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1、中华人民共和国国家标准 UDC 6 2 8 . 4 4 / . 4 9 粪便 无害 化卫生标准 GB 7959一 87 S a n i t a r y s t a n d a r d f o r t h e n o n 一 h a z a r d o u s t r e a t me n t o f n i g h t s o i l 为贯 彻 “ 预防为卜 ”的 !P t : I 作方针,切实搞好粪便P 生管理和无害化处理,加强除害火病的技 术指异,改溥城乡 环境 L , 仁 面貌,保障人民身体健康,特制定本标准。 本标准适用上 全国城乡垃圾、粪便尤害化处理效果的 I? 生评价和为建设垃圾、
2、粪便处理构筑物提 供 PI: 设计参数。 1 定义 1 . 1 粪便是指人体排泄物。 1 . 2 堆肥是指以垃圾、粪便为原料的好氧性高温堆肥( 包括不加粪便的纯垃圾堆肥和农村的粪便、 V4 二 堆肥)。 1 . 3 沼气发酵是指以粪便为原料,在密闭、厌氧条件下的厌氧性消化 ( 包括常温、中温和高温消 化) 。 2 标准值 经尤害化处理后的堆肥和粪便应符合表 表 1 1 、表2 的卫生标准。 高温堆肥的卫生标准 编号项, IU 生标准 t 堆肥温度最高堆温达5 0 . 5 5 C 以上 ,持续5一7 天 2 蛔虫卵死1率9 5.1 0 0 % 3 炎大肠菌俏 1 0 1 一1 0 z t 苍蝇
3、有效地控制苍蝇华i 1 ,堆堆i P J I伺 没有活的 0 1 毛 、蛹或新羽化的成蝇 中华人民共和国卫生部1 9 8 7 一 0 6- 0 8 批准 1 9 8 8一 0 4 一 0 1 实施 GB 7 9 5 9一 8 7 表 2 沼气发酵的 “ 生标准 编弓l tA I ! I : f “ 1: d 1 : I 密封贮存期3 ( 1 天以 2 高L . 沼气发解温度5 3 士2C # $ 续 2 大 3 寄/ ! 虫o il 沉降率9 5 %以 ! 4 血吸虫卵和钩虫卵在使” 粪液, , 不得检出活的血吸虫O H 和钩虫P ill n i ti 大肠 菌价 常温沼 1 1 . 1 1
4、1 . 1 1 1 . 1 1 0 . 5 5. 6 5 3 4. 6 4. 3 3. 6 1. 1 1 . I 1 0. 6 ( . 4 0. 1 0. 0 4 t ) . 1 1 4 表 A2 粪大肠菌群菌值计数表 fi , 4: i i , e ( ml) 菌 1A 1 1 . 010 厦 川1 1 . 1 1 1 . 1 1 1 . 1 1 I ( ) 5 ( ) , 5 6 0 . 5 3 1 1 . 4 6 吃 ) . I 3 ( ) . 3 6 1 1 , 1 1 ( )】 0 0 . 0 6 ( )0 4 0 . 0 1 ( ) . ( ) 川 ( )0 01 GB 7959一
5、 87 表 A3 粪大肠菌群菌值计数表 接种I, , , g ( . I - ) 菌 值 0. 10 . 010 . 0 0 10. 0 0 0 1 + + 十 十 十 + 十 + 十 十 + + + 牛 十 干 十 + + + + 十 十 十 十 十 十 十 十 十 十 十 0 . 1 1 1 0 . 1 11 0 . 1 11 0 . 1 0 5 0 . 0 5 6 0 . 0 5 3 0 . 0 4 6 0 . 0 4 3 0 . 0 3 6 0 . 0 1 1 0 . 0 1 0 0 . 0 0 6 0 . 0 0 4 0 . 0 0 1 0 . 0 0 0 4 0 . 0 0 0 4
6、 表 A4 粪大肠菌群菌值计数表 4种4 1 ,只( . L) 菌 值 0 . 010 . 0 0 10 . 0 0 0 10 . 0 0 0 0 1 十 + 十 十 十 + 十 + + + 十 十 十 十 十 十 十 千 十 + 十 十 + + 十 0 . 0 1 1 1 0 . 0 1 1 1 0 . 0 1 1 1 0 . 0 1 0 5 0 . 0 0 5 6 1 1 . 0 0 5 3 0 . 0 0 4 6 0 . 0 0 4 3 0 . 0 0 3 6 0 . 0 0 1 1 0 . 0 0 1 0 0 . 0 0 0 6 0 . 0 0 0 4 0 . 0 0 0 1 0 .
7、0 0 0 0 4 0 . 0 0 0 0 4 7 2 GB 7 9 5 ,一 87 表 A S 粪大肠菌群菌值计数表 接种殷,g ( . L) 菌 值 0 . 0 0 10 . 0 0 0 10. 0 0 0 0 10 . 0 0 0 0 0 1 十 + + + + + + 十 + 十 十 十 十 十 十 十 十 + 十 + 十 十 + 十 + 十 + + + + 十 + 0 . 0 0 1 1 1 0 . 0 0 1 1 1 0 . 0 0 1 1 1 0 . 0 0 1 0 5 0 . 0 0 0 5 6 0 . 0 0 0 5 3 0 . 0 0 0 4 6 0 . 0 0 0 4 3
8、 0 . 0 0 0 3 6 0 . 0 0 0 1 1 0 . 0 0 0 1 0 0 . 0 0 0 0 6 0 . 0 0 0 0 4 0 . 0 0 0 0 1 0 . 0 0 0 0 0 4 60 . 0 0 0 0 0 4 表 A 6 粪大肠菌群菌值计数表 接种量,g ( . L) 菌 值 0 . 0 ( 1 0 10 . 0 0 0 0 10 . 0 0 0 0 0 1 0 . 0 0 0 0 0 0 1 + + + + 十 十 + 十 十 十 + 十 十 十 十 + 十 + + + + + + + 十 )0 . 0 0 0 1 1 1 0 . 0 0 0 1 1 1 0 . 0
9、 0 0 1 1 1 0 . 0 0 0 1 0 5 0 . 0 0 0 0 5 6 0 . 0 0 0 0 5 3 0 . 0 0 0 0 4 6 0 . 0 0 0 0 4 3 0 . 0 0 0 0 3 6 0 . 0 0 0 0 1 1 0 . 0 0 0 0 1 0 0 . 0 0 0 0 0 6 0 . 0 0 0 0 0 4 0 . 0 0 0 0 0 1 0 . 0 0 0 0 0 0 4 , - 0 . 0 0 0 0 0 0 4 GB 7959一 87 4大肠菌群检验程序 乳 峪 发 4 4。5 . 不 产 气 令 报告 产气 品红亚硫 3 7 L, l 8 酸钠平皿 2
10、4 h 革兰 无芽 抱杆自 拼大 恶 肠菌 群阴 寸 拢大肠菌群 龚 大 肠菌 碑阳 性阴 性报告 报告 报告 样品稀释和接种小意图 mL 依次类准 伪释 . L m L .L m L.L m a扣 0 00 m L 卜 目 ” 样品t o g 灭翻水 10o m L 祝悬 浪 G日 7 9 5 牙 一 吕7 附录B 堆肥姻虫卵检查法 ( 补充件) B. 1 样品处理 从现场采回的许多堆肥样品,其中粪便和垃圾量的配比,各有不同, 夏季因瓜果皮核烂菜等较多, 有机物含量大, 湿度也较高,冬季含炉灰渣等较多,无机物含量高,湿度较低;有的已经腐烂,颜色 较黑,有的尚未发酵,质地较粗, 无论如何,样品
11、到达实验室后,都须先加处理。其步骤为: B - 1 . 1 各层样品经混匀后,分别倒于 搪瓷盘内,用镊f - 挑去其中的夹杂物如炉渣、碎砖块、 废铜、 烂铁和布条等。 B. 1 . 2 经搅匀 后, _ 称出5 0 0 g ,作为供检验用的样品。 B . 1 . 3 为能查到具有代表性的堆肥蛔虫卵样品,应将此5 0 0 g 样品中较大的土 颗粒予以压碎,用孔 径2 m m的铜筛过筛, 收集下面筛出的较细样品,不少于l o n g ,为避免因湿度大,筛出 物少, 不及 1 0 0 g ,可预先将孔径3 m m的铜筛叠在2 m m的上面,用力振摇,这样,必要时可取留在孔径 2 mm 筛上 样品的一
12、部分,凑 成1 0 0 g 。 注:有时从现场采得的堆肥样品,多属未腐烂的蔬菜帮f 、瓜果皮核和草梗等,难以筛出七 粒状物。 在此情况 卜 , 可 把 t 定6 S 的71e 合均匀样品,用剪r 稍事剪小后,清水8 C 泡,继将洗液静置沉淀,而后收集沉淀物务检。 B . 1 . 4 将经过处理的样品装于适当大小的广口 瓶中, 贴上 标签。 于 注:经 卜 述71ti 合均匀而又有代表性的许多份堆肥样品。如一时未能龟部检验完毕,则需滴加一些防腐齐 U 如 3 0N fi S r尔哈 林 溶 液 , 或3 认 。 盐 酸 溶 液 , 加盖 后, 放置 冰 箱 中 , 月 的 在士 防 止 原 生
13、动 物 和ti 菌 的 繁 欲 , 影 响 观察 , 和 避免话的蛔虫卵进一步发育,准以了解采样当时的发育情况。 B . 2 堆肥样品显微镜检查 检验堆肥蛔虫卵的原理,是先用碱性溶液和已经处理过的堆肥样un n 充分混合,分离 蛔虫卵,继用 比 重较蛔虫卵比重大的溶液为漂浮液,使蛔虫卵漂浮在溶液的表面,从而收集检验之,或加人清水, 因炯虫卵的比重大于水的比重,使蛔虫卵沉在水底,从中吸取纲虫卵检验之。 B . 2 . 1 漂浮法: 所用的为饱和硝酸钠溶液离 心漂浮法, 操作步骤类似土壤蛔虫卵检查法: 8 . 2 . 1 . 1 分离:称取5一l o g 经过处理的堆肥样品于容it s 5 0 m
14、 L清洁铜离心箫或塑料离心命 知 , 。 注 人 5 % 氢氧化 钠溶液2 5 - 3 0 m i,另加玻璃珠约1 0 粒,用适当大小的橡皮塞了 紧塞 管口,置电动振 荡 机上 , 振荡1 0 一 1 5 m i n ,每分 钟2 0 。 一 3 0 0 次, 挣置1 5 - 3 0 m i n 后,再行振荡, 如 此重 复3 一4 次, 使 堆肥 样品为 碱 性溶液 所iQ 透, 加上玻 璃珠的 掩击和摩擦,则 混合液中的 蛔虫卵, 不再被枯着在一 起。 B . 2 . 1 . 2 漂浮:从振荡机上 取 卜 离b 竹, 褐去橡皮塞r ,用滴怜吸取清水, 将附着在皮塞 1 _ 和管 内 壁的泥
15、状物,冲 入布 争 : ,以免 一 小部分虫卵的漏检。而后再在离心机上离心3一5 m i n , 侮分钟 2 0 0 0 - 2 5 0 0 转。倒去多余的氢氧化钠溶液,水洗一 次,即加清水将沉淀物搅浑后,离心,倒去卜 面的 脏 水。 随后加人少靛饱和硝酸钠溶液 ( 比重1 . 3 8 一 1 . 4 0 ),用玻璃棒搅成糊状后,徐徐添加 饱和硝酸 钠 溶 液 , 随加 随 搅,1 、 加 到 离 竹口 约I c m 为比 , 此 时 将 附在 玻 棒卜 的 棍 合 液也 用 一 两 滴 饱和硝酸 钠 溶 液,冲人布 勺 , ,离心3一5 m i n ,每分钟2 0 0 。 一 2 5 0 。
16、 转,由于蛔虫卵的比重小于饱和硝酸钠溶液的 比重,因此经离心后, 竹i l ! 的蛔虫卵,就会漂浮在俏酸钠溶液的表面。 8 :. 2 . 1 . 5 移改液膜:用直径略小 ! I c m的金属丝圈 ( 状如细菌学 卜 所川的接种环) 不断将表层液 膜 移I _ 盛有半 杯洁水的小烧杯i i i ,约3 0 次后,再 次搅拌和离心,适当 增加一 些饱和硝酸钠溶液,如此 反 复 操作3 一4 次,八 到液膜涂州术在见 虫卵为I f_ o G皿 7 9 5 9 一 橄 7 B. 2 . 1 . 4 抽滤: 将烧杯中含卵混悬液, 通过高尔特曼氏 漏斗,抽滤于直径3 5 m m,无裂纹和孔眼 的微孔火棉
17、胶滤膜上 ( 孔径0 . 6 5 一 0 . 8 0 w m ) ,混合悬液中的蛔虫卵,全部阻留在微孔滤膜上。 有时由 于样品中 蛔虫卵数量过多,浑浊度大,不易为一张滤膜所滤过时,则可另添一或二张滤膜。 B. 2 . 1 . 5 镜检:抽滤完毕,立即用眼科弯头小镊子,将滤膜从漏斗的滤台上 小心取下,平铺于4 x 7 . 5 c m的大型载物玻璃片上,趁湿在低倍显微镜下直接检查,最好滴加两三滴5 0 % 甘油溶液, 这样, 蛔虫卵在比较透明而无气泡的视野中,便于观察和计数。 B. 2 . 2 沉淀法:水洗离心沉淀法,操作步骤如下: B . 2 . 2 . 1 水 洗: 称取t o o g 经过处
18、理的 堆肥 样品或一 定量经过剪小的蔬菜帮子 等 有机堆肥的浸出 沉 淀物,放在5 0 0 m L三角 烧瓶中,加人5 % 氢氧化钠溶液1 0 0 -1 5 0 m L和三、四十粒玻璃珠, 塞以橡皮 塞。浸泡半小时后,振摇34 m i n ,将上面的液体,倒人大烧杯中,再加等量清水于三角烧瓶中, 浸洗三、四次,直到洗出液透明为止。 B . 2 . 2 . 2 过滤并水洗沉淀: 将前后 收集的洗液,用l 一2 层纱布过滤于l o o O m L 锥形量杯中,静 置半小时至一小时后,倒去上 层液体,如此,约半小时换水一次,直至上 层水澄清为止。 B . 2 . 2 . 3 测定体积:用虹吸管慢慢吸
19、去沉淀上面的液体,将沉淀物倒人刻度量筒中,测量沉淀物 的容积。 B. 2 . 2 . 4 镜检:将沉淀物搅浑,搅匀,迅速用 1 m L玻璃吸管吸取0 . 0 5 和o . 1 m L于载玻片,盖以 盖玻片 ( 依盖玻片的大小,分别对2 或3 、4 片不等)在低倍镜下 检查并 计数。 B. 3 雌 肥姐虫卵数t测定法 堆肥中 含有的 蛔虫卵 数,往往较多, 用 饱和硝 酸钠溶液离心漂浮法时, 5 一l u g 样品中的蛔虫O p , 高度集中在滤膜上,在显微镜下计数时容易混乱,因此,最好能在显微镜的目 镜筒内,装上一枚目 镜 计数网, 利用移 动尺有规律的移动,逐渐数完整个滤膜上的全部蛔虫卵 数
20、。例 如5 0 0 9 有代表 性 的原始 堆肥样品,经挑去夹杂 物并过筛后,得1 8 4 9 ,其中的l o g 用 饱和硝酸钠溶液离心漂浮后,在滤膜上数 得蛔虫卵数为3 5 0 个,则 含有的蛔虫卵数。 3 50 一X 1 0 1 8 4 二 6 4 4 。 个。 实际上,1 8 4 8 的含有 数,亦即代表5 0 o g 原始堆肥所 在用水洗沉淀法时,需要准确测定沉淀物的容 积,在用玻璃吸管吸取沉淀以供镜检时,必须搅拌 均匀而后取样,而且需要连续观察若千次,而后取其平均数,从而计算1 m L沉淀物的虫卵数,最后 乘以沉淀总容积数,便是1 0 0 g 原始堆肥样品的虫卵 数。 B . 4
21、绷E 蛔虫 卵 生活力 测定法 目前测定堆肥蛔虫卵生活力所用的方法, 除了采用简单易行的直接镜检法外, 普遍采用培养法,而 染色法则因操作较为复杂,不如直接镜检法简便, 效果不如培养法的可靠,因为未普遍采用。 B . 4 . 1 直接 镜检法: 是根据蛔虫卵在发育 过 程中 所出 现的各种形态,以 鉴别其 死活。首先是鉴别 受精卵和未受精卵,其次是鉴别有生活力和失去生活力 ( 变性卵)的受精卵和含有幼虫卵的形态。 采用直接镜检法时,有关形态鉴别要 点如下: - B. “ . 1 . 1 未受精蛔虫卵的形态:多为长椭圆形,有时呈三菱形或不规则形,大小平均为8 0 - 9 8 x 4 0 - 6
22、0 p m,一般为黄 褐色 , 有时蛋白 质壳发育 不全, 有时完 全失去蛋白 质壳,卵内 经常充 满大大小 小油滴状的卵黄细胞。 B. 4 . 1 . 2 受精蛔虫卵的形态: 活的受精蛔虫卵的形态:蛋白质壳为黄褐色, 脱去蛋白 质壳的为无色透明,、 砰 均大小为5 0 一 7 0 X 4 0 一 5 0 v m; 外层卵 壳厚,内 层壳薄, 有屈光 性, 最外层的蛋白 质壳也 很厚, 呈 乳状或花纹状突起。 卵内 有一 个球形的卵细胞,卵壳两端和卵细胞之间,有半月形的空隙,卵内的卵黄颗粒清晰而致密。 死受精蛔虫卵 ( 变性卵)的形态: CB 7 9 5 .一 87 卵细胞移向一端,致使卵壳两
23、端呈现有大小不等的半月形空隙。 卵内 脂肪变性,形成空泡, 很像未受精卵, 高温堆肥样品中卵内 的空抱尤为 显著。 卵细胞颗粒减少或消失。 卵细胞质浑浊,呈黑色或棕黑色。 卵细胞向不定部位呈球状收缩。 卵壳的一侧或两侧,一端或两端向内凹陷或破裂。 只有蛋白 质壳,而缺内容物。 B . 4 . 1 . 3 含有活幼虫卵的形态: 气 虫体的前后部没有颗粒,中部颗粒清晰而有金属光泽,有立体感,镜检时,注视或轻压,可见有 轻微蠕动,强压后,有时可挤出幼虫。 B . 4 . 1 . 4 含有死幼虫卵的形态: 幼虫体内几乎充满颗粒, 且模糊不清, 无金属光泽,缺乏立体感,镜检时注视之, 久久不见蠕动, 稍
24、 稍 加热或轻压,不会蠕动; 强压时,虽能挤出幼虫, 但也不改变其原来的卷曲状态。 以 上所列是死活蛔虫卵的一般形态,在镜检中有时会遇到外形发生变化的 畸形活卵和各种形态的 未 受精卵,以及容易误认为寄生虫卵的异物。 B . 4 . 2 滤膜培养 法: 把上述通过饱和硝酸钠溶液离心漂浮后收集在滤膜上的 蛔虫卵, 经过 计数后, 宜接用来培养,称为滤膜培养法。 滤膜培养法测定蛔虫卵生活力的操作步骤如下: B . 4 . 2 . 1 在直径1 0 . 1 2 c m的玻璃平皿的底部平铺一层厚约l c m的脱脂棉 ( 或微孔塑料),脱脂 棉 上铺一张直径与平皿等大的普通滤纸。 B . 4 . 2 .
25、 2 为防止霉菌和原生动物的繁殖,可加人2 3 %甲 醛溶液或甲 醛生理盐水,以湿透滤纸 和 脱脂棉。 B . 4 . 2 . 3 把含卵滤膜平铺在皿中滤纸上, 加盖,并在皿盖上编号。一个平皿可同时放上几张滤膜, 互不接触。 B . 4 . 2 . 4 把平皿放在2 4 - 2 6 的恒温箱中培养一个月,培养过程中经常滴加清水或2 一3 % 的甲 醛 溶液,使滤膜保持潮湿状态。 注:堆肥样品中的蛔虫卵,因受温度的影响,死卵的形态变化比较显著,往往培养不到一个月,即能明确判定为 死卵,无需继续培养。 B . 4 . 2 . 5 培养一个月后自 皿中取出滤膜置于载玻片上,滴加5 0 % 甘油溶液,
26、使其透明后,在低倍 镜 下 查找蛔虫卵,然后在高倍镜下,根据形态,鉴定卵的死活,并加以计数。 镜检时有时会感到视野 的 亮 度和 滤膜的透明度不够理想,则可在一张 载物片上, 滴一滴清水,另 用一 张盖玻片从滤膜上刮 下 少 许 含卵 滤渣,与水混合搅匀,盖上同一盖玻片进行镜检,或是在载玻片上滴1 一2 小滴3 0 % 安替福 尼 液 代替 清水,蛔虫卵外面的蛋白质壳很快被溶解掉,内 部构造便于观察。凡含有幼虫的,都认为是 浩 卵 , 其 他阶段的或单细胞的,都判为是死卵。 GB 79 59一 . 7 附录C 粪稀姻虫卵检查法 ( 补充件) C. 1 样品处理 自密闭化粪池或沼气发酵池等不同类
27、型的粪池中采集的粪稀样品,因为是分别采自 进出料口以及 上下不同的层次,所以样品有稀有稠,稀者 状如水样, 稠者形若污泥和新鲜粪便。 样品送到实验室后, 不沦稀稠,均应尽快倒于适当大小的玻璃容器内,加以搅拌均匀,而且在搅拌的同时,用镊子挑去浮 在上面的或混在其中肉眼所能看到的夹杂物。 C. 2 粪稀样品显微镜检查 粪稀样品经过如上 的处理后,进一步进行蛔虫卵的检验工作,包括定量检验蛔虫卵的数量测定和 定性检验 ( 蛔虫卵生活力的测定) 。 C. 2 . 1 粪稀蛔虫卵数量测定法 沼气池等进料口的样品,因为稠度较大, 适于采用稀释法。而出料口 的样品,由于较稀,则以采 用浓缩法为佳。 C. 2
28、. 1 . 1 稀释法:采用的有两 种方法,即滤膜法和司 徒氏法。 C. 2 . 1 . 1 . 1 滤膜抽滤稀释计数法操作步骤如下: C. 2 . 1 . 1 . 1 . 1 取混匀的进料口粪稀1 0 0 m L,加水稀释至3 0 0 “ - 5 0 0 m L , C. 2 . 1 . 1 . 1 . 2 用6 0 孔的金属筛子过滤于5 0 0 m L锥形量杯中,静置3 0 m i n o C. 2 . 1 . 1 . 1 . 3 倒去沉淀上部的液体,将沉渣移人5 0 m L离心管中,离心3 m i n ,每分钟2 0 0 0 转。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . 4 倒去上 清液,
29、加人2 0 m L 5 % 氢氧化钠溶液或3 0 % 安替福尼 溶液。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . 5 每隔1 0 m i n 用玻璃棒搅拌均匀,以促进蛔虫卵和杂质的分离。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . 6 1 h 后,加水近满,经搅拌后,离心3 m i n 后,弃去上部碱性溶液。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . 7 加人饱和硝酸钠溶液或饱和食盐水,搅拌后,离心3 一5 m i n ,每分钟2 0 0 0 一 2 5 0 0 转。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . 8 用玻璃吸管吸取漂浮液,放置于盛有清水的小烧杯中。 C. 2 . 1 . 1 . 1 . , 将此含
30、卵混悬液抽滤于1 张滤膜上 ( 滤膜规格同堆肥蛔虫卵检查法) 。 C . 2 . 1 . 1 . 1 . 1 0 在显微镜下计算全滤膜上的蛔虫卵 数,该数即代表原1 0 0 m L进料口粪稀中的蛔虫 P P 数。 C . 2 . 1 . 1 . 2 司 徙 ( S t o l l )氏虫卵稀释计数法:其原理系将定量 ( 重量或容 积均可)的稠粪样品, 稀释为定U的稀释液,经混合均匀后,从中再吸出一定量的稀释液,在显微镜下,计数其中含有的蛔 虫卵。然后按稀释的倍数,计算出该稀释液中的卵 数,最后换算成单位重量或容积原样品中含有的蛔 虫卵数。只体操作为: C. 2 . 1 . 1 . 2 . 1
31、用一支i o o m L硬质玻璃试管,在容水4 5 m L处作一标志或刻度。 C. 2 . 1 . 1 . 2 . 2 称取 3 g 搅匀的粪稀样品,装人试管中,注人 1 / 1 0 当量的氢氧化钠溶液至4 5 mL标 5 : 或刻度处,另加 十 数粒玻璃珠。 C. 2 . 1 . 1 . 2 . 3 用橡皮塞广 紧塞份C J 后,极力 振摇,使成均匀的混合液为止。如样品中含有粪块, 最好放置过夜,使有足够的消化时间。 C. 2 . 1 . 1 . 2 . 4 翌晨在计数前再把它摇匀。摇后速用 1 m L刻度吸管,吸取混合液0 . 1 5 m L于大型载 物片 ( 3 7 一 7 5 m m
32、)匕 盖以2 2 x 1 0 m m的盖玻片 ( 如缺大载物片,则将吸出的0 . 1 5 m L混合液分滴于 2一3 张 一 般大小的载物片 上,盖以1 0 一1 8 m m的盖玻片亦可) 。 GB 7,5,一 公7 0 . 2 . 1 . 1 . 2 . 5 然后在低倍显微镜下数完0 . 1 5 m L棍悬液中所有的蛔虫卵 数,将所数得的卵数乘以 1 0 0 , 即为每克粪稀中所含有的蛔虫卵数。 如样品稍稀,不用玻璃试管,改用l 0 0 m L三角 烧瓶亦可,在容积6 0 m L处,刻一刻度, 取混匀的 粪 稀 样品4 m L于此刻度 烧瓶中,注 人1 / 1 0 当 量的氢氧化钠溶液,至6
33、 0 . L刻 度处, 再放人十 粒玻璃 珠 ,用橡皮塞紧塞瓶C I ,极力振摇,直至1 民 合液呈均匀状态为止。然后吸取0 . 1 5 m L漫合液于载玻片 上 , 盖以盖玻片,并在低倍镜下进行蛔虫卵计数, 将所得的卵 数乘1 0 0 , 即是每毫升粪 稀中所含有的蛔 虫卵 数。 0 . 2 . 1 . 2 浓缩法:由于蛔虫卵的比重大于水的比重,在水中容易下沉。沼气池出 料I7 粪稀含水多, 粪 便 较少 ( 水与粪 便之比,约为2 0 : 1 ) ,因此,含蛔虫卵量相应也少,上 层粪稀含卵缝当更少。 检杏 时,可采用自然沉淀法和滤膜抽滤法两种方法。分别如下: . 2 . 1 . 2 . ,
34、 自然沉淀法: C . 2 . 1 . 2 . 1 . 1 取出料口上 层粪稀3 0 0 0 4 0 0 0 m L,下层粪稀1 0 0 0 - 2 0 0 0 m L,分别用6 0 月 铜筛过滤 于1 一2 个2 0 0 0 m L 锥形量杯中,让其自 然沉淀。 0 . 2 . 1 . 2 . 1 . 2 经I h 后,倒去沉渣上层的液体,另 换清水, 搅浑后, 静置, 让其自 然沉淀。 0 . 2 . 1 . 2 . 1 . 3 反复水洗沉淀,至沉渣上面的 水接近无色和澄清后, 弃去上清 液。 0 . 2 . 1 . 2 . 1 . 1 将沉渣倒人I O O m L量筒中,测量沉渣的容积。
35、 0 . 2 . 1 . 2 . 1 . 5 经充分 搅拌后,用1 m L玻 璃吸管, 迅速吸取沉渣O . 1 m L于 载玻片上,盖以盖玻 片。 CZ , 二之 . 1 . 6 在低倍显微镜下,作蛔虫卵计数。 C . 2 . 1 . 2 . 1 . 7 反复检查几次后,取其平均数, 从而推算原i 0 0 m L粪稀所含有的蛔虫卵 数。 C . 2 . L2 . 2 滤膜抽滤法: 0 . 2 . 1 . 2 . 2 . 1 将出料口 不同层次采得的定量粪稀样品,用6 0 目铜筛过滤。 C . 2 . 1 . 2 . 2 . 2 除比较混浊需要反复水洗沉淀外,可直接抽滤于滤膜上。 C . 2 .
36、 1 . 2 . 2 . 3 将滤膜平 铺在大型载玻片上, 加透明剂后,在显微镜下,作 蛔虫卵计 数,从而计算 出 每1 0 0 m L粪 稀中 蛔虫卵含有 数。 C . 2 . 2 粪稀蛔虫卵 生活力测定法 0 . 2 . 2 . 1 滤膜培养法: 将上面进行纲虫卵计 数所用过的滤膜,放在培养皿中, 2 4 一2 6 C 一 1 培养 一 个 月 ,然 后 从滤膜上 刮下沉渣, 镜检1 0 0 一 2 0 0 个 蛔虫卵,其中发育到 幼虫期者, 认为是活卵, 其他 各 期 均视之为死卵。 0. 2 . 2 . 2 C. 2 . 2 . 2 . 1 C 22 . 2 . 2 C. 2 . 2
37、. 2 . 3 2 . 2 . 2 . a 1 - 2 mi n , 清水培养法 操作如下; 将通过水洗沉淀所得的含卵沉渣,倒人l o m L离心管内。 离t, 3 mi n ,每分钟2 0 0 0 转。 倒去L 清液,注人饱和食盐水, 用毛细吸管吸取液面漂浮物于另 搅拌后,离心漂浮3 m i n ,转速同前。 一 离心管内,加清水, 经搅拌后, 以如上的i $ 速, 离心 . 2 . 2 . 2 . 5 吸去上 清液,再加清水2 4 m L 搅浑管底的沉淀, 加5 % 福尔马 林溶液1 一2 滴。 . 2 . 2 . 2 . 6 置2 4 - 2 6 0C 温箱中培养一个月,在培养过程中每E
38、 1 换水。 CC C . 2 . 2 . 2 . 7 培养完毕 ,用玻璃吸管吸取沉淀 物, 做成涂片,在显微镜下观察并计 数1 0 0 一 2 0 0 个 蛔 虫 卵 , 将发育为 幼虫期的,认为 是正 常的活卵,其他形 态者,都认为是不发台 卵或 死99 1N . C日 7 9 59一 8 7 附录D 粪稀钩虫卵检查法 ( 补充件) 在 粪 稀中 检查 钩虫卵,可以直接从粪 稀样品中 检查虫卵,或通过培养,间 接检获 钩虫幼虫。 其步 骤可分为: D . 1乖 我 70 n 处理:参照粪稀蛔虫卵检查法。 D . 2粪稀样 品显微 镜检查: 步骤大致同 粪稀蛔虫卵 检查 法。 稠的样品用 稀
39、释 法, 稀的用浓缩法。 D. 2 . 1 钩虫虫卵的检查 D. 2 . 1 . 1稀释法: 除可采用滤膜法和司 徒氏 法 ( 参见粪 稀蛔虫卵检查法) 外,也可采用水洗 沉淀 法。是因为钩虫卵的比重 ( 1 . 0 6 )大于水的比重,在水中会逐渐下沉。操作如下: D . 2 . 1 . 1 . 1 依粪稀样品稀稠度的不同,称取样品3 一5 g ,放在烧杯中,先加少量清水, 充分搅拌 均匀,然后陆续加水,使成混悬液。 D. 2 . 1 . 1 . 2 用1 2 层纱布过滤于5 0 0 m L锥形量杯中,加水到近杯口。 D. 2 . 1 . 1 . 3 经1 h 后,倒去上液,另 换清水, 搅
40、浑后,静置之,使其自然沉淀。 D . 2 . 1 . 1 . 4 半 小时后, 再弃去上清液, 反复 进行到上面的水接近无色和 澄清。 D . 2 . 1 . 1 . 5 弃去上清液,将沉渣倒人量筒中,测定沉渣的容积。 D. 2 . 1 . 1 . 6 充分搅拌后,迅速用 1 m L玻璃吸管吸取沉渣0 . 1 m L,放在载玻片上,加盖玻片 ( 必 要时可分成2 片) 。 D . 2 . 1 . 1 . 7 在低倍镜下检查,并作虫卵计数。 D . 2 . 1 . 1 二 反复检查1 0 片后,算出每0 . 1 m L沉渣中虫卵平均数。最后再计算单位容积粪 稀中的钩 虫卵数。 D . 2 . 1
41、 . 2 浓缩法:亦可采用自然沉淀法和滤膜抽滤法。详见粪稀蛔虫卵检查法。 D. 2 . 2 钩虫幼虫的检查 D . 2 . 2 . 1小试管培养法,操作如下: D . 2 . 2 . 1 . 1 用剪刀把滤纸裁成9 x 1 . 5 c m、边缘光滑的长纸条。 D . 2 . 2 . 1 . 2 于l o x l c m的小试管中加人清水1 2 m Lo D . 2 . 2 . 1 . 3 沿纸条长径,将滤纸左右对折,再摊平。 D. 2 . 2 . 1 . 4 用吸管吸取粪稀或其沉淀物,涂抹于纸条的中上段 ( 面积约为4 x 1 . 3 c m) 。 D . 2 . 2 . 1 . 5 滤纸F
42、面垫以吸水性强的粗草纸,以便吸去多余的水分。 D. 2 . 2 . 1 . 6 将涂有粪稀的纸条插人小试管中,下端浸人水里,而水又不接触粪稀。 D. 2 . 2 . 1 . 7 nft o 口 外面贴上样品号,并用纸包严,以防污染。 D . 2 . 2 . 1 . 8 把试管放置2 5 一 3 0 恒温箱中 培养。 D. 2 . 2 . 1 . 9 每天加水,防止千 燥。 D . 2 . 2 . 1 . 1 0 培养5 天后取出,在光线下用肉眼或放大镜,观察管底水中有否乳白色, 呈蛇形状活 动的钩9 。或将管内水倒人平 皿中。 D . 2 . 2 . 1 . 1 1 将4 5 一 4 8 C
43、温水倒满试管中,静置2 0 m i n ,钳弃纸条,再静置 沉淀半小时, 倒去上层 液体,把沉淀物倒人另一平皿内。 D. 2 . 2 . 1 . 1 2 用碘液杀死两个平皿中的钩蝴并使之染色。也可加人 1 0 %盐水, 稍事沉淀, 以杀死粪 池中自由生活线虫。 D. 2 . 2 . 1 . 1 3 在显微镜下作钩勤计数。 D. 2 . 2 . 2 双重平 皿滤纸培养法,操作如下: GB 7959一 87 D. 2. 包裹后, 2. 2. 1 取大小两个平 皿,小的直 径约6 c m,大的直径约1 0 c m,将小平 皿的底及周围用滤纸 皿底朝 _ ,曰朝下 ,安放在大平皿的中央。 D. 2 .
44、 2 . 2 . 2 箱中培养。 D. 2. 2. 2. 3 D. 2. 2. 2. 4 D. 2. 2. 2. 5 称取粪 稀约3 0 g ,经过水洗沉淀后,把含卵粪渣放在小平 皿底的滤纸 卜 , 放在2 8 C 恒温 每H加水,防1 卜 滤纸 I 几 燥。 三日 后,在大平 皿内加水。以后每天检杳并加水,保持水深3一4 m m. 5一7 大后取出, 钩虫、 于 大平皿中滴加碘液,在解剖镜下,作钩蝴检杳并计数。 粪类圆线虫、东方毛圆线虫丝状蝴鉴别要点 要.火 钩虫 粪类圆线虫 东方毛圆线虫 蜘体 长4 食道 长度 生4 t i 原从 I 端 0 . 5 -0 . 7 m. 己 ; 休长1 /
45、 5 位于 一 蝴体中部 尖细 0 . 5 .m 占 体长1 / 2 位寸 一 蝴体后部 分又 0 . 7 5 .m 占 休长14 钝圆,有小球状物 GB 79 59一 37 附录E 粪稀中 血吸虫卵检壹法 ( 补充件) 粪稀血吸虫卵的检验、可以用沉淀法在显微镜下找虫卵,用孵化法找毛幼。 E. 1 沉淀法 操作方法如下: E - 1 . 1 取粪 稀样品约3 0 g ,放于烧杯或搪瓷杯中,加水调成糊状。 E . 1 . 2 通过4 0 - 6 0 日 铜丝筛,滤人5 0 0 m L锥形量杯中,加水近满。 E . 1 . 3 静 置2 。 一 3 0 m i n 后,待沉渣沉淀, 倒去上 层粪水
46、, 保留沉渣约3 0 m L, 换加 清水至原刻度处。 以后每隔2 0 - 3 0 m i n ,换水一次。直到上浮液澄清为止。因为血吸虫卵必须人水才能孵化。而且在清 水巾较易孵化,所以粪 稀必须冲洗至上 浮液澄清为止。 E . 1 . 4 经3 一4 次换水后,用玻璃吸管吸取沉渣,作成涂片, 镜检有无血吸虫卵。图片的面积约 占玻片面积的23 ,其 厚度以能透过涂片看清报纸上的印刷字体为标准,过厚时可加清水I 2 滴稀 释之。 E . 1 . 5 一般要求每份粪稀, 至少观察3 张涂片, 每张图片观察时要有规律, 镜检时间应不少于2 m i n , f f 细分清血吸虫卵和其他蠕虫卵,并与粪稀
47、中常见的异物,如植物细胞等相区别。 E . i . 6 如连续镜检沉渣涂片三张,未发现有血吸虫卵时,将全部沉渣倒入2 5 0 m L三角烧瓶 ( 作为 孵化 瓶)0 1 ,加水近满,进行孵化。 E. 2 孵化法 孵化 法是依据血吸虫卵内的毛勤在适宜条件下 很快孵出,并游动于水表面下的特性。方法如下: E . 2 . 1 取约3 0 g 粪稀样品,先 经沉淀法浓集处理,继将处理的粪稀沉渣倒人2 5 0 m L 角烧瓶内, 加人清水至瓶口。城市中需用去氯水,或把自来水放置过夜,促其自然脱氯,或在水中加人少u硫代 硫酸钠 ( 每4 0 k g 水中,加人1 0 % 硫代硫酸钠溶液t m L)以除去余
48、氯。在无自 来水的地区,用河水或 井水作为孵化用水时,将水加温到7 0 -8 0 C ,待冷后再用,以免与水中原生动物相混淆,影响观察。 E. 2 . 2 置2 0 一 3 0 C 下进行孵化。毛蝴孵化最适宜的温度为2 5 - y 3 0 C,如在1 0 C 以下或3 7 以上, 则毛 勤不能孵出。孵化所需的时间,3 0 C 以上 ,I 一3 h ; 2 5 -3 0 C , 4- - 6 h ; 2 5 C以下,需过夜, 气温在1 5 以下时,4 0 h 左右。 故在4 , 此和2 4 h 后, 用肉眼或放大镜观察一次。观察时, 眼齐孵化瓶口, 对着光,瓶后衬以黑色 纸作背景,检查近瓶口1
49、一3 c m处,如见水面下有白色 点状物, 作直线来往游 动,遇到阻碍时,立即转变方向者,即是毛蜘,但需与水中一些原生动物如草履虫等相区别。草履虫 的运动,旱 螺旋样摇摆或滚动,必要时可用吸管将毛拗吸出,在显微镜下鉴别。 注意:气温高时毛锄i f i 速孵出,在自然气温2 5 以上 的季节,毛拗有在沉淀过程中 孵出而随换水 被倒去的可 能,因此应严格掌握换水的时间,以免因换水倒去毛勤。在这种情况下,可用1 - 1 . 2% 食盐水代替清水作沉淀,暂时抑制毛蝴孵出,而在更后一次沉淀时,再换清水进行孵化。 水的酸碱度会影响毛蝴孵化,孵化用水以弱碱性为宜,p H在7 . 2 - - 7 . 6 范围内。 GB 7959一 87 表 E1 蠕虫卵和 卜 蠕虫卵物质的区别 虫 H1 卜 虫卵 边缘齐 蛋形 ( 除绦虫哪外) 浅黄 或粽黄色 ( 除烧虫N I+ .膜壳绦虫卵外) 内右幼虫或胚细胞 。 丁 1 1 小盖或侧盖 不钻齐 不规则 白色或黄色 无 尤 表 E 2 血吸虫毛蝴与原生动物的区别 血吸虫毛蝴 原, t 动物 形状:针尖状 颇色:透明发亮,有折光 话动形式:横游或斜游,直线前进 话J i 范1 18 :般在水面 卜1一3 c m 扁形或圆形 灰白或灰
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