多, 易感年龄以1 -5 岁为多, 故流行多见于学龄前儿童。自风疹疫苗问 世以来, 发病率明显下降。 风疹临床症状轻微, 但孕妇妊娠早期初次感染风疹病毒后, 病毒可通过血胎屏 障进入胎儿, 常可造成先天性胎儿畸形、 死胎、 早产, 因此, 风疹的早期确诊及预防极为重要。 本标准由中华人民共和国卫生部提出 本标准由浙江医科大学传染病研究所、 中国预防医学科学院病毒学研究所负责起草。 本标准主要起草人: 刘克洲、 张礼璧。
2、本标准由 卫生部委托技术归口单位中国预防医学科学院负责解释。 中华 人 民 共 和 国 国 家标 准 风 疹 诊 断 标 准 及处 理 原 则 G B 1 7 0 0 9 一 1 9 9 7 D i a g n o s t i c c r i t e r i a a n d p r i n c i p l e s o f ma n a g e m e n t f o r r u b e l l a 范围 本标准规定了风疹的诊断标准及处理原则。 本标准适用于各级各类医疗、 保健机构、 卫生防疫机构和人员对风疹病人的诊断、 报告和处理。 2 诊断原则 典型病例可根据临床表现结合流行病学作出临床诊断
3、, 不典型病例需根据血清风疹抗体的检测或 风疹病毒的分离阳性予以确诊。 3 诊断标准 3 . 1 风疹 3 . 1 门流行病学史 与确诊的风疹患者在 1 4 - - 2 1 天内有接触史。 3 . 1 . 2 临床症状 3 . , . 2 . 1 发热。 3 . 1 . 2 . 2 全身皮肤在起病1 - 2 天内出现红色斑丘疹。 3 . 1 . 2 . 3 耳后、 枕后、 颈部淋巴结肿大或结膜炎或伴有关节痛( 或关节炎) 。 3 . 1 . 3 实验室诊断 3 . 1 . 3 . , 咽拭子标本分离到风疹病毒( 见附录A ) , 或检测到风疹病毒核酸。 3 . 1 . 3 . 2 1 个月内
4、未接种过风疹减毒活疫苗而在血清中查到风疹I g M抗体( 见附录B ) , 3 门 3 . 3 恢复期病人血清风疹I g G抗体滴度较急性期有4 倍或4 倍以上升高, 或急性期抗体阴性而恢 复期抗体阳转( 见附录B ) , 11 . 4 病例分类 3 门 4 . 1 疑似病例: 具备3 . 1 . 2 . 2 条, 同时伴3 . 1 . 2 . 1 或3 . 1 . 2 . 3 条。 3 门. 4 . 2 临床诊断病例: 疑似病例加 3 . 1 . 1 条。 3 门. 4 . 3 确诊病例: 疑似病例加3 . 1 . 3 . 1 或3 . 1 . 3 . 2 或3 . 1 . 3 . 3 条。
5、 3 . 2 先天性风疹综合征 3 . 2 . 1 临床表现 3 . 2 . 1 . 1 新生儿白内障/ 先天性青光眼, 先天性心脏病, 听力缺损, 色素性视网膜病, 唇裂愕裂, 头小畸 形, X线骨质异常。 3 . 2 . 1 . 2 紫瘫、 脾肿大、 黄疽、 精神性迟缓、 脑膜脑炎。 3 . 2 . 2 经实验室确诊患儿母亲在妊娠早期有风疹病毒感染史 国家技术监督局 1 9 9 7 一 1 0 一 0 6 批准1 9 9 8 一 1 0 一 0 1 实施 G s 1 7 0 0 9 一 1 9 9 7 3 . 2 . 3 实验室诊断 3 . 2 . 3 . 1 婴儿血清风疹I g m抗体阳
6、性。 3 , 2 . 3 . 2 婴儿风疹I g G抗体水平持续存在, 并超过母体被动获得的抗体水平( 4 倍以上) 。 3 . 2 - 3 . 3 婴儿咽拭子、 血、 尿、 脑脊液或脏器活检标本分离到风疹病毒或检测到风疹病毒R N A . 3 . 2 . 4 病例分类 3 . 2 . 4 . 1 疑似病例: 具备3 . 2 . 1 . 1 任一条或可伴3 . 2 . 1 . 2 任一条。 3 . 2 . 4 . 2 临床诊断病例: 具备3 . 2 . 1 . 1 任一条或可伴3 . 2 . 1 . 2 任一条, 同时伴3 . 2 . 2 条。 3 . 2 . 4 . 3 确诊病例 临床诊断病
7、例加3 . 2 . 3 . 1 或3 . 2 . 3 . 2 或3 . 2 . 3 . 3 条。 4 处理原则 4 . 1 病人的隔离与治疗 发现风疹疑似或诊断病例, 应立即隔离, 一般隔离至出 疹后s 天。 一般接触者不进行检疫。 对病人进行对症处理和支持治疗。 先天性风疹综合征患儿根据病症专科治疗。 确诊有风疹病毒感染的早期孕妇, 为防止可能产生胎儿先天性畸形, 建议及时终止妊娠 4 . 2 预防孕妇风疹 对育龄妇女, 宜进行婚前或孕前检查血风疹I g G抗体, 如证实为易 感者, 均应接种风疹疫苗。孕妇 妊娠早期( 3 个月内) 尽量避免同风疹病人接触。如一旦接触, 可在潜伏期内查血清风
8、疹I g G抗体, 若阳 性表明既往曾有过风疹病毒感染, 若阴性应继续在接触后1 个月 左右再测一次血清I g G和烤 M抗体, 若明确阳转可判为风疹病毒感染。 4 . 3 免疫预防 预防风疹有效方法是接种风疹减毒活疫苗, 可对易感人群实行接种。 G B 1 7 0 0 9 一 1 9 9 7 附录A ( 标准的附录) 病原学诊断方法 A l 病毒分离 从病人呼吸道采集标本分离病原体。 A l . 1 标本收集 风疹病人宜在出疹前4 -5 天至疹后 1 -2 天取咽拭子标本。先天性风疹综合征患儿除咽拭子标本 外, 亦可于出生后尽快取尿液、 眼泪、 脑脊液、 骨髓等标本。将灭菌棉棒稍蘸液体( 2
9、 %牛血清E a g l e 液) , 反复涂抹患者咽部数次, 然后将棉棒浸于上述标本液( 1 - 1 . 5 m L ) 中反复挤压. 标本液中加足量抗生素 ( 青、 链霉素1 0 0 0 u / m L ) 及制霉菌素5 0 l c g / m L ( 或二性霉素5 K g / m L ) o A l . 2 接种 取0 . 1 一。 . 2 m L标本液接种于生长在试管中的单层原代乳兔肾细胞( P R K ) ( 或其他原代细胞如原 代人胚肾、 兔呸纤维细胞、 人胚二倍体细胞等) 上, 置3 7 C 吸附1 -2 h 后弃液, 再加入含双倍常规抗生素 量的维持液l M I _ , 置3
10、3 C 培养, 每隔4 天换液, 连续观察8 -1 4 天。 如无细胞病变可见, 即置一3 0 C 冻化 3 次 盲目 传代。每次传代可接种于R K , V e r o , B H K , , , L L C - MK : 细胞上, 连续盲传3 代 A l . 3 观察细胞病变 1 般于1 0 天左右出现细胞病变。 若不出现病变, 可在接种1 4 天后用1 0 0 T C I D , 。 的E C H ( )病毒或 一 定量的S i n d b i s 、 或V S V、 或脊髓灰质炎病毒攻击, 并设正常细胞种毒对照。 若对照出现病变, 接种标本 管无病变, 表示原接种的细胞内已有病毒感染的存
11、在。 A 1 . 4 毒株鉴定 用已知风疹病毒免疫血清, 观察能否与新毒株起作用, 传统用中和试验、 血凝抑制试验或采用免疫 荧光法作病毒鉴定等。 A 2 病毒核酸检测 利用分子杂交技术或P C R技术检测风疹病毒核酸 附录B ( 标准的附录) 血清学诊断方法 B 1 血凝抑制试验 B l . 1 原理 鹅红细胞( 或鸽红细胞) 上有风疹病毒受体, 遇风疹病毒可产生凝集现象。若将抗体与病毒( 血凝 素) 预先温育后再加入红细胞则不产生凝集, 称为血凝抑制。定量血凝素与不同稀释度抗体( 血清) 作用 后能完全抑制血凝的最高血清稀释度, 即为血凝抑制抗体效价。 B 1 . 2 主要材料 B 1 .
12、 2 门血凝板: 6 X1 2 或8 X1 2 个圆形孔( 孔底光滑) 的U形板。 B l . 2 . 2 定量移液器: 定量移液器选用2 5 p L ( 即。 . 0 2 5 m l ) 。 B l . 2 . 3 尖底小试管: 形如离心管, 便于血清的吸取。 B 1 . 3 风疹血凝素的制备 取毒种感染B H K : , 细胞或V e r o 细胞, 常规换液培养 末次换入2 %牛血清 1 9 9 综合培养基, 置3 3 C G B 1 7 0 0 9 一1 9 9 7 培养6 - 7 天以上, 待细胞病变十+时收获, 冻化, 取上清液用T w e e n - 8 0 乙醚处理即为血凝素;
13、 如用 白陶土处理的2 %牛血清配制感染细胞的培养基来制备血凝素, 则不用T w e e n - 8 0乙醚处理。 B 1 . 4 血凝滴度 所用溶液一律置4 预冷, 微量塑料板法。 血凝素用葡萄糖一 明胶一 巴比妥缓冲液以1 , 2 倍比递增稀 释, 再加。 . 2 5 %新鲜鹅红细胞( 或鸽红细胞) 悬液, 混匀, 置4 C 至少1 h , 观察结果, 以“ 十+十” ( 4 单 位) 的最高稀释度为血凝滴度。 川. 5 血凝抑制试验 原血清0 . 1 m l . +0 . 7 m l氯化锰肝素液, 4 作用2 0 m i n 后在1 : 8 稀释的血清中加1 滴积压鹅红 细胞( 或鸽红细
14、胞) , 1 h内摇2 - 3 次, 置4 C 过夜, 再以2 0 0 0 r / m i n 的速度离心1 0 m i n , 取上清液待检。 待检血清用p H 6 . 2 的葡萄糖一 明胶一 巴比妥缓冲液倍比稀释后, 每孔加。0 2 5 m l , 血凝素 含4 单位; 如 系p H 9 的血凝素, 事先应用0 . 1 m o l / L盐酸调至p H 6 . 2 左右再用) 。抗原抗体在4 C 作用1 h后加入 0 . 2 5 % 鹅红细胞1 滴( 0 . 0 2 5 m l ) , 在4 C 下作用2 h 后判定结果, 以完全抑制血凝为终点。 每次试验预 设以下对照: 阳性血清对照:
15、应出现一定已知效价 阴性血清对照: 应出现阴性结果 待检血清对照: 应无非特异性凝集 抗原对照:应出现+十+( 4 单位) 、 +十( 2 单位) 、 +-+( 1 单位) 、 士( 1 / 2 单位) 的凝集 现象 血球对照应为阳性 H 工 抗体阳性标准判定以1 : 1 6 作为阳性标准。 葡萄糖一 明胶一 巴比妥缓冲剂( D G V ) 配制: 巴比妥。5 8 g 巴比 妥钠0 . 3 8 g 明胶。 . 6 g 无水 ; a C L 0 . 0 2 g Mg S O, H( )0 . 1 2 g Ni c t 8 . 5 g 葡萄糖l o g 巴比 妥与明胶可分别先各在2 5 0 m 工
16、蒸馏水中加温溶解, 然后依次加入其他药品, 溶解后加双蒸水 至1 0 0 0 m l , 分装1 0 瓶消毒。 用前以。 . 1 m o l / L 盐酸将p H调至6 . 2 , 用于稀释待测血清、 配制血凝素及 红细胞。 氯化锰一 肝素液配制 Mn C I , 3 . 9 6 g 肝素1 6 万单位 加双蒸水至 1 0 0 ml , 使用时以双蒸水稀释 4 倍( 1 t 3 ) . B 2 酶联免疫吸附法检测风疹I g G抗体( E L I S A间接法) B 2 . 1 原理 将风疹抗原包被于固相载体上, 加上待检血清, 再用酶标抗抗体间接检出特异性抗体。 B 2 . 2 材料 B 2
17、. 2 . 1 聚苯乙烯酶标板 B 2 . 2 . 2 风疹阴性和阳性血清。 B 2 . 2 . 3 风疮抗原。 G B 1 7 0 0 9 一 1 9 9 7 B 2 . 2 . 4 抗入I g G辣根过氧化物酶结合物。 B 2 . 2 . 5 酶底物邻苯二胺一 双氧水。 B 2 . 3 操作程序 B 2 . 3 . 1 用p H 9 . 6 碳酸盐缓冲液稀释风疹抗原与未感染风疹病毒的细胞抗原( 对照抗原) 。 B 2 . 3 . 2 于4 。 孔聚苯乙烯板的单排孔与双排孔分别加入。 . 1 m L / 孔的风疹抗原与对照抗原。 右下最后 一孔不加任何抗原作为空白对照, 4 过夜。 B 2
18、. 3 . 3 以0 . 0 5 0 o T w e e n 2 0 生理盐水( N S - T ) 洗板三次, 倒去洗液。 B 2 . 3 . 4 在血凝板中以2 %牛血清N S - T将待测血清稀释成1 : 2 0 - - 1 : 1 2 8 0 四个稀释度, 每个稀释度 加风疹抗原与对照抗原各1 孔( 0 . 1 m L , 下同) , 轻轻振摇后置3 7 C 1 一2 h o B 2 . 3 . 5 以N S - T洗三次, 倒去洗液后每孔加入以2 %牛血清N S - T稀释的抗人坛 G辣根过氧化物酶结 合物0 . 1 m l - ( 空白对照不加) , 置 3 7 C 1 -2 h
19、, B 2 . 3 . 6 以N S - T洗三次, 倒去洗液后加邻苯二胺一 双氧水底物液, 每孔 0 . 1 m L ( 包括空白对照孔) , 避 光在3 7 放置1 0 2 0 m i n , 随时观察, 待对照孔开始显淡黄色时即用2 m o l / L 硫酸终止, 每孔加5 0 k L , B 2 . 3 . 7 用空白对照孔调零点, 以酶标仪( 4 9 2 n m) 测定各孔O D值。 O D值不足。0 5 者按。 . 0 5 计。 凡 同一稀释度下风疹抗原孔O D值/ 对照抗原孔O D值2 . 1 即P / N为阳 性。 阳 性之最高稀释度的倒数即 为该血清的抗体效价。小于1 : 2
20、 0 者视为阴性。 B 2 . 18 每次实验应作已知效价的阳性及阴性血清对照。 B 3 酶联免疫吸附法检测风疹I g M抗体( 抗体捕捉E L I S A法) B 3 . 1 原理 利用包被在固相载体上的抗人I g M p 链抗体, 捕捉待检血清中的I g M, 再用风疹病毒抗原和已知的 酶标风疹病毒抗体去检测血清中I g M是否为 抗风疹抗体。 利用底物使酶显色而测知。 B 3 . 2 材料 B 3 . 2 . 1 聚苯乙烯4 0 孔或9 6 孔板。 B 3 . 2 . 2 抗人I g M p 链抗体。 B 3 . 2 . 3 风疹病毒抗原和正常对照抗原。 B 3 . 2 . 4 抗风疹病
21、毒抗体( 单克隆或多克隆) 。 B 3 . 2 . 5 酶标抗抗体: 抗风疹病毒抗体和酶标抗抗体也可用酶标抗风疹病毒抗体代替。 B 3 . 2 . 6 酶底物一 邻苯二胺及双氧水。 B 3 . 2 . 7 已知的风疹I g M抗体阳性和阴性血清。 B 3 . 2 . 8 包被液: 0 . 0 5 m o l / L碳酸盐缓冲液( p H9 . 6 ) 无水碳酸钠1 5 9 m g 碳酸氢钠2 9 3 m g , 使用不超过2 周 蒸馏水加至1 0 0 m l , B 3 . 2 . 9 洗涤液( N S - T ) : 0 . 8 5 盐水的吐温液 氯化钠1 7 g 吐温 2 0 1 . 0
22、mL 蒸馏水加至2 0 0 0 m L B 3 . 2 . 1 0 稀释液为5 %牛血清的N S - T液。 B 3 . 2 . 1 1 邻苯二胺一 过氧化氢底物液 先配柠檬酸磷酸缓冲 液( p H 5 . 0 ) 磷酸氢二钠1 8 . 4 1 g 柠檬酸5 . 1 9 G B 1 7 0 0 9 一 1 9 9 7 蒸馏水加至1 0 0 0 m L , 分小瓶冰冻保存 临用时配底物液: 邻苯二胺( O P D ) 4 m g 柠檬酸磷酸缓冲液 1 0 m L 3 0 %双氧水5 m l , B 3 . 3 操作 8 3 . 3 . 1 包被抗人I g m p 链抗体, 每孔1 0 0 p L
23、 o B 3 . 12 4 C 过夜, 倒掉液体, 用 1 0 %牛血清N S - T液 1 2 0 p I封闭。 8 3 . 3 . 3 3 7 -Cl h 后倒去封闭液, 洗三次。 B 3 . 3 . 4 加待测血清-2 . 1 时为阳性( P为待测血清与风疹抗原作 用的O D值, N为待测血清与正常对照抗原作用的O D值) 。 在用待测血清与已知风疹阴性血清对比时, 则P为待测血清与风疹抗原作用后的O D值, N为标 本阴性血清与风疹抗原作用后O D值。 *草庐一苇草庐一苇*提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 提供优质文档, 如果 你下载的文档有缺页、 模糊等现象或 者遇到找不到的稀缺文件, 请发站内 信和我联系!我一定帮你解决! 本人有各种国内外标准 20 余万个, 包括全系 列 GB 国标国标及国内行业行业及部门标准部门标准,全系列 BSI EN DIN JIS NF AS NZS GOST ASTM ISO ASME SSPC ANSI IEC IEEE ANSI UL AASHTO ABS ACI AREMA AWS ML NACE GM FAA TBR RCC 各国船级 社 船级 社 等大量其他国际标准。豆丁下载网址:豆丁下载网址: http:/
链接地址:https://www.31doc.com/p-3756147.html