GB-15995-1995.pdf
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1、G B 1 5 9 9 5 一 1 9 9 5 前言 钩端螺旋体病是由 钩端螺旋体属的不同血清型致病性钩端螺旋体( L e p t o s p i r a i n t e r r o g a n s ) 引起的 一种人兽共患病。 它广泛分布于全世界, 我国本病危害严重。由于钩端螺旋体侵犯人的多种脏器, 所以 临床表现复杂。全年均有病人发生, 但常在夏秋季、 稻田收割季节和洪涝灾害引起发病和流行。人普遍 对本病易感, 以 青壮年发病较多。 自 从5 0 年代末期开始使用钩端死菌苗, 加强了传染源的管理和控制, 以及在农田 水利基本建设的 改善, 本病呈下降趋势, 由于本病的宿主动物多, 近年来我
2、国洪涝灾害发生频繁, 存在潜在流行的危险。 我国2 0 0 。 年预防保健目 标要求本病发病率下降4 0 0 0 , 为此制定适合于全国范围内的钩端螺旋体 病诊断标准及处理原则是十分必要的, 对保证人民健康和农业生产具有重大的意义。 本标准的附录A , 附录B都是标准的附录。 本标准由中华人民共和国卫生部提出。 本标准负责起草单位: 中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所, 参加起草单位: 福建省卫生 防疫站、 华西医科大学。 本标准主要起草人: 时曼华、 于恩庶、 戴保民、 梁中兴。 本标准由卫生部委托技术归口 单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。 中华 人 民共 和 国 国 家
3、标 准 G li 1 5 9 9 5 一 1 9 9 5 钩端螺旋体病诊断标准及处理原则 D i a g n o s t i c c r i t e r i a a n d p r i n c i p l e s o f m a n a g e me n t o f l e p t o s p i r o s i s 根据 中华人民共和国传染病防治法 及 中华人民共和国传染病防治法实施办法 制定本标准。 1 范围 本标准规定了钩端螺旋体病的诊断标准及处理原则. 本标准适用于各级、 各类型医疗、 卫生、 保健机构和人员对钩端螺旋体病的诊断和处理 2 诊断原则 钩端螺旋体病是由不同血清型致病性钩端
4、螺旋体引起的一种人兽共患病。人普遍易感。患者绝大 多数是青壮年农民, 临床表现复杂多样, 而且非典型病例亦较多。 应根据流行病学资料及临床表现做出临床诊断, 确诊需要分离钩端螺旋体和检测钩端螺旋体特异 性抗体 3 诊断标准 3 . 1 流行病学史 发病前 1 - 3 0 d接触疫水或动物尿或血 3 . 2 早期主要症状和体征 3 . 2 . 1 发热: 起病急, 可有畏寒。短期内体温可高达3 9 C 左右, 常为弛张热。 3 . 2 . 2 肌痛: 全身肌痛, 特别是排肠肌痛。 12 . 3 乏力: 全身乏力, 特别是腿软明显。 3 . 2 . 4 眼结膜充血: 轻者主要在眼球结膜、 外毗及上
5、下弯窿部, 重者除角膜周围外的全球结膜血管扩张 呈网状, 无分泌物, 不痛, 不畏光。 3 . 2 . 5 排肠肌压痛 双侧排肠肌压痛, 重者拒按 3 . 2 . 6 淋巴结肿大: 主要为表浅淋巴结及股淋巴结 一般为1 - - 2 c m, 质偏软, 有压痛, 无化脓。 以上三症状( 即寒热、 酸痛、 全身乏力) 和三体征( 即眼红、 腿痛、 淋巴 结肿大) 临床表现有五个类型钩 端螺旋体病( 流感伤寒型, 肺出血及肺弥漫性出血型, 黄疽出血型, 肾型, 脑膜脑炎型) 。 3 . 3 实验室诊断 3 . 3 . 1 从血液或脑脊液或尿液分离到钩端螺旋体 见附录A ( 标准的附录) 中A 1 ,
6、 3 . 3 . 2 从血液或尿液或脑脊液检测到钩端螺旋体核酸 见附录A( 标准的附录) 中A 2 1 . 3 . 3 . 3 病人恢复期血清比早期血清抗钩端螺旋体抗体效价4 倍或4 倍以上升高 见附录A ( 标准的附 录) 中A3 3 . 4 病例分类 3 . 4 门疑似病例 具备3 . 1 加 3 . 2 . 1 和 3 . 2 . 2 , 3 . 2 . 3中任何 一 条 国家技术监督局1 9 9 5 一 1 2 门 5 批准1 9 9 6 一 0 7 一 0 1 实施 G B 1 5 9 9 5 一 1 9 9 5 3 . 4 . 2 临床确诊病例 疑似病例加3 . 2 . 4 或3
7、. 2 . 5 或3 . 2 . 6 中任何一条。 3 . 4 . 3 确诊病例 疑似病例加 3 . 3 . 1 或 3 . 3 . 2 或 3 . 3 . 3 中的任何一条。 4 处理原则 41 早期发现病人, 向防疫部门报告疫情早期治疗。以青霉素注射为首选疗法, 有特效, 但应注意赫氏 反应的预防 见附录B ( 标准的附录) 中s 1 . 2 . 5 1 。对病人排泄物作消毒处理。 4 . 2 对易感人群的应急措施 在同时间同 地区内 接触同一 疫源的人群中, 如有一人发病, 对其余人 未接种钩体菌苗) 也应注射青 霉素, 或口 服强力霉素等应急措施进行预防治疗。 4 . 3 对易感人群的
8、免疫预防 对进人钩端螺旋体疫源地的易感人群, 进入疫源地前1 5 d 应进行钩端螺旋体菌苗全程基础注射。 4 . 4 对稻田 型钩端螺旋体病流行疫区 进行鼠 密度、 带菌率的监测和野外灭鼠, 降低鼠密度。 4 . 5 对洪水型钩端螺旋体病流行疫区开展猪的带菌率的监测, 并根据结果进行传染源家畜管理, 圈猪 更新, 降低猪的带菌率。 G B 1 5 9 9 5 一 1 9 9 5 附录A ( 标准的附录) 钩端螺旋体病的病原学和血清学诊断方法 A l 钧端螺旋体直接镜检和分离 A l . 1 病人血液的直 接镜检 A l . 1 . 1 取早期病人血液一滴, 加蒸馏水一滴, 使血细胞溶解, 在暗
9、视野显微镜下检查有否活动的钩端 螺旋体。 A l . 1 . 2 取早期病人静脉血1 -2 m l于无菌试管中待凝固 离心沉淀, 吸取血清与血细胞交界处略显 白色的悬液。 涂片后暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体。 A 1 . 1 . 3 差速离心暗视野检查法: 采集早期病人静脉血 1 m 工 , 加于含 2 m l拘椽酸钠盐水管中。 1 0 0 0 r / m i n 离心1 0 m i n , 吸上层血浆置另一清洁管中, 3 0 0 0 3 5 0 0 r / m i n 离心3 0 - 6 0 m i n 。 弃上清, 取 沉淀物一滴于玻片上, 暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体。
10、A 1 . 2 培养分离病原体 A l . 2 . 1 病人血液、 尿液培养: 采集早期病人血液, 无菌操作接种于2 - - 3 管K o r t h o f 培养基中, 每管接 种1 -3 滴。 血培养管置2 8 培养。 每隔5 - 7 d 取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺旋体生长, 若 有生长, 即为分离阳性。若未见生长, 需继续培养 6 0 d , 仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。 接取病后两周以上的病人中 段尿3 0 - 5 0 m L 于无菌离心管中3 5 0 0 - - 4 0 0 0 r / m i n 离心1 h 。 取沉渣 。 . 3- 0 . 5 m L 接种于2 - 4
11、 管上述培养基中, 2 8 C 孵育。 每隔5 - 7 d 取材镜检。 为 提高检出 率和减少污 染, 可在采集尿标本的前一天晚上给病人服碳酸氢钠( N a H C 0 , ) 2 -4 g , 同时, 在培养基中加入1 0 。 一 4 0 0 p g / m L 5 - 氟脉啼Q或1 / 2 0 0 0 的磺胺PER2e A l . 2 . 2 病人血液、 尿液接种金黄地鼠 或幼龄豚鼠( 体重1 2 0 1 4 0 g 之间) 。 A l . 2 . 3 菌株分群, 分型鉴定: 应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集试验, 确定菌群。应用交叉 凝集素吸收试验或分型因子血清来确定菌型。 A 2
12、 钩端螺旋体核酸的检测 利用聚合酶链反应和分子杂交技术检测钩端螺旋体核酸。 A 3 血清学诊断方法 A 3 . 1 显微镜凝集试验( MA T) A 3 门. 1 抗原的选择和制备: 将我国1 5 群1 5 型钩端螺旋体代表株于K o r t h o f 或T e p c k n n 培养基中, 2 8 C 培养5 - 7 d , 暗 视野显微镜检查, 每4 0 0 倍视野下不少于5 0 条, 运动活泼并无自 凝者可作显凝抗 原。 A 3 . 1 . 2 操作方法: 病人血清5 s 水浴灭活3 0 m i n 后, 用生理盐水以1 : 5 0 ( 早期病人血清) 或 1 : 1 0 0 ( 恢
13、复期) 和1 : 5 0 0 两个稀释度作定性试验: 两个稀释度血清以及作对照用的生理盐水各取5 0 I- L , 取 1 5 个代表株的培养液依次加人每列的三个孔中。 摇匀后3 7 C 孵育1 . 5 - - 2 h 。 用接种环挑取反应液及对 照, 放置载物玻片上暗视野显微镜下观察凝集情况。 若1 : 1 0 。 和1 : S o o 稀释血清与某一群钩端螺旋体 抗原发生凝集, 需进一步稀释该血清与该群钩端螺旋体抗原凝集, 以测定其凝集滴度。 凝集滴度按原血 清稀释倍数X2 计算 A 3 . 1 . 3 终点凝集滴度的判定: 以出现+凝集( 即视野中s o %钩体凝集) 的血清最高稀释度作
14、为终点 凝集滴度。 G B 1 5 9 9 5 一 1 9 9 5 A 3 . 2 间接酶联免疫吸附试验( 间接 E L I S A ) 将超声波抗原包被于聚苯乙烯微量反应板。然后, 依次结合待测抗体( 第一抗体) 和酶标抗体( 第二 抗体) 。显色后, 测读4 9 2 n m 处的O D值, 待测标本O D值超过阴性标本2 . 1 倍者可判为阳性。 A 3 . 3 斑点酶联免疫吸附试验( D o t - E L I S A ) 将超声波抗原包被于0 4 5 da m的硝酸纤维膜, 以下步骤与间接E L I S A相同, 过氧化氢一 四氯一 禁酚为 底物有蓝色斑点者为阳 性, 无蓝色为阴性。
15、以血清最高稀释度出现阳性者为滴度判定终点。 病人血清滴 度大于等于1 : 2 0 或双份血清滴度呈4 倍增长者有诊断意义。 A 4 培养荃制备方法 A 4 . 1 K o r t h o f 培养基成分和制备方法 A 4 . 1 . 1 成分 蛋白 陈( 可用胰蛋白 膝代替) 4 0 0 m g 抓化钠( N a C D 7 0 0 m g 氯化钾( K C l ) 2 0 m g 碳酸氢钠( N a H C 0 , ) 1 0 m g 磷酸二氢钾( K H , P O , ) 1 2 0 m g 碳酸氢二钠( 1 2 个结晶水) ( N a 2 H P 0 , 1 2 H 2 0 ) 4 4
16、 0 m g 氯化钙(CaCl2) 2 0 m g ( 如高压灭菌或煮沸后出沉淀, 可省去此成分) 蒸馏水5 0 0 m L A 4 . 1 . 2 制法 A 4 . 1 - 2 . , 将以上成分溶于燕馏水中煮沸2 0 m i n 过滤, 校正p H为7 . 2 , 分装于烧瓶内, 每瓶1 0 0 m L , 1 5 磅3 0 m i n 高压灭菌。 A 4 . 1 . 2 . 2 兔血清5 6 C 3 0 m i n 灭活。 A 4 . 1 . 2 . 3 将A 4 . 1 . 2 . 1 液tW无菌操作加入灭活兔血清最后浓度为8 % 1 0 0 0 , A 4 . 2 T e p c k
17、, “ 培养基( 磷酸盐缓冲溶液) 成分和制备方法 母液1 / 1 5 m o l / L N a 2 H P O , 1 2 H 2 0 1 2 g / 5 0 0 m L蒸馏水 磷酸缓冲液1 / 1 5 m o l / L K H Z P O , 4 . 5 g / 5 0 0 m L蒸馏水 取 1 / 1 5 m o l / L N a 2 H P 0 , 1 2 H 2 0 8 0 M I 、 1 / 1 5 m o l / L K H 2 P O , 2 0 m L , 混匀, 调整 p H 7 . 2 7 . 4 , 加入蒸馏水9 0 0 m l 混匀, 分装入试管, 并用1 5
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